Summary

Methoden voor het testen van endocriene verstoring in fruitvliegje melanogaster

Published: July 03, 2019
doi:

Summary

Endocriene verstorende chemicaliën (Edc’s) vormen een ernstig probleem voor organismen en voor natuurlijke omgevingen. Fruit vliegje melanogaster is een ideaal model om EDC-effecten in vivo te bestuderen. Hier presenteren we methoden om endocriene verstoring in fruitvliegje te onderzoeken, het aanpakken van EDC effecten op Fecundity, vruchtbaarheid, ontwikkelingsstoornissen timing, en de levensduur van de vliegen.

Abstract

In de afgelopen jaren is er steeds meer bewijs dat alle organismen en het milieu worden blootgesteld aan hormoon-achtige chemicaliën, bekend als endocriene verstorende chemicaliën (Edc’s). Deze chemische stoffen kunnen veranderen de normale balans van endocriene systemen en leiden tot negatieve effecten, evenals een toenemend aantal hormonale stoornissen in de menselijke populatie of verstoorde groei en verminderde voortplanting in de wild levende dieren. Voor sommige Edc’s, zijn er gedocumenteerd gezondheidseffecten en beperkingen op het gebruik ervan. Nochtans, voor de meesten van hen, is er nog geen wetenschappelijk bewijsmateriaal in deze betekenis. Om de mogelijke endocriene effecten van een chemische stof in het volledige organisme te verifiëren, moeten we deze testen in geschikte modelsystemen, evenals in de fruitvlieg, melanogaster. Hier rapporteren wij gedetailleerde in vivo protocollen om endocriene verstoring in fruitvliegje te bestuderen, dat EDC gevolgen voor de Fecundity/de vruchtbaarheid, ontwikkelings timing, en levensduur van de vlieg aanpakt. In de afgelopen jaren, gebruikten we deze vlieg fruit levens trekken om de effecten van blootstelling aan 17-α-ethinylestradiol (EE2), Bisfenol A (BPA), en bisfenol AF (BPA F) te onderzoeken. In totaal behandelden deze analyses alle stadia van het fruitvliegje en maakten ze het mogelijk om de endocriene ontwrichting in alle hormoon gemedieerde processen te evalueren. Fecundity/vruchtbaarheid en ontwikkeling timing assays waren nuttig om de EDC impact op de Fly reproductieve prestaties en ontwikkelingsstadia te meten, respectievelijk. Ten slotte, de levensduur assay betrokken chronische EDC blootstelling aan volwassenen en gemeten hun overlevingspensioen. Deze levens eigenschappen kunnen echter ook worden beïnvloed door verschillende experimentele factoren die zorgvuldig gecontroleerd moesten worden. Dus, in dit werk, raden we een reeks van procedures die we hebben geoptimaliseerd voor de juiste uitkomst van deze tests. Deze methoden kunnen wetenschappers vast te stellen endocriene ontwrichting voor een EDC of voor een mengsel van verschillende Edc’s in fruitvliegje, hoewel het endocriene mechanisme verantwoordelijk voor het effect te identificeren, verdere essays nodig zou kunnen zijn.

Introduction

Menselijke activiteiten zijn het vrijgeven van in het milieu een enorme hoeveelheid chemicaliën, die een ernstig probleem voor organismen en voor natuurlijke ecosystemen vertegenwoordigen1. Van deze verontreinigende stoffen wordt geschat dat ongeveer 1.000 verschillende chemicaliën het normale evenwicht van endocriene systemen kunnen veranderen; Volgens deze eigenschap, worden zij geclassificeerd als endocriene verstorende chemische producten (Edc’s). Specifiek, op basis van een recente definitie van de endocriene samenleving, de Edc’s zijn “een exogene chemische stof, of een mengsel van chemicaliën, die kunnen interfereren met elk aspect van hormoon actie”2. In de afgelopen drie decennia zijn er steeds meer wetenschappelijke aanwijzingen dat edc’s de voortplanting en ontwikkeling van dieren en planten3,4,5,6,7, 8. Verder, EDC blootstelling is gerelateerd aan de toenemende prevalentie van sommige ziekten van de mens, met inbegrip van kanker, obesitas, diabetes, schildklier ziekten, en gedragsstoornissen9,10,11.

