우리는 초고성능 액체 크로마토그래피를 사용하여 단일 땅콩 종자에서 아플라톡신과 스틸베노이드 피토알렉신의 정량화를 위한 중간 처리량 방법을 보여줍니다. 이 방법은 aflatoxigenic Aspergillus 종에 의해 도전 된 야생 아라 키스 종의 분석을 위해 특별히 개발되었습니다.
아플라톡신은 일부 곰팡이 종, 특히 Aspergillus flavus의 발암성이 높은 2 차 대사 산물입니다. 아플라톡신은 종종 땅콩을 포함하여 경제적으로 중요한 농산물을 오염시켜 인간과 동물의 건강에 높은 위험을 초래합니다. 좁은 유전 적 기반으로 인해 땅콩 품종은 곰팡이 병원균에 대한 저항성이 제한적입니다. 따라서 아스페르길루스 에 대한 내성을 가진 수많은 야생 땅콩 종은 과학자들에 의해 질병 저항성의 원인으로 상당한 고려를 받았습니다.
아플라톡신에 대한 내성을 위해 식물 생식질을 탐구하는 것은 아플라톡신 축적이 정규 분포를 따르지 않기 때문에 어렵습니다., 이는 수천 개의 단일 땅콩 씨앗의 분석의 필요성을 지시합니다. 충분히 수분을 공급한 땅콩(Arachis spp.) 씨앗은 아스페르길루스 종에 감염될 때 방어적인 파이토알렉신으로 간주되는 생물학적으로 활성화된 스틸벤(스틸베노이드)을 생산할 수 있습니다. 땅콩 스틸벤은 곰팡이 발달과 아플라톡신 생성을 억제합니다. 따라서 아스페르길루스 침입에 대한 종자 저항성/감수성의 특성을 설명하기 위해 땅콩 스틸베노이드에 대한 동일한 종자를 분석하는 것이 중요합니다. 발표 된 방법 중 어느 것도 아플라톡신 및 / 또는 스틸벤 피토 알렉신에 대한 단일 종자 분석을 제공하지 않습니다.
우리는 환경 친화적이고, 저렴한 소모품을 사용하며, 민감하고 선택적인 방법에 대한 요구를 충족시키려고 노력했습니다. 또한 이 방법은 종자의 절반만 사용하고 배아 축을 포함하는 나머지 절반은 그대로 두기 때문에 비파괴적입니다. 이러한 기술은 아플라톡신 및 스틸베노이드 분석에 사용된 동일한 종자에서 땅콩 식물의 발아 및 성장을 완전히 성숙시킬 수 있습니다. 이 방법의 통합 부분인 Aspergillus로 씨앗을 수동으로 도전하는 것은 방법의 다른 단계에 비해 더 많은 시간과 노력이 필요한 제한 단계입니다. 이 방법은 아스페르길루스에 내성이 있는 종을 식별하고 이 곰팡이 병원체에 대한 유전적 내성의 새로운 원인을 결정하고 특성화하기 위해 야생 아라키스 생식질을 탐색하는 데 사용되었습니다.
땅콩(Arachis hypogaea L.)은 세계의 주요 식량 작물 중 하나입니다. 100개국 이상에서 재배되고 있으며 총 생산량은 4,500만 톤을 초과합니다1. 땅콩, 옥수수, 목화씨와 같은 농산물은 종종 아플라톡신을 생산하는 토양 태생 곰팡이인 아스페르길루스(Aspergillus) 종에 의해 침입받는다2. 이러한 상품은 환경 조건이 고온과 가뭄으로 특징 지어질 때 수확 전 아플라톡신 오염에 특히 취약합니다. 아플라톡신은 알려진 가장 강력한 발암 물질 중 하나입니다3. 그들은 전 세계 농산물의 4분의 1을 오염시키며4 세계 인구의 약 절반이 아플라톡신에 만성적으로 노출되고 있다5. 그들의 높은 발암성 및 독성 때문에, 음식에 있는 아플라톡신의 존재는 세계의 대부분의 국가에서 가장 낮게 실질적으로 수락가능한 한계에 통제된다6.
