Bu makale sığır meme bezi biyopsi çekirdek ve iğne biyopsisi araçlarını kullanarak sunar. Hasat doku hücre kültürü için veya meme fizyolojisi ve metabolizma gen ekspresyonu, protein ifade, protein değişiklikler, immünhistokimya ve metaboliti konsantrasyonları gibi değerlendirmek için kullanılabilir.
Sığır meme bezi biyopsi araştırmacılar hücre biyolojisi gen ekspresyonu, yollar ve protein çeviri sinyal histolojik analizi de dahil olmak üzere çalışmaya doku örnekleri toplamak için izin verir. Bu makalede iki Teknik sığır Meme bezinin (MG) biyopsisi için. Üç sağlıklı Holstein süt ineği Konu bulunmuştur. Biyopsi daha önce inek milked ve daha sonra sığır paraşüt içinde kendine hakim olsun. Bir ağrı kesici (flunixin meglumin, 1.1-2.2 mg/kg vücut ağırlığı) yolu ile şah damardan [IV] enjeksiyon 15-20 dk önceden biyopsi yapmak yönetiliyordu. Ayakta sedasyon, xylazine hidroklorür için (0,01-0,05 mg/kg vücut ağırlığı) Koksigeal damarları enjekte 5-10 dk önce yordamı. Bir kez yeterince sakin, biyopsi sitesi aseptik hazırlanan ve yerel olarak %2 lidokain hidroklorür subkutan enjeksiyon yolu ile 6 mL ile anaesthetized. Aseptik teknik kullanılarak, 2-3 cm dikey kesi 10 numara neşter kullanılarak yapıldı. Çekirdek ve iğne biyopsisi araçlar kullanıldı. Çekirdek biyopsi aracı için Akülü matkap bağlı ve MG doku bir saat matkap eylemini kullanarak kesi ile eklenen. İğne biyopsisi Aracı el ile kesi siteye eklenmiştir. İşlemden hemen sonra bir asistan için 20-25 dk hemostaz ulaşmak için steril bir havlu kullanarak kesi sitesinde basınç uygulanır. Paslanmaz çelik cerrahi zımba cilt kesi karşı çıkmak için kullanılmıştır. Zımba kaldırıldı 10 gün sonrası yordamı vardı. Çekirdek ve iğne biyopsileri başlıca avantajları olduğunu her iki yaklaşım sağlıklı inekler güvenli bir şekilde gerçekleştirilebilir minimal invaziv yordamlar vardır. Biyopsiyi izleyen süt verim etkilenmedi. Bu yordamları kısa iyileşme süresi gerektirir ve komplikasyonlar daha az risk neden. Belirli sınırlamalar biyopsi ve biyopsi sitede enfeksiyon sonra kanama içerebilir. Uygulamalar bu tekniklerin klinik tanı ve araştırma amaçlı, birincil hücre kültürü gibi doku koleksiyonu içerir.
Biyopsi ana bölümü için tıbbi konular veya araştırma amaçlı doku hasat için bir işlemdir. Doku analizi tedaviye doku tepkilerin veya diğer faktörler ilgi izin vermek için ötenazi1 alternatif olarak toplamak için minimal invaziv ve yaygın olarak kullanılan bir tekniktir. Sığır meme bezi (MG) doku örnekleri gen ve protein ifade, histoloji, hücre organelleri, sinyal yolları ve metabolik süreçleri değişiklikler yönetim organizasyonu çalışmaya süt araştırma için gerekli olan veya çevre. Ayrıca, MG doku sığır mastit bakteriyel enfeksiyonlar2tarafından neden olduğu gibi bazı bulaşıcı hastalıklar araştırma ve teşhis için gereklidir.