Algemene mechanismen van EDC

Door hun moleculaire eigenschappen, edc’s gedragen zich als hormonen of hormoon precursoren3,4,5,6,7,8,9, 10,11,12. In deze zin kunnen ze binden aan de receptor van een hormoon en verstoren endocriene systemen, hetzij door het nabootsen van hormoon activiteit of door het blokkeren van endogene hormonen bindend. In het eerste geval, na binding aan de receptor, kunnen ze activeren als zijn natuurlijke hormoon zou doen. In het andere geval, binding van het EDC aan de receptor voorkomt dat de binding van zijn natuurlijke hormoon, zodat de receptor is geblokkeerd en kan niet meer worden geactiveerd, zelfs in de aanwezigheid van zijn natuurlijke hormoon3. Als gevolg daarvan kan Edc’s invloed hebben op verschillende processen, zoals de synthese, secretie, transport, metabolisme, of perifere werking van endogene hormonen die verantwoordelijk zijn voor het onderhoud van de homeostase, voortplanting, ontwikkeling, en/of gedrag van het organisme. Receptor binding is niet de enige manier van handelen tot nu toe beschreven voor de Edc’s. Het is nu duidelijk dat zij ook kunnen handelen door het aanwerven van coactivatoren of corepressors in enzymatische wegen of door het wijzigen van epigenetische markers die genuitdrukking10,11,12,13 dereguleren ,14, met gevolgen niet alleen voor de huidige generatie maar ook voor de gezondheid van generaties om8te komen.

Fruitvliegje hormonen

De potentiële effecten van geselecteerde Edc’s zijn op grote schaal bestudeerd, zowel in wilde dierensoorten als in verschillende modelsystemen waarin endocriene mechanismen redelijk bekend zijn. Voor ongewervelden, endocriene systemen die de groei, ontwikkeling en voortplanting beïnvloeden zijn uitvoerig gekenmerkt bij insecten om verschillende redenen, waarbij hun uitgebreide gebruik op het gebied van biologisch onderzoek, hun economisch belang, en Ten slotte is de ontwikkeling van insecticiden in staat om zich specifiek te bemoeien met het hormoon systeem van plagen insecten.

In het bijzonder, onder insecten, heeft de fruitvlieg D. melanogaster bewezen een zeer krachtig modelsysteem te zijn om de potentiële endocriene gevolgen van edc’s te evalueren. In D. melanogaster, evenals in gewervelde dieren, hormonen spelen een belangrijke rol gedurende de hele levenscyclus. In dit organisme, zijn er drie belangrijke hormonale systemen, die de steroïde hormoon 20-hydroxyecdyson (20e)15,16, de sesquiterpenoid jeugd hormoon (JH)17te betrekken, en de peptiden en peptide/eiwit hormonen18. Deze derde groep bestaat uit verschillende peptiden ontdekt meer recentelijk, maar duidelijk betrokken bij een grote verscheidenheid van fysiologische en gedragsmatige processen, zoals levensduur, homeostase, metabolisme, voortplanting, geheugen, en bewegingscontrole. 20E is homoloog aan cholesterol-afgeleide steroïde hormonen zoals estradiol, terwijl JH sommige gelijkenissen met retinol zuur deelt; beiden zijn de beter bekende hormonen in fruitvliegje19,20. Hun evenwicht is van vitaal belang bij de coördinatie van molting en metamorfose, evenals bij het beheersen van verschillende postdevelopmental processen, zoals voortplanting, levensduur, en gedrag21, waardoor het aanbieden van verschillende mogelijkheden voor het testen van endocriene verstoring in fruitvliegje. Verder, ecdysteroid hormonen en JHs zijn de belangrijkste doelstellingen van de zogenaamde derde generatie insecticiden, ontwikkeld om zich te bemoeien met ontwikkelings-en reproductieve endocriene-gemedieerde processen in insecten. De agonist of antagonist werking van deze chemicaliën is bekend, en dus kunnen ze dienen als referentienormen voor de evaluatie van de effecten van potentiële Edc’s op de groei, voortplanting en ontwikkeling van insecten22. Bijvoorbeeld, Methopreen, die op grote schaal is gebruikt bij de bestrijding van muggen en andere aquatische insecten23,24, werkt als een JH-agonist en onderdrukt 20e-geïnduceerde gen transcriptie en metamorfose.