유럽 연합 (EU)은 아플라톡신 B1의 경우 최대 2ng / g, 총 아플라톡신 (B1, B2, G1 및 G2)의 경우 최대 수준을 법제화했습니다7. 이러한 낮은 한도는 아플라톡신으로 오염된 상품을 가공하는 농업과 식품 산업에 상당한 압력을 가합니다. 오염 된 땅콩의 아플라톡신 모니터링 및 재 처리는 아플라톡신이 먹이 사슬에 들어가는 것을 방지하기 위해 수동적이고 비용이 많이 드는 전략으로 간주 될 수 있습니다. 그런 이유로 땅콩 공업의 모든 중요한 부분은 수시로 진균성 질병에 한정된 저항을 보여주는 현재 땅콩 품종의 아플라톡신 오염 때문에 거창한 이윤 손실을 경험합니다. 아플라톡신 문제를 해결하기 위한 전향적 인 접근법은 유전자 내성, 즉 저항성 야생 땅콩 종에서 엘리트 품종으로의 유전 정보 전달을 통해 곰팡이 저항성 땅콩 품종을 얻는 것입니다. 최근 몇 년 동안(8,9), 야생 땅콩 종은 재배된 땅콩의 좁은 유전적 기반이 더 이상 땅콩 식물(10,11)에 필요한 수준의 저항성 특성을 제공할 수 없기 때문에 유전병 저항성의 원인으로 상당한 고려를 받았습니다. 야생 땅콩 종으로부터의 성공적인 침입을 위해서는 수천 개의 작고 희소한 단일 종자에 대한 분석이 필요하다(그림 1A) 12.
그림 1: 단일 종자 분석 순서도. (A) 다양한 시장형 땅콩 품종과 야생 아라키스 품종의 크기 비교. (1) 버지니아; (2) 주자; (3) 스페인어; (4) 야생 아라키스 종. (B) 야생 아라키스 종(플레이트 A, 종자 4)은 세 부분으로 절단, (5) 배아 축이 있는 절반 종자; 씨앗의 이 부분은 식물(E)을 키우는 데 사용됩니다. (C) 부품 (6) 및 (7)은 드릴 비트로 뚫고 (D) 곰팡이 포자를 접종합니다. 30 ° C에서 72 시간 동안 배양 한 후 종자 부분 중 하나 인 (6) 또는 (7)은 아플라톡신 및 식물 알렉신 분석에 사용되고 다른 하나는 RNA / 전사체 시퀀싱에 사용됩니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
곰팡이 병원균에 대한 땅콩 저항성은 식물성 알렉신 13,14,15,16,17과 밀접한 관련이 있습니다. 땅콩 파이토알렉신은 외인성 자극, 특히 곰팡이 침입에 노출된 후 식물 조직에 생합성되고 축적되는 항균성 스틸베노이드로 대표됩니다 16,17,18. 곰팡이 침입 부위에 충분한 농도의 파이토알렉신이 빠르게 축적되는 것은 곰팡이 성장을 억제하며 식물 방어에 중요합니다 19,20,21. 병원체는 phytoalexins가 억제 농도16,22로 축적되면 성장을 멈춥니다. 땅콩의 아플라톡시겐 균류에 대한 방어 화합물로서의 스틸베노이드의 역할은 현장 실험13에서 30년 전에 평가되었습니다. 이러한 실험은 땅콩 스틸베노이드가 수확 전 아플라톡신 오염에서 중요한 저항 요소라는 가설을 명확하게 뒷받침했습니다. 이러한 증거는 스틸벤이 현장에서 손상된 땅콩에서 자연적으로 생성된다는 사실에 근거합니다. 스틸벤은 아플라톡시겐 균류에 대해 상당한 생물학적 활성을 보여줍니다. 그리고 씨앗의 아플라톡신 오염은 땅콩이 가뭄으로 인한 종자 탈수로 인해 식물성 알렉신 합성 능력을 잃었을 때만 감지되었습니다. 또 다른 현장 실험에서는 식물성 알렉신 생산과 농업적으로 중요한 땅콩 질병에 대한 땅콩 유전자형 저항성 사이의 연관성을 확인했다17.
