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哺乳類細胞におけるCRISPR / Cas9媒介遺伝子ノックアウトの選択依存性および独立した世代

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JoVE 신문 유전학

Selection-dependent and Independent Generation of CRISPR/Cas9-mediated Gene Knockouts in Mammalian Cells

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哺乳類細胞におけるCRISPR / Cas9媒介遺伝子ノックアウトの選択依存性および独立した世代

DOI:

10.3791/55903-v

•

11:35 min

•

June 16, 2017

•

Erin L. Sternburg, Kristen C. Dias, Fedor V. Karginov

¹Cell Biology and Neuroscience,University of California, Riverside

Chapters

00:05Title
00:57Transfection of CRISPER Component into Cultured Cells and Drug Selection
02:31Isolation of Clonal Populations
03:53Screening Candidates by Dot Blot
06:30Screening Candidates by Colony PCR
08:59Results: Knockout Cell Lines Generated by Two CRISPER/Cas9 Methods
10:40Conclusion

Summary

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体細胞株を遺伝子操作する能力の最近の進歩は、基礎研究および応用研究の大きな可能性を秘めている。ここでは、選択マーカーを使用した場合と使用しない場合の、哺乳類細胞株におけるCRISP / Cas9生成ノックアウト産生およびスクリーニングのための2つのアプローチを提示する。

Tags

CRISPR/Cas9 Gene Knockout Nonhomologous End Joining Homology-directed Repair T-REx-293 Cells Transfection Drug Selection Clonal Isolation

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