Sığır meme dört ayrı bezleri ve her bezi birlikte parankimi olarak adlandırılan bir bağımsız süt salgı sistemi içerir. Alveoller, oluklar ve bağ dokusu meme parankimi mevcuttur. Alveoller (luminal) iç yüzey epitel hücrelerinde oluşan mikroskobik küresel içi boş yapılar ve özel myoepithelial (bazal) dış yüzeyinde hücreleri. Alveoller sentezi ve süt salgılanmasını sorumludur. Fibröz bağ doku parankimi içinde mevcut bir grup alveoller alveoller diğer gruplardan ayırabilirsiniz ve her grup bir kulak3denir. Çeşitli faktörler geliştirme ve hayvan fizyolojisi, beslenme, yönetim, genetik ve çevre4MG işlevini etkiler. Meme iltihabı da MG işlevi ve süt kalitesi5olumsuz etkileyen önemli bir faktördür. Mastitic patojenler tarafından yayımlanan toksinlerin alveoller zarar ve biyokimyasal ve histolojik değişiklikler MG doku6sonuçlanan nekroz neden. Böylece, Histoloji ve metabolik süreçleri her alveoller veya lobül mg diğerlerinden önemli ölçüde farklı olabilir. Bu nedenle, tüm meme bezi temsilcisi örneklerdir biyopsi arzu edilir. Küçük biyopsi yalnızca bir tek kulak veya bireysel yabancılığımız, elde edilen bilimsel veya tanılama bilgileri sınırlama yakalamak. Araştırma amaçlı doku bir ‘görüntüsünü’ meme biyopsisi sağlar ancak biyopsi yeterince tahminleri toplam Meme bezinin yokluğunda toplam meme işlevi karakterize olamaz unutmayın gereklidir kitle.
İnsan kullanmak için son 30 yılda birkaç biyopsi araçları geliştirilmiştir. Şu anda, bu aletleri adaptasyonu hayvanlar ile kullanılabilir. Süt sığır için MG doku örnekleri cerrahi eksizyon (künt diseksiyon)7, biyopsi iğneleri1,8ve çekirdek biyopsi aletleri9,10da dahil olmak üzere farklı yöntemlerle elde edilmiştir. Böylece, MG biyopsi teknikleri laktasyondaki Süt ineklerin yaslanmış sedasyon cerrahi disseksiyon elektrokoter hemostaz 19927 çekirdek biyopsi ayakta sedasyon9altında toplanması için kullanma ile kullanarak yordamlar gelen geçiş, 10,11,12. Cerrahi biyopsi sorunları hematom gibi komplikasyonlar daha yüksek insidansı olması ve pahalı olması, invaziv bir yöntem, yara ve tümör13yaymak olduğunu. Şu anda, çekirdek biyopsi ve iğne biyopsisi (olarak da bilinen tru-cut biyopsi) yaygın olarak cerrahi biyopsi alternatif olarak benimsenmiştir. Çekirdek ve iğne biyopsileri cerrahi biyopsi yapmak karşılaştırıldığında avantajları şunlardır: yordamı minimal invaziv; büyük komplikasyonlar nadirdir; Genel anestezi gerekli değildir; relativley hızlı bir yöntemdir; Kurtarma süresi kısadır; meme sağlığı üzerinde en az olumsuz etkileri ve sadece kısa vadeli etkileri süt verim ve kompozisyon8,9,10olduğunu; ve maliyeti daha az cerrahi biyopsi13.
1996 yılında açıklanan bir çekirdek biyopsi yordam steril, paslanmaz çelik kanül çıkarılabilir bir geri çekilebilir bıçak ile genel anestezi9,10,11 olmadan sığır MG temsilcisi bir miktar doku kaldırmak için kullanılan ,12. İşlem sırasında araç düşük hız, aracın dokusu içine ilerledikçe hangi temiz bir doku çekirdek kesmek dönme hareketi oluşturmak için Akülü matkap bağlıydı. Büyük bir doku yararı oldu örnek (70 mm x 4 mm çapında, yaklaşık 0,75-1 g) 9. Bir son çalışmada10 gösterdi ki V. C. Farrvd tarafından açıklanan biyopsi prosedürü 9 laktasyondaki süt inekleri performans ve meme sağlığı üzerinde olumsuz etkisi olmadan tekrarlanan MG doku koleksiyonları gerçekleştirmek için kullanılabilir. Son olarak, bir çalışma14 süt inekleri tekrarlanan biyopsileri biyopsi toplamak için bir iç paslanmaz çelik kanül uygulanan vakum ile daha büyük bir trokar (31 cm uzun, dış çapı 9,5 mm, 8 mm iç çap) kullanarak mg değerlendirmek için yapılmıştır . Sedasyon (xylazine) ve lokal anestezi (%2 lidokain hidroklorür) kullanılan bu yöntem.