곰팡이 침입에 대한 땅콩 저항성의 자연적인 phytoalexin 기반 메커니즘에 대한 더 나은 이해는 아플라톡신 오염15,17의 통제를위한 유망한 전략입니다.따라서, 아플라톡신 분석 외에도, phytoalexins에 대해 동일한 씨앗을 정량적으로 분석하는 것이 중요합니다. 이러한 저항성 메커니즘은 완전히 연구되고 이해되지 않았지만, 새로운 곰팡이 저항성 품종을 위해 땅콩 식물을 육종하고 유전자 변형하는 데 매우 중요하다23. 다른 상품에서 아플라톡신 결정을위한 다양한 분석 절차가 존재함에도 불구하고, 특히 전통적인 방법이 분석 및 비용 효율적인 요구 사항을 충족시키지 못하는 경우 특정 연구를위한 간단한 방법에 대한 필요성이 여전히 있습니다. 땅콩 산업, 농업 및 개인 실험실에서 사용하는 대부분의 최신 청소 방법은 항체 기반24 및 면역 분석25,26,27 장치입니다. 이 제품은 선택적이고 민감하지만 일반적인 흡착제로 채워진 미니컬럼보다 훨씬 비쌉니다. 또한 이러한 방법 중 어느 것도 몇 밀리그램 무게의 샘플 분석을 위해 설계되지 않았습니다. 마그네슘 실리카겔(Florisil)로 충전된 미니컬럼28의 분석적 사용에 대한 이전 연구를 바탕으로, 당사는 현재 및 장래의 사전 육종 및 육종 프로그램의 요구에 맞게 이 절차를 수정했습니다.
이 작업의 목적은 단일 땅콩 종자에서 아플라톡신과 식물성 알렉신의 정량적 측정을 위한 비파괴, 중간 처리량, 환경 친화적인 방법을 개발하는 것이었습니다. 이러한 방법이 개발되어 왔습니다. 발표 된 방법에 비해 장점은 더 높은 감도, 단일 종자 추출물에서 아플라톡신 및 피토 알렉신을 분석 할 수있는 능력, 샘플을 계량 할 필요가 없으며 소모품의 부피가 작기 때문에 비용이 저렴하다는 것입니다. 적분법의 흐름도는 그림 1에 나와 있습니다. 유전자 분석 및 기타 단계는이 텍스트에 언급되어 있으며 제안 된 방법의 중요성과 전체 절차와 어떻게 통합되는지를 보여주기 위해 그림에 설명되어 있습니다.
이전의 경험28을 바탕으로, 우리는 아스페르길루스에 내성이 있는 종을 식별하고 이 기회주의적 곰팡이에 대한 유전적 저항성의 새로운 원천을 결정하고 특성화하기 위해 야생 아라키스 생식질 수집을 탐색하는 데 적합한 간단하고 저렴하며 환경 친화적인 화학 절차를 개발했습니다. 이 방법은 고체상 추출(SPE) 기술에 의한 종자 추출물 정제와 초고성능 액체 크로마토그래피(UPLC)에 의한 아플라톡신 정량을 기반으로 하며 충분히 높은 회수율, 정밀도 및 정확도가 특징입니다. 제안된 “Florisil” 방법은 아플라톡신을 강력하고 선택적으로 유지하기 위해 Florisil(마그네슘 실리카겔)의 고유한 특성을 기반으로 하는 단일 미니컬럼 세척 절차의 수정입니다(28). 원래 방법에서와 같이 종자 샘플은 MeOH-H2O 혼합물로 추출되었지만 발표 된 80 : 20 (v / v)과 비교하여 90 : 10 (v / v)의 다른 비율로 추출되었습니다. 이 변화는 동일한 아플라톡신 회수율로 클린업 컬럼을 통한 용매의 유속을 최대 2.5 배까지 증가시켰다. 이 90 : 10 (v / v) 메탄올 – 물 혼합물은 아플라톡신 B1, B2, G1 및 G2 표준물질의 거의 100 % 회수를 제공했으며, 기판 1g에서 아플라톡신 농도의 5-50 ng에 해당하는 스파이크 수준에서 용매를 추출하는 데 추가되었으며, 스파이크 된 땅콩 종자 샘플에서 충분히 높은 회수율을 제공했습니다 (표 1).