In aanvulling op hormonen, de nucleaire receptor (NR) Superfamily in fruitvliegje is ook goed bekend; het bestaat uit 18 evolutionair behouden transcriptiefactoren die betrokken zijn bij de bestrijding van hormonale-afhankelijke ontwikkelingstrajecten, evenals de voortplanting en fysiologie25. Deze hormoon NRs behoren tot alle zes NR superfamilie subtypen, met inbegrip van die betrokken bij neurotransmissie26, twee voor retinoic zuur NRs, en die voor steroïde NRs die, in gewervelde dieren, één van de primaire doelstellingen van edc’s27vertegenwoordigen.

Fruitvliegje als modelsysteem voor het bestuderen van Edc’s

Op dit moment, op basis van moleculaire eigenschappen, zijn verschillende milieu-agentschappen over de hele wereld toe te schrijven het potentieel om te interfereren met de endocriene systemen om verschillende kunststof-en-klare chemicaliën. Aangezien de Edc’s een mondiaal en alomtegenwoordig probleem zijn voor het milieu en voor organismen, is het algemene doel van het onderzoek op dit gebied het verminderen van hun ziektelast en het beschermen van levende organismen tegen hun schadelijke effecten. Om het inzicht in de mogelijke endocriene effecten van een chemische stof te verdiepen, is het noodzakelijk om het in vivo te testen. Hiertoe vertegenwoordigt D. melanogaster een geldig modelsysteem. Tot op heden, is de fruitvlieg uitgebreid gebruikt zoals in vivo model om de gevolgen van verscheidene milieu Edc’s te evalueren; Er is gemeld dat de blootstelling aan verschillende Edc’s, zoals dibutylftalaat ftalaten (DBP)28, Bisfenol a (BPA), 4-nonylfenol (4-NP), 4-tert-octylfenol (4-tert-op)29, Methylparaben (MP)30, Ethylparaben (EP)31, 32, bis-(2-ethylhexyl) FTALATEN (DEHP)33, en 17-α-ethinylestradiol (EE2)34, invloeden metabolisme en endocriene functies zoals in gewervelde modellen. Verschillende redenen hebben geleid tot het gebruik ervan als een model op dit gebied van onderzoek. Naast een uitstekende kennis van de endocriene systemen, verdere voordelen zijn de korte levenscyclus, lage kosten, gemakkelijk manipuleerbaar genoom, een lange geschiedenis van het onderzoek, en diverse technische mogelijkheden (Zie de FlyBase website, http://flybase.org/). D. melanogaster biedt ook een krachtig model voor het gemakkelijk bestuderen van transgenerationele effecten en bevolkings reacties op omgevingsfactoren8 en vermijdt ethische kwesties die relevant zijn voor in vivo studies bij hogere dieren. Daarnaast is de fruitvlieg aandelen een hoge mate van het behoud van het gen met mensen die het mogelijk maken voor vlieg fruit EDC assays te helpen bij het voorspellen of suggereren potentiële effecten van deze chemicaliën voor de menselijke gezondheid. Naast het vergroten van het begrip over de gevolgen voor de gezondheid van de mens kan fruitvliegje bijdragen aan de beoordeling van Risico’s van EDC-blootstelling aan het milieu, zoals verlies van biodiversiteit en milieudegradatie. Ten slotte, de fruitvlieg biedt het extra voordeel dat wordt gebruikt in laboratoria, waar de factoren die mogelijk van invloed zijn ontwikkeling, voortplanting, en levensduur kan worden gehouden onder controle om elke variatie aan de te testen stof toeschrijven.