İğne biyopsisi meme dokusu toplamak için başka bir tekniktir. Çeşitli çalışmalarda bu tekniği benimsemiştir. Bir çalışmada1 sedasyon (detomidine) ve lokal anestezik (%1 lidokain) yordamda kullanılan. Biyopsiyi sonra inekler profilaktik antibiyotik tedavisi aldı. Meme bezi el ile önce ve sağım sonra masaj. Kan sütteki kadar 84 h için biyopsi sonra gözlendi. Miktarı ve süt kompozisyonu kısa bir süre için etkilendi. Son zamanlarda, bir çalışma bir Biyopsi iğnesini tekrarlanan MG biyopsi süt inekleri8‘ gerçekleştirmek için kullanılır. Sedasyon (%1 acepromazine, kas içi) ve lokal anestezi (%2 lidokain hidroklorür, subkutan) hayvanlar için idare. Hayvanlar İçmamari uyuşturucu veya antibiyotik önce veya sonra yordamı almadı ve ameliyat sonrası dönemde biyopsi yerinde enfeksiyon belirtisi yok edildi. Bu çalışmada, bir iğne kullanarak yinelenen sığır MG biyopsi süt üretim ve meme sağlığı süt inekleri üzerinde küçük bir negatif etkisi olmuştur. Genel olarak, iğne biyopsisi çekirdek biyopsi enstrümanı daha az invaziv bir yöntem gibi görünüyor. Ancak, daha önce belirtildiği gibi bu MG doku temsil edici bir örnek hasat biyopsi tekniği için önemlidir. Sığır MG doku az miktarda (yaklaşık 20-25 mg) elde edilen bir iğne biyopsisi kısıtlamasıdır8,15.
Biyopsi bir iğne veya daha büyük bir çekirdek olup olmadığı hemen hemen tüm çalışmalar α-2 agonist sedasyon ve lokal anestezik8,9,10, bir arada kullanılmış. Sığır MG, en sinir uçlarının cilt ile ilişkilidir. İnnervasyon parenkima dokusu için büyük ölçüde seyrek türüyle streç reseptörleri üzerinden keskin cerrahi ağrı algılamak için bir sinir lifleri gerçekleştirilir. Sonuç olarak, fizyolojik ağrı nedeniyle mg cerrahi işleme mekanizmalarının olduğunu yolu ile deri ve subkutan doku3 ve parenkima dokusu gibi değil derin doku. Lokal anestezik infiltrasyonu içine daha derin dokulara önemli ölçüde cerrahi ağrı azaltmak değildir bu nedenle, biyopsi yordamları için yalnızca yerel olarak deri ve subkutan doku, anestezi için gerekli gibi. Sonra uygun bir hazırlık biyopsi çevrenin hayvan rahatsızlık, öncelikle, kısıtlama ile ilişkili olan.
Koleksiyon daha büyük çekirdek örnekleri hematom oluşumu artırmak ve MG parankimi içinde enfeksiyon riskini artırır. Bu nedenle, bu evrenselleri8olmamasına rağmen peri-operatif iletişim kuralları kez parenteral antibiyotik7, yönetim içerir. Hemostazın ulaşmak da inek morbidite azaltmak için önemli bir faktördür. Söz konusu çalışmada kullanarak büyük çekirdek biyopsi enstrümanı14, el ile basınç biyopsi siteye uygulandı ve inek sütyen buz yaralar için en az 2 h aşağıdaki yordamı uygulamak için kullanıldı. Rağmen hasat doku büyük miktarda, yem alımı ve süt verim sadece hafif düşüşler gözlendi ve yordamı üç haftada inek sağlık üzerinde olumsuz etkileri olmadan tekrarlandı.