아플라톡신은 아세톤30, 아세톤-메탄올31,32 및 아세톤-물 혼합물 33,34,35,36의 대량으로만 Florisil 흡착제에서 용출 될 수 있음이 밝혀졌습니다. 현재 연구 과정에서, 우리는 산성화 된 아세토 니트릴이 Florisil에서 아플라톡신을 용출하는 능력에서 아세톤과 유사하게 행동한다는 것을 발견했습니다. 우리가 아는 한, 아세토니트릴의 이러한 특성은 문헌에 보고되지 않았습니다. 이 특성이 발견됨에 따라 용매 증발 단계를 생략하고 정제된 추출물을 UPLC 시스템에 직접 주입할 수 있어 준비 시간이 크게 단축됩니다. 아세토니트릴을 아세톤(아세톤-아세토니트릴-물-88% 포름산(65:31:3.5:0.5, v/v))과 혼합한 경우에도 정제된 용리액에서 물을 부드럽고 완전하며 빠르게 제거하여 용매 증발 시간을 크게 단축했습니다. 아세토니트릴의 존재로 인해 단일 용매인 메탄올-물(90:10, v/v) 혼합물을 사용하여 메탄올 및 클로로포름-메탄올 혼합물의 두 가지 추가 세척 용매가 필요한 게시된 방법과 비교하여 Florisil 컬럼에서 불순물을 효과적으로 제거할 수 있었습니다. 28의
평균적으로, 아플라톡신 B1 표준 회수율은 아플라톡신의 용출을 위해 1.2 mL를 사용할 때 ~ 98 %이었다. 50mg의 Florisil 함량은 1.2mL의 용출 용매가 미니 컬럼을 배럴 상단까지 채우는 동시에 만족스러운 회수율을 제공하도록 선택되었습니다(표 1). 이 접근 방식은 컬럼 배럴을 한 번만 채우면 되므로 정리 절차를 가속화합니다. 이 프로젝트의 초기 단계에서는 입자 크기가 상대적으로 큰 100-200 메쉬의 상업용 Florisil 분획이 흡착제의 3mm 층만 있는 작은 컬럼에 적합한지 여부가 명확하지 않았습니다. 따라서 우리는 미국 표준 테스트 체 120-140, 140-170, 170-200, 200-270, 270-400 및 >400 메쉬를 사용하여 상용 100-200 메쉬 제품에서 얻은 다양한 Florisil 분획을 탐색했습니다. 이러한 모든 분획은 재현 가능하고 만족스러운 회수율과 거의 일치하는 결과를 제공했습니다. 더 작은 입자 크기 분획은 UV 빛의 밑에 란에 있는 더 좁은 아플라톡신 밴드를 보여주었지만, 그 분획은 상업적인 100-200 메시 제품에 어떤 면에서도 우량하지 않았다. 또한 100-200 메시 분획은 전체 절차에서 가장 짧은 용리 시간(8-12분)을 보여주었습니다.
그래디언트 UPLC 용매 전달은 아플라톡신의 만족스러운 분리뿐만 아니라 컬럼에서 비극성 불순물을 완전히 제거할 수 있게 했습니다(그림 5G). 이 접근 방식은 완벽한 컬럼 작동과 수백 개의 샘플 분석에서 재현 가능한 결과를 이끌어 냈습니다. Florisil 컬럼에서 용출 된 아플라톡신의 정체는 앞서 설명한 바와 같이 확인되었다. 28 여기에 사용 된 3mm 직경의 분석용 UPLC 컬럼은 동일한 화학 물질의 2.1mm 직경 컬럼에 비해 더 높은 농도에서 아플라톡신 B1, B2, G1 및 G2 의 더 높은 선택성과 더 안정적인 분리를 보여주었습니다. 또한 3mm 컬럼의 수명(1,200회 주입 이상)은 2.1mm 컬럼(최대 800회 주입)보다 훨씬 높았습니다. 3mm 컬럼은 더 높은 이동상 속도(40% 이상)가 필요했지만, 이러한 단점은 위의 컬럼의 장점보다 성능이 뛰어났습니다.