Met dit in gedachten, hebben we geoptimaliseerd eenvoudige en robuuste fitness-analyses voor het bepalen van EDC-effecten op sommige fruitvliegje hormonale eigenschappen, zoals Fecundity/vruchtbaarheid, ontwikkelingsstoornissen timing, en volwassen levensduur. Deze tests zijn op grote schaal gebruikt voor een aantal edc’s23,24,25,26,27. In het bijzonder hebben we gebruik gemaakt van de volgende protocollen om de effecten van de blootstelling aan de synthetische oestrogeen EE234 en BPA en bisfenol af (BPA F) (ongepubliceerde gegevens) te evalueren. Deze protocollen kunnen gemakkelijk worden gewijzigd om de effecten van een bepaald EDC te onderzoeken op een moment, evenals de gecombineerde effecten van meerdere Edc’s in D. melanogaster.

Protocol

1. voedselbereiding Voor voorraad onderhoud en voor larvale groei, gebruik maken van een flappen medium met 3% poeder gist, 10% sacharose, 9% voorgekookt flappen, 0,4% agar, daarna genoemd flappen medium (CM). Zet 30 g gist in 100 mL van leidingwater, breng het aan de kook en laat het koken voor 15 minuten. Afzonderlijk, meng goed 90 g van voorgekookte flappen, 100 g suiker, en 4 g agar in 900 mL van leidingwater. Breng de oplossing aan de kook, lager het vuur e…

Representative Results

In deze sectie worden de belangrijkste stappen van de bovenstaande protocollen gerapporteerd in de vorm van vereenvoudigde regelingen. Gezien het dat vliegen de neiging om onsmakelijke verbindingen te vermijden, het eerste ding om te doen is om de smaak van de geselecteerde EDC assay. Dit kan worden gedaan door het mengen van een levensmiddel kleuren (bijvoorbeeld rood voedsel kleurstof No. 40)35 met het voedsel aangevuld met de geselecteerde EDC bij verschillende doses of met het oplosmiddel alle…

Discussion

De fruitvlieg D. melanogaster is op grote schaal gebruikt als een in vivo modelsysteem om de mogelijke effecten van milieu EDC’S zoals DBP28, BPA, 4-NP, 4-tert-op29, MP30, EP31te onderzoeken, 32, DEHP33, en EE234. Verschillende redenen hebben geleid tot het gebruik ervan als een model op dit gebied van onderzoek. Naast zijn onbetwiste …

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

De auteurs bedanken Orsolina Petillo voor technische ondersteuning. De auteurs danken Dr. Mariarosaria Aletta (CNR) voor bibliografische ondersteuning. De auteurs bedanken Dr Gustavo Damiano Mita voor de invoering ervan aan de EDC wereld. De auteurs danken Leica Microsystems en Pasquale Romano voor hun hulp. Dit onderzoek werd ondersteund door project PON03PE_00110_1. “Sviluppo di nanotecnologie oriënteren alla Rigenerazione e Ricostruzione Tissutale, Implantologia e Sensoristica in Odontoiatria/oculistica” acronimo “SORRISO”; Committente: PO FESR 2014-2020 CAMPANIA; Project PO FESR Campania 2007-2013 “NANOTECNOLOGIE PER IL RILASCIO CONTROLLATO DI MOLECOLE BIO-ATTIVE NANOTECNOLOGIE”.

