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Eine semi-High-Throughput-Anpassung des NADH-gekoppelten ATPase-Assays zum Screening kleiner Molekülinhibitoren
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JoVE 신문 생화학
A Semi-High-Throughput Adaptation of the NADH-Coupled ATPase Assay for Screening Small Molecule Inhibitors
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Eine semi-High-Throughput-Anpassung des NADH-gekoppelten ATPase-Assays zum Screening kleiner Molekülinhibitoren

DOI:
10.3791/60017-v

•

10:28 min

•

August 17, 2019

•

, , , ,
1Department of Molecular Medicine,The Scripps Research Institute, 2Department of Neuroscience,The Scripps Research Institute, 3Laboratory of Molecular Physiology, NHLBI,National Institutes of Health

Chapters

  • 00:04Title
  • 00:46Measuring ATPase Activities and Inhibitory Effects of Small Molecule Inhibitors
  • 05:48Analyzing Data
  • 07:54Results: Fluorescence Intensity
  • 09:26Conclusion

Summary

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Ein Nicotinamid-Adenin-Dinukleotid (NADH)-gekoppelter ATPase-Assay wurde an das semihohe Durchsatzscreening von kleinen Molekül-Myosininhibitoren angepasst. Dieser kinetische Assay wird in einem 384-Well-Mikroplattenformat mit einem Gesamtreaktionsvolumen von nur 20 l pro Brunnen ausgeführt. Die Plattform sollte für praktisch jedes ADP-produzierende Enzym gelten.

Tags

ATPase AssayNADH-coupledSemi-high-throughput ScreeningActinMyosin IIEnzyme InhibitorsCalibrationPositive And Negative Controls

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