Florisil 미니컬럼은 Aspergillus 대사산물로 심하게 오염된 땅콩 종자 추출물의 정제에 효과적이었습니다(그림 5G). 이러한 씨앗에는 또한 곰팡이 침입에 대한 반응으로 씨앗에 의해 생성 된 높은 수준의 스틸베노이드 식물 알렉신이 포함되어 있습니다. 이러한 모든 불순물은 최대 106 배22까지 씨앗의 아플라톡신 농도를 초과 할 수 있으며, 이는 이러한 씨앗을 아플라톡신 분석을위한 도전적인 물체로 만듭니다. 그림 5G 는 아플라톡신 머무름 시간 내에 크로마토 그램에서 간섭 피크가 없음을 보여주며, 이는 테스트 된 모든 수준에서 아플라톡신 검출 및 정량화를 손상시키지 않았습니다 (표 1). 표 1에서 볼 수 있듯이, 방법의 정확도와 정밀도는 1.0-50.0 ng / g의 테스트 범위 내에서 충분히 높았으며, 이는 아플라톡신 검출을위한 가장 중요한 범위이기도합니다. 다양한 야생 땅콩 유전자형에 대한 다양한 수준의 회수율은 균일했으며 5가지 다른 추출에 대한 표준 편차는 본질적으로 낮았습니다.
이 방법은 또한 땅콩, 면화, 옥수수 및 쌀 종자에 대해 테스트되었으며, 총 아플라톡신의 10,000 ng / g 이상에서 0에서 매우 높은 수준으로 자연적으로 오염되었습니다. 옥수수, 목화씨 및 쌀에서 아플라톡신 B1, B2, G1 및 G2 의 회수율은 5 ng / g 수준에서 각각 76.1 %에서 93.7 %, 77.1 %에서 86.6 %, 90.5 %에서 96.2 %까지 다양했습니다. 쌀에서 아플라톡신의 가장 높은 회수율은 용리액의 “순도”, 즉 사실상 불순물의 부족을 동반했습니다. 또한, 쌀은 평균 19mg/종자를 테스트한 가장 작은 단일 대상을 나타냈습니다.
Florisil 컬럼을 사용한 단일 땅콩 종자에 대한 총 준비 시간(껍질 벗기기, 계량, 추출, 원심분리 및 정제 포함)은 20분을 초과하지 않았습니다. Florisil 미니컬럼의 비용은 상업용 클린업 컬럼보다 >10배 저렴합니다. 추가적인 절감은 발표된 절차28에 비해 더 적은 양의 흡착제, 용매 및 질소 가스를 사용함으로써 파생됩니다. 미니컬럼은 작동하는 데 펌핑 또는 진공 장치가 필요하지 않으며 보관 수명이 무제한입니다.
아플라톡신에 대한 저항성을 위해 식물 생식질을 탐색하는 것은 마이코톡신 축적이 정규 분포를 따르지 않기 때문에 매우 어렵습니다37,38; 이 현상을 극복하기 위해 단일 종자에서 많은 수의 아플라톡신 분석이 필요합니다. 아플라톡신 함량 외에도 정량적 식물성 알렉신 조성에 대한 정보는 단일 종자 (그림 1A)에서 얻을 수 있고 특정 식물 (그림 1E)로 추적 할 수있는 많은 정보에 비추어 매우 가치가 있습니다. 이 방법은 재래종, 고급 육종 계통 및 엘리트 땅콩 품종을 포함한 수백 개의 가입을 선별하는 데 성공적으로 사용되었습니다. 이 방법은 땅콩 사전 육종 및 육종 연구 프로그램에 사용하기 위해 제안되며 곰팡이 저항성에 대한 땅콩 유전자의 특성화에 도움이 될 수 있습니다.
