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单粒子冷冻电子显微镜在结构中测定脂质敏感分通道 trpc3 的表达与纯化
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Expression and Purification of the Human Lipid-sensitive Cation Channel TRPC3 for Structural Determination by Single-particle Cryo-electron Microscopy
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单粒子冷冻电子显微镜在结构中测定脂质敏感分通道 trpc3 的表达与纯化

DOI:
10.3791/58754-v

•

08:27 min

•

January 07, 2019

•

, , , , ,
1Van Andel Institute, 2Vollum Institute, 3Janelia Research Campus

Chapters

  • 00:04Title
  • 00:34Infection of HEK293 Mammalian Cells with P2 Baculovirus for Large-scale Protein Expression
  • 02:42Purification of hTRPC3 Protein from the Frozen Cell Pellet
  • 05:26Results: Structural Determination of hTRPC3
  • 07:36Conclusion

Summary

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该协议描述了用低温电子显微镜测定离子通道结构的技术, 包括用于以最小的努力和毒性在哺乳动物细胞中有效表达基因的杆菌病毒系统, 蛋白质提取、纯化、和质量检查, 样品网格的制备和筛选, 以及数据的收集和处理。

Tags

TRPC3Ion ChannelProtein ExpressionProtein PurificationSingle-particle Cryo-electron MicroscopyHEK293 CellsVirus InfectionSodium ButyrateDetergent SolubilizationSize-exclusion ChromatographyUltracentrifugation

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