Süt inekleri MG biyopsi performans araştırmacılar elde edilen biyopsi tanılama veya analitik kalite, teknik ve inek morbidite kolaylığı dikkate almak gerekir. Doğru ve önceden planlanmış cerrahi teknikleri bu hedeflere ulaşmak için zorunludur. Bugüne kadar MG biyopsi çalışmalar biyopsi tekniği kendisi, açıklayan karşı biyopsi sonuçları açıklayan üzerinde odaklanmıştır ve laktasyondaki süt inekleri için açıklamalar çoğaltmasına izin vermek için yeterli detay eksikliği. Böylece, bu çalışmanın amacı iğne biyopsisi ve daha büyük çekirdek biyopsi teknikleri MG biyopsi sığır güvenli ve insanca çoğaltılması izin vermek için yeterli ayrıntılı olarak açıklamak için oldu.
Çekirdek ve iğne biyopsi yöntemleri bu protokolü9,16‘ tarif edildi. Hayvan sağlığı ve mastit14 önce biyopsi insidansı ayrıntılı bir değerlendirme her iki yordamlar için gereklidir. Araştırma amaçlı izi iltihap veya enfeksiyon hastalıkları ile hayvanlarda teknik gerçekleştirme kaçınılmalıdır. Bu ve biyopsi sonrası komplikasyon riski azaltır. Tüm biyopsi ve aygıtlar temiz, dezenfekte ve sterilize biyopsi sitesinin kirlenmesini önlemek için olmalıdır. Önce prosedür, cerrahi sitesi enfeksiyonlar (SSI) en aza indirmek gereklidir. Genel olarak, SSI hayvan morbidite, kayıp performans ve yüksek üretim maliyetleri içinde süt inekleri ile ilişkilidir. Çalışmalar daha önce yöntemleri nedeniyle saç kirlenme9,14kaldırmak için biyopsi alan yıkama ve antiseptik ajanlar (% 70 alkol, iyot cerrahi kullanarak kesi site kırpma da dahil olmak üzere biyopsi SSI önlemek için rapor ameliyata9, %2 KLORHEKSİDİN asetat çözüm14, % 10 povidone-iyot8) cilt hazırlık için. Bazı çalışmalarda, yönetim antibiyotik7 sırasında veya hemen sonra biyopsi9kabul edilmiştir; Ancak, antibiyotik profilaksi mevcut çalışmalarında kullanılan değildi ve hiçbir enfeksiyonlar biyopsi sitesinin gözlendi. Yara biyopsi kontaminasyonu önlemek için kuyruk aerosol bandaj uygulanan kadar biyopsi sitesi ile temas önlemek için güvenliği sağlanmalıdır. Bu protokol için zımba yaklaşık 10-14 d biyopsiyi sonra kaldırılır.
Çekirdek biyopsi öncesinde, düzgün kadar araç seti ve detaya gitmeyi eklemek önemlidir; yavaş dönme hızı seçin, ileri döndürme seçin ve matkap ters modunu kullanmayın. İşlem sırasında cilt kenarları ayrı tutmak ve deri ya da bağ dokusu ile bağlantı kurmadan aracı giriş izin vermek için yeterince uzun bir kesi belgili tanımlık kesme her iki tarafında dijital baskı kullanmak önemlidir. Bu yordamı yapılmazsa bir sürükle kesi kenarları çekirdek biyopsi enstrümanı dönüşü sırasında oluşur ve enfeksiyon riski artacak ve yara iyilesmesinde gecikme olabilir ek cilt doku travması neden. Bu protokol için açıklanan mevcut biyopsi işlemler onay belgeli yapay organ büyük hayvan cerrah tarafından gerçekleştirilmiştir. Yordamları başarılı bir şekilde gerçekleştirilmiştir (Şekil 5). Her iki tekniğin de nispeten kolay ve hızlı olarak karşılaştırıldığında cerrahi eksizyon yordamı gerçekleştirmek için.