The authors have nothing to disclose.
이 작업은 USDA-ARS CRIS 프로젝트 6044-42000-011-00D 및 CRIS 프로젝트 6044-21000-005-000-D의 재정 지원을 받았습니다. 미니칼럼 고정 랙을 만들어 준 Dan Todd에게 감사드립니다. 이 문서에서 상표명 또는 상업용 제품에 대한 언급은 특정 정보를 제공하기 위한 목적으로만 사용되며 미국 농무부(US Department of Agriculture)의 권장 또는 보증을 의미하지 않습니다.
Acetone, Optima | Fisher Scientific | A929-4 | |
Acetonitrile, Optima | Fisher Scientific | A996-4 | |
Acquity BEH C18 2.1 x 5mm Van-Guard pre-column | Waters Corporation | 186003975 | |
Acquity BEH C18 3 x 100mm column | Waters Corporation | 186004661 | |
Acquity BEH C18 2.1 x 100mm column | Waters Corporation | 186002352 | |
Aflatoxins B1, B2, G1, and G2 | Sigma-Aldrich | A9441-1VL | Dissolve the contents of the commercial vial in 5 mL of methanol to obtain 5 µg/mL for aflatoxins B1 and G1 and 1.5 µg/mL for B2 and G2 |
Aflatoxin B1 (1mg) | Sigma-Aldrich | A6636-1MG | |
Aflatoxin B2 (1mg) | Sigma-Aldrich | A9887-1MG | |
Aflatoxin G1 (1mg) | Sigma-Aldrich | A0138-1MG | |
Aflatoxin G2 (1mg) | Sigma-Aldrich | A0263-1MG | |
Aflatoxin M1 (10 µg) | Sigma-Aldrich | CRM46319 | |
Agar, Granulated (2kg) | Becton Dickinson | BD214510 | |
Alumina oxide basic (60-325 mesh) | Fisher Scientific | A941-500 | |
Basal medium | Murashige and Skoog | M5519 | |
Bead Ruptor 24 | Omni International | 19-042E | |
Beaker (1000mL) | Corning (Pyrex) | 10001L | |
Beaker (250mL) | Corning (Pyrex) | 1000250 | |
Beaker (400mL) | Corning (Pyrex) | 1000400 | |
Beaker (600mL) | Corning (Pyrex) | 1000600 | |
Blade, scalpel | Feather | #10 | |
Centrifuge (LSE Compact) | Corning | Model: 6755 | |
Centrifuge, micro | Corning | Model: 6770 | |
Ceramic beads (2.8 mm) | Omni International | 19-646 | |
Ceramic beads (6.5 mm) | Omni International | 19-682 | |
Chromeleon 7 series Software | Thermo Scientific | ||
Drill bit | Kyocera | 07896 | 1.6 mm |
Drill bit | Kyocera | 07357 | 2.0 mm |
Drill bit | Kyocera | 07985 | 2.34 mm |
Ethanol (200 proof) | Decon Labs | 2805M | |
Evaporator, nitrogen | organimation | 11106 | 6-position |
Excel, Microsoft | Microsoft | Office 365 | |
Filter paper (#4) | Cytiva Whatman | 1004-090 | |
Filter paper cutter, stainless steel (ID 11.5mm) | Unknown | ||
Filter paper, glass fibre | Cytiva Whatman | 934-AH | |
Flask (2800mL) | Corning (Pyrex) | 44202XL | |
Florisil (100-200 mesh) | Fisher Scientific | F101-500 | |
Forceps | Integra Lifescience (Miltex) | PM-0300 | |
Formic acid (88%, ACS) | Fisher Scientific | A118P-500 | |
Freezer (-80oC) | Fisher Scientific | TSX70086D | |
Funnel (15 x 80mm) | DWK Life Sciences (Kimax) | 2902060 | |
Gelzan (medium) | Caisson Labs | G024 | |
Glass rod (custom) | Custom made | ||
Glass wool | Corning (Pyrex) | 3950 | |
Handle, scalpel | Feather | #7 | |
Hemocytometer | Hausser Scientific | 3100 | |
Hydrogen peroxide | Fisher Scientific | H325-4 | 30%, Certified ACS |
