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Aplicación de interferencia CRISPR (CRISPRi) para silenciamiento de genes en especies patógenas de Leptospira
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Application of CRISPR Interference (CRISPRi) for Gene Silencing in Pathogenic Species of Leptospira
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Aplicación de interferencia CRISPR (CRISPRi) para silenciamiento de genes en especies patógenas de Leptospira

DOI:
10.3791/62631-v

•

14:49 min

•

August 14, 2021

•

, , ,
1Infectious Bacterial Diseases Research Unit, National Animal Disease Center, Agricultural Research Service,United States Department of Agriculture, 2Laboratório de Desenvolvimento de Vacinas,Instituto Butantan

Chapters

  • 00:04Introduction
  • 02:56Protospacer Definition and Plasmid Construction
  • 04:24Leptospira Transformation by Conjugation
  • 09:35Colony Selection and Transconjugant Growth and Validation
  • 13:01Representative Results
  • 13:51Conclusions

Summary

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Aquí, se describe la aplicación de la interferencia CRISPR (CRISPRi) para el silenciamiento de genes específicos en especies de Leptospira. Las células de leptospira se transforman por conjugación con plásmidos que expresan dCas9 (catalíticamente "muerto" Cas9) y un ARN de guía única (sgRNA), responsable del emparejamiento de bases a la diana genómica deseada. Se presentan métodos para validar el silenciamiento génico.

Tags

CRISPR InterferenceCRISPRiGene SilencingLeptospiraPathogenic SpeciesHornsby-Alt-Nally MediaLeptospirosisGenetic ToolsDCas9Single-guide RNAIn Vitro ResearchVaccine Development

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