Evaluering af T Follikulære Hjælpeceller og Germinal Center Response Under Influenza A Virus Infektion i Mus

I det seneste årti har adskillige undersøgelser været fokuseret på den nyligt identificerede CD4⁺ T celle delmængde, Tfh celle delmængde, for sine væsentlige roller i germinal center (GC) B udvikling. B celle lymfom 6 (Bcl6), som hovedsagelig betragtes som et gen repressor, er afstamning-definerende faktor Tfh celler for beviser for, at ektopisk udtryk for Bcl6 er tilstrækkelig til at drive Tfh differentiering, mens mangel på Bcl6 resulterer i forsvundet Tfh differentiering^1,2,3. I modsætning til andre CD4⁺ T hjælper delmængder udfører deres effector funktion ved migration til de steder af inflammation, Tfh celler giver B-celle hjælp primært i B celle follikulær zone milt og lymfeknude. Co-stimulerende molekyler ICOS og CD40L, spiller en væsentlig rolle i samspillet mellem Tfh og GC B celler. Under Tfh differentiering, ICOS sender nødvendige signaler fra cognate B-celler og fungerer også som en receptor modtager migration signaler fra tilskuer B-celler til B cellezone lokalisering^4,5. CD40L er en mediator af signaler fra Tfh celler til B-celler spredning og overlevelse⁶. En anden faktor, der spiller den lignende rolle som CD40L, er cytokinEN IL21, som hovedsageligt udskilles af Tfh-celler. IL21 regulerer direkte GC B-cellers udvikling og produktion af antistoffer med høj affinitet, men dets rolle i Tfh-differentiering er stadig kontroversiel^7,8. PD-1 og CXCR5, som nu hyppigst anvendes til at identificere Tfh-celler i flowcytometrianalyse, spiller også en væsentlig rolle i differentieringen og funktionen af denne delmængde. CXCR5 er receptoren af B-celle follikulært kemokin og formidler lokaliseringen af Tfh-celler i B-cellesække⁹. PD-1 er nu identificeret til ikke kun at have follikulær vejledning funktion, men også sende kritiske signaler i processen med GC B celler affinitet modning¹⁰. Baseret på disse fund kunne evaluering af ekspressionen af disse molekyler dybest set afspejle modningen og funktionen af Tfh-celler.

GC er en induceret forbigående mikroanatomisk struktur i sekundære lymfoide organer og meget afhængig af Tfh-celler, hvilket er en perfekt udlæsning til at evaluere Tfh-respons. I GC, efter at have modtaget signaler medieret af cytokiner og co-stimulerende molekyler, er B-celler underlagt klasseskift og somatisk hypermutation for at generere antistoffer med høj affinitet¹¹. Differential antistof klasseskift forekommer i differentialcytokin niche, hvor IL4 og IL21 fremkaldeR IgG1 klasseskift, mens IFNγ inducerer IgG2 klasseskift¹². Plasmaceller er producenter af udskillede antistoffer og er uhelbredeligt differentierede celler. Ligesom Tfh celler, udvikling af B-celler i GC er forbundet med dynamisk udtryk for mange væsentlige molekyler. Baseret på den aktuelle undersøgelse kan GC B-celler identificeres som B220⁺PNA⁺Fas⁺ eller B220⁺GL7⁺Fas⁺ celler og plasmaceller sammenlignet med deres prækursorer, nedregulerer ekspressionen af B220 og opregulerer CD138-udtryk¹³. Desuden kan begge disse egenskaber påvises i flowcytometry- og immunfluorescensanalyse, hvilket er en passende evaluering af GC-respons.

Robust cellulære og humoristiske reaktioner er induceret i influenzavirus infektion, med Tfh og Th1 celler dominerer CD4⁺ T cellerespons¹⁴, hvilket gør det til en perfekt model for Tfh celler differentiering undersøgelse. Influenza A/Puerto Rico/8/34 H1N1(PR8), som er en almindeligt anvendt musetilpasset stamme, anvendes ofte i denne undersøgelse^14,15,16. Her beskriver vi nogle grundlæggende protokoller for Tfh-undersøgelsesrelevant analyse i influenzavirusinfektion: 1) intranasal podning af PR8-virus; 2) antigenspecifikke Tfh-celler, GC B- og plasmaceller og IL21-detektion med flowcytometri 3) histologisk visualisering af GC; 4) påvisning af antigenspecifik antistoftitler i serum med ELISA. Disse protokoller giver de nødvendige teknikker til nye forskere i Tfh-associeret undersøgelse.