Materials

17α-Ethinylestradiol Sigma E4876-1G
Agar for Drosophila medium BIOSIGMA 789148
Bisphenol A Sigma 239658-50G
Bisphenol AF Sigma 90477-100MG
Cornmeal CA' BIANCA
Diethyl ether Sigma
Drosophila Vials BIOSIGMA 789008 25×95 mm
Drosophila Vials BIOSIGMA 789009 29×95 mm
Drosophila Vials Kaltek 187 22X63
Embryo collection cage Crafts Plexiglass cylinder (12,5 x7 cm) with an open end and the other end closed by a rectangular base in which a slot allows the insertion of special trays for laying
Ethanol FLUKA 2860
Etherizer Crafts cylindrical glass container with a cotton plug
Glass Bottle 250mL Bottles
Glass Vials Microtech ST 10024 FLAT BOTTOM TUBE 100X24
Hand blender Pimmy Ariete food processor
Instant Success yeast ESKA Powdered yeast
Laying tray Crafts plexiglass trays (11 x 2,6 cm) in wich to pour medium for laying
Methyl4-hydroxybenzoate SIGMA H5501
Petri Dish Falcon 351016 60×5
Red dye no. 40 SIGMA 16035
Stereomicroscope with LED lights Leica S4E
Sucrose HIMEDIA MB025
Tomato sauce Cirio