Biyopsi sitesinden kanama ortak süt inekleri8,9,10,14MG biyopsi sonra. Mevcut protokolünde gözlenen kanama oldu en az (Şekil 4), hangi-ebilmek var olmak yeterli (güçlü) yaraya uygulama hemen sonra prosedür nedeniyle. En az 20 dk için yoğun baskı gerekir ve bazı durumlarda daha–dan 30 dk için gerekli olabilir. Orta şiddetli kanama için biyopsi sitesine baskı uygulamadan sonra gözlem yapılırsa, bu baskı devam etmek ve hemen bir veteriner iletişim için tavsiye edilir.
Hemostazın inek morbidite azaltmak için önemli bir faktör olduğu gibi bir çalışmada9kanama kontrolü biyopsi siteye kan durdurucu sargı yastıkları paketlenmiş. Ancak, böyle bir şekilde kan durdurucu sargı yastıkları kullanımı süt grubu ortamında Mikrobiyolojik kontaminasyon için yüksek potansiyel risk vardır. Başka bir çalışmada14 arasında yinelenen biyopsi ve biyopsi ve cilt kapatma sonra biyopsi sitesine el ile basınç uygulanır ve en az 2 h biyopsiyi izleyen sitesine buz uygulanır. Mevcut iletişim kuralında, 20-25 dk için biyopsi sitesine uygulanan güçlü basınç kanamayı kontrol edecek kadar yeterli.
Başarılı biyopsi tekniği en az kan prosedürü sonra kısa bir süre için devam ederse süt sonuçlanmalıdır. Süt salgı süt hayal kırıklığı ve mastit enfeksiyonları sırasında bir kesinti önlemek için İçmamari kan pıhtıları biyopsi çeyrek10,14sıyırma el tarafından kaldırılması gerekir. Mevcut protokolünde kan 48 s kadar süt biyopsiyi sonra gözlendi. Ancak, hayvanlar daha çok sayıda kullanılan bir çalışmada, kan süt inekleri çoğunda 6 günden az gözlendi. Az hayvan kan içinde süt 6 gün8‘ den sonra gösterdi. Bu nedenle, günlük süt görünüm gözlenmesi işlemden sonra 6 d için gereklidir. Hayvanlar büyük doku örneği14elde edildi zaman mastit enfeksiyon belirtisi sergi değil. Ancak, tekrarlanan biyopsisi iğne kullanarak aynı hayvan üzerinde gerçekleştirilen önceki araştırma o mastit enfeksiyon görülme oranı yaklaşık % 128yordamı takip bulundu. Mevcut iletişim kuralında, ne hayvan klinik mastit enfeksiyon sonra yordam görsel işaretler vardı. Ayrıca hafif bir şey kesi sitesi biyopsiyi sonra enfekte olma şansı.
Tolazoline hidroklorid, sedasyon, etkilerini tersine çevirir bir uyuşturucu aşırı dozdan xylazine durumunda bulunması gerekir. Xylazine aşırı doz akciğer ödemi neden olabilir. Akciğer ödemi klinik belirtileri solunum güçlüğü, şiddetli dispne, solunum zorlukları, öksürük ve köpüklü balgam içerir. Akciğer ödemi belirtileri gözlenen, xylazine etkilerini tersine çevirmek için tolazine (2-4 mg/kg vücut ağırlığı) kullanmak için önerilir.
Mevcut iletişim kuralı bir iğne biyopsisi ve çekirdek biyopsi gerçekleştirmek için teknik anlatılmaktadır. Genel olarak, çekirdek biyopsi iğne biyopsisi ile karşılaştırıldığında daha büyük doku örneği (0.75-1 g)9 meme sağlığı üzerinde en az olumsuz etkisi ile avantajdır. İğne biyopsisi çekirdek biyopsi enstrümanı daha az invaziv bir yöntemdir. Ancak, birden çok biyopsisi iğne biyopsisi yordamı yordam yanı sıra kan pıhtıları sütteki sonra büyük kanama riskini artırabilir doku kullanarak daha büyük bir miktar almak çalışır. Her iki teknikleri ve en az inek morbidite neden kolayca cerrahi personel en az eğitim ile elde edildi. Günlük süt verimi (% 8-10 azalış) ve kompozisyon9 ve yem alımını azaltma14 kısa vadeli bir değişiklik çekirdek ve iğne biyopsileri sonra sırasıyla bekleniyor. İğne biyopsisi