मानव न्यूट्रोफिल में न्यूट्रोफिल बाह्य जाल गठन की मात्रा निर्धारित करने के लिए वास्तविक समय उच्च थ्रूपुट तकनीक

न्यूट्रोफिल बाह्य कोशिकीय जाल (एनईटीएस) विभिन्न भड़काऊ उत्तेजनाओं के जवाब में न्यूट्रोफिल से निकाले गए वेब जैसी क्रोमैटिन संरचनाएं हैं। एनईटीएस डीएनए, हिस्टोन और विभिन्न एंटी-माइक्रोबियल प्रोटीन/पेप्टाइड्स से बने होते हैं, जो संक्रामक रोगजनकों को फंसाते हैं और मारते हैं और भड़काऊ प्रतिक्रियाओं का आह्वान करते^हैं।

जबकि एनईटीएस रोगजनकों के खिलाफ मेजबान रक्षा के लिए फायदेमंद हैं, उन्होंने विभिन्न ऑटोइम्यून बीमारियों², घनास्त्रता³, चयापचय रोगों⁴, और कैंसर 5 के मेटास्टेटिक विकास के संभावित^{चालक के रूप} में ध्यान आकर्षित किया है। जैसे, नेट गठन का निषेध इन बीमारियों के लिए एक संभावित चिकित्सीय विकल्प है। हालांकि, विकास⁶ में कुछ आशाजनक नेट-लक्ष्यीकरण अणुओं के बावजूद, अभी भी कोई अनुमोदित चिकित्सा नहीं है जो विशेष रूप से इस तंत्र को प्रभावित करती है। यह, कम से कम आंशिक रूप से, नेट गठन के लिए उद्देश्य, निष्पक्ष, प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य और उच्च थ्रूपुट परिमाणीकरण विधियों की कमी के कारण है।

हम स्थापित और एक दोहरी रंग लाइव-सेल इमेजिंग मंच ^7,8 का उपयोग कर एक नई विधि की सूचना दी. झिल्ली-पारगम्य परमाणु डाई और झिल्ली-अभेद्य डीएनए डाई के साथ दाग न्यूट्रोफिल की समय-चूक छवियों का विश्लेषण सॉफ्टवेयर द्वारा किया जाता है, और पूर्व और बाद के नेट बनाने वाले न्यूट्रोफिल की संख्या कई समय बिंदुओं पर गिनी जाती है। चूंकि पीकेसीα-मध्यस्थता लैमिन बी और सीडीके 4/6-मध्यस्थता लैमिन ए / सी डिस्सेप्लर⁹ के नियमन द्वारा नेट गठन के दौरान प्लाज्मा झिल्ली की अखंडता खो जाती है, इसलिए नेट बनाने वाले न्यूट्रोफिल झिल्ली-अभेद्य डीएनए डाई द्वारा दाग दिए जाते हैं जबकि स्वस्थ न्यूट्रोफिल नहीं होते हैं। यह विधि नेट गठन की मात्रा निर्धारित करने के लिए पहले से रिपोर्ट की गई तकनीकों की समस्याओं पर काबू पाती है और स्वचालित तरीके से निष्पक्ष, उच्च-थ्रूपुट, प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य और सटीक शुद्ध मात्रा का ठहराव प्रदान करती है।