References

  1. Kareiva, P. M., Marvier, M., Kareiva, P. M., Marvier, M. Managing fresh water for people and nature. Conservation Science: Balancing the Needs of People and Nature. , 460-509 (2011).
  2. Zoeller, R. T., et al. Endocrine-disrupting chemicals and public health protection: a statement of principles from The Endocrine Society. Endocrinology. 153 (9), 4097-4110 (2012).
  3. Guillette, J., Gunderson, M. P. Alterations in development of reproductive and endocrine systems of wildlife populations exposed to endocrine-disrupting contaminants. Reproduction. 122, 857-864 (2001).
  4. Guillette, L. J. Endocrine disrupting contaminants-beyond the dogma. Environmental Health Perspectives. 114, 9-12 (2006).
  5. Liao, C. S., Yen, J. H., Wang, Y. S. Growth inhibition in Chinese cabbage (Brassica rapa var. chinensis) growth exposed to di-n-butyl phthalate. Journal of Hazardous Materials. 163, 625-631 (2009).
  6. Qiu, Z., Wang, L., Zhou, Q. Effects of Bisphenol A on growth, photosynthesis and chlorophyll fluorescence in above-ground organs of soybean seedlings. Chemosphere. 90, 1274-1280 (2013).
  7. Wang, S., et al. Effects of Bisphenol A, an environmental endocrine disruptor, on the endogenous hormones of plants. Environmental Science and Pollution Research. 22, 17653-17662 (2015).
  8. Quesada-Calderón, S., et al. The multigenerational effects of water contamination and endocrine disrupting chemicals on the fitness of Drosophila melanogaster. Ecology and Evolution. 7, 6519-6526 (2017).
  9. Bergman, A., Heindel, J., Jobling, S., Kidd, K., Zoeller, R. . The State of the Science of Endocrine Disrupting Chemicals – 2012. , (2013).
  10. Bachega, T. A. S. S., Verreschi, I. T., Frade, E. M. C., D’Abronzo, F. H., Lazaretti-Castro, M. The environmental endocrine disruptors must receive the attention of Brazilian endocrinologists. Arquivos Brasileiros de Endocrinologia & Metabologia. 55, 175-176 (2011).
  11. Schug, T. T., Janesick, A., Blumberg, B., Heindel, J. J. Endocrine disrupting chemicals and disease susceptibility. Journal of Steroid Biochemistry and Molecular Biology. 127, 204-215 (2011).
  12. Lee, S. B., Choi, J. Effects of Bisphenol A and Ethynyl estradiol exposure on enzyme activities, growth and development in the fourth instar larvae of Chironomus riparius (Diptera, Chironomidae). Ecotoxicology and Environmental Safety. 68, 84-90 (2007).
  13. Vos, J. G., et al. Health effects of endocrine-disrupting chemicals on wildlife, with special reference to the European situation. Critical Reviews in Toxicology. 20, 71-133 (2000).
  14. Costa, E. M. F., Spritzer, P. M., Hohl, A., Bachega, T. A. S. S. Effects of endocrine disruptors in the development of the female reproductive tract. Arquivos Brasileiros de Endocrinologia & Metabologia. 58 (2), 153-161 (2014).
  15. Thummel, C. S. From embryogenesis to metamorphosis: the regulation and function of Drosophila nuclear receptor superfamily members. Cell. 83, 871-877 (1995).
  16. Schwedes, C. C., Carney, G. E. Ecdysone signaling in adult Drosophila melanogaster. Journal of Insect Physiology. 58, 293-302 (2012).
  17. Flatt, T., Kawecki, T. J. Pleiotropic effects of methoprene-tolerant (Met), a gene involved in juvenile hormone metabolism, on life history traits in Drosophila melanogaster. Genetica. 122, 141-160 (2004).
  18. Nassel, D. R., Winther, A. M. E. Drosophila neuropeptides in regulation of physiology and behavior. Progress in Neurobiology. 92, 42-104 (2010).
  19. Truman, J. W., Riddiford, L. M. Endocrine insights into the evolution of metamorphosis in insects. Annual Review of Entomology. 47, 467-500 (2002).
  20. Gáliková, M., Klepsatel, P., Senti, G., Flatt, T. Steroid hormone regulation of C. elegans and Drosophila aging and life history. Experimental Gerontology. 46, 141-147 (2011).
  21. Kozlova, T., Thummel, C. S. Steroid regulation of postembryonic development and reproduction in Drosophila. Trends in Endocrinology & Metabolism. 11, 276-280 (2000).
  22. Weltje, L., Matthiessen, P. Techniques for Measuring Endocrine Disruption in Insects. Endocrine Disrupters: Hazard Testing and Assessment Methods. , 100-115 (2013).
  23. Zou, Z., et al. Juvenile hormone and its receptor, methoprene-tolerant, control the dynamics of mosquito gene expression. Proceedings of the National Academy of Sciences. 110 (24), E2173-E2181 (2013).
  24. Zhao, W. L., et al. Methoprene-tolerant 1 regulates gene transcription to maintain insect larval status. Journal of Molecular Endocrinology. 53 (1), 93-104 (2014).
  25. Mangelsdorf, D. J., et al. The nuclear receptor superfamily: the second decade. Cell. 83, 835-839 (1995).