Ice bucket, round with lid | Corning | 432122 | |
Incubator | Percival | 136VL | |
Kimtech SCIENCE Brand Kimwipes | Kimtech | 34120 | 8.2" x 4.39" |
Kimtech SCIENCE Brand Kimwipes | Kimtech | 34256 | 16.4" x 14.43" |
Lab coat | Cenmed | B113660SBXL | |
Methanol, Optima | Fisher Scientific | A454-4 | |
Mini column rack (custom) | Custom made | ||
Mixer, touch (maxi mix II) | Thermolyne | 37600 (model 231) | |
Nitrile gloves | Microflex | XC310M | |
Nitrogen gas, compressed (ultra high purity) | Jones Welding | ||
Paper towel | Georgia-Pacific | 20023 (D400) | |
pH meter | Fisher Scientific (Accumet) | 13-636-AB15 | |
pH/ATC electrode | Fisher Scientific (Accumet) | 13-620-111 | |
PhCR Photochemical Reactor | Waters (Vicam) | 600001222 | |
Pipette, pasteur | Fisher Scientific | 13-678-20D | 9" |
Pipettor (1 mL) (Reference 2) | Eppendorf | 4924000088 | |
Pipettor (10 μL) (Reference) | Eppendorf | 022470051D | |
Pipette tips: 10 μL, 200 μL, 1 mL | Eppendorf | F144054M | |
Pipettor (200 µL)(Ergofit) | Fisher Scientific | 12-146-679 | |
Plates, petri (100x15mm) | Fisher Scientific | FB0875713 | |
Potato Dextrose Agar (500g) | Becton Dickinson | BD213400 | |
Reinforced bead tube (2 mL) | Omni International | 19-660 | |
Reinforced bead tube (7 mL) | Omni International | 19-651 | |
Repipettor, Dispensette III (10mL) | Brandtech | 4701141 | |
Resveratrol | Sigma-Aldrich | R5010-100MG | |
Scoop (custom) | Custom made | ||
screwcap jar (250 mL) | Corning (Pyrex) | 1395250 | |
Silica gel, spherical (200-400 mesh) | Supelco | 97727-U | 100 g |
Sodium Hydroxide | Fisher Scientific | S318-500 | |
SPE extract clean 1.5-mL polypropylene column | American Chromotography Supplies | SP-5122382 | |
SPE extract clean PP frits (for 1.5 mL minicolumn) | American Chromotography Supplies | SP-3119414 | |
Spectrophotometer, UV-visible | Fisher Scientific | 14-385-351 (Genesys 50) | |
Test tube | Corning (Pyrex) | 982516X | 16x125mm |
Test tube (Disposable)(16x125mm) | Fisher Scientific | 14-961-31 | |
Test tube (Disposable)(150x250mm) | Fisher Scientific | 14-961-34 | |
Thermo Vanquish DAD detector (UPLC) | Thermo Scientific | VF-D11-A-01 | |
Thermo Vanquish Fluourescense detector (UPLC) | Thermo Scientific | VF-D51-A | |
Thermo Vanquish quaternary pump F (UPLC) | Thermo Scientific | VF-P20-A | |
Thermo Vanquish Split Sampler FT (UPLC) | Thermo Scientific | VF-A10-A-02 | |
Tween 20 (polysorbate 20) (enzyme grade) | Fisher Scientific | BP337-500 | |
Vial caps (4mL) | Fisher Scientific | C4015-75A | |
Vial caps (autosampler) | Fisher Scientific | C4010-60A | |
Vials & caps (16 mL) | Thermo Scientific | B7800-4 | |
Vials, glass (4mL) | Fisher Scientific | C4015-1 | |
Vials, polypropylene (autosampler) (400mL) | Fisher Scientific | C4010-11 | |
Water, Optima | Fisher Scientific | W6-4 |