  26. Riddiford, L. M., Bate, M., Martinez Arias, A. Hormones and Drosophila development. The Development of Drosophila melanogaster. , 899-939 (1993).
  27. Watts, M. M., Pascoe, D., Carroll, K. Chronic exposure to 17a-ethinylestradiol and bisphenol A-effects on development and reproduction in the freshwater invertebrate Chironomus riparius (Diptera: chironomidae). Aquatic Toxicology. 55, 113-124 (2001).
  28. Atli, E. The effects of dibutyl phthalate (DBP) on the development and fecundity of Drosophila melanogaster. Drosophila Information Service. 93, 164-171 (2010).
  29. Atli, E. The effects of three selected endocrine disrupting chemicals on the fecundity of fruit fly, Drosophila melanogaster. Bulletin of Environmental Contamination and Toxicology. 9, 433-437 (2013).
  30. Gu, W., Xie, D. J., Hou, X. W. Toxicity and estrogen effects of methylparaben on Drosophila melanogaster. Food Science. 30, 252-254 (2009).
  31. Liu, T., Li, Y., Zhao, X., Zhang, M., Gu, W. Ethylparaben affects lifespan, fecundity, and the expression levels of ERR, EcR and YPR in Drosophila melanogaster. Journal of Insect Physiology. 71, 1-7 (2014).
  32. Chen, Q., Pan, C., Li, Y., Zhang, M., Gu, W. The Combined Effect of Methyl- and Ethyl-Paraben on Lifespan and Preadult Development Period of Drosophila melanogaster (Diptera: Drosophilidae). Journal of Insect Science. 16 (1), 1-8 (2016).
  33. Cao, H., Wiemerslage, L., Marttila, P. S., Williams, M. J., Schioth, H. B. Bis-(2-ethylhexyl) Phthalate Increases Insulin Expression and Lipid Levels in Drosophila melanogaster. Basic & Clinical Pharmacology & Toxicology. 119, 309-316 (2016).
  34. Bovier, T. F., Rossi, S., Mita, D. G., Digilio, F. A. Effects of the synthetic estrogen 17-α-ethinylestradiol on Drosophila T melanogaster: Dose and gender dependence. Ecotoxicology and Environmental Safety. 162, 625-632 (2018).
  35. Tanimura, T., Isono, K., Takamura, T., Shimada, I. Genetic dimorphism in the taste sensitivity to trehalose in Drosophila melanogaster. Journal of Comparative Physiology. 147, 433-437 (1982).
  36. Vandenberg, L. N., et al. Hormones and endocrine-disrupting chemicals: low-dose effects and non- monotonic dose responses. Endocrine Reviews. 33, 378-455 (2012).
  37. Abolaji, A. O., Kamdem, J. P., Farombi, E. O., Rocha, J. B. T. Mini Review: Drosophila melanogaster as a Promising Model Organism in Toxicological Studies. Archives of Basic and Applied. 1, 33-38 (2013).
  38. Yesilada, E. Genotoxic Activity of Vinasse and Its Effect on Fecundity and Longevity of Drosophila melanogaster. Bulletin of Environmental Contamination and Toxicology. 63, 560-566 (1999).
  39. Atli, E., Ünlü, H. The effects of microwave frequency electromagnetic fields on the fecundity of Drosophila melanogaster. Turkish Journal of Biology. 31, 1-5 (2007).
  40. Flatt, T., Tu, M., Tatar, M. Hormonal pleiotropy and the juvenile hormone regulation of Drosophila development and life history. BioEssays. 27, 999-1010 (2005).
  41. Rand, M. D., Montgomery, S. L., Prince, L., Vorojeikina, D. Developmental Toxicity Assays Using the Drosophila Model. Current Protocols in Toxicology. 59, 1-27 (2015).
  42. Fletcher, J. C., Burtis, K. C., Hogness, D. S., Thummel, C. S. The Drosophila E74 gene is required for metamorphosis and plays a role in the polytene chromosome puffing response to ecdysone. Development. 121, 1455-1465 (1995).
  43. Giordano, E., Peluso, I., Senger, S., Furia, M. minifly, A Drosophila Gene Required for Ribosome Biogenesis. The Journal of Cell Biology. 144 (6), 1123-1133 (1999).
  44. Tower, J., Arbeitman, M. The genetics of gender and life span. The Journal of Biology. 8, 38 (2009).
  45. Digilio, F. A., et al. Quality-based model for Life Sciences research guidelines. Accreditation and Quality Assurance. 21, 221-230 (2016).
  46. Sorensen, J. G., Loeschcke, V. Larval crowding in Drosophila melanogaster induces Hsp70 expression, and leads to increased adult longevity and adult thermal stress resistance. Journal of Insect Physiology. 47, 1301-1307 (2001).
  47. Linford, N. J., Bilgir, C., Ro, J., Pletcher, S. D. Measurement of Lifespan in Drosophila melanogaster. Journal of Visualized Experiments. (71), e50068 (2013).
  48. Weltje He, Y., Jasper, H. Studying aging in Drosophila. Methods. 68, 129-133 (2014).

Play Video

Cite This Article
Bovier, T. F., Cavaliere, D., Colombo, M., Peluso, G., Giordano, E., Digilio, F. A. Methods to Test Endocrine Disruption in Drosophila melanogaster. J. Vis. Exp. (149), e59535, doi:10.3791/59535 (2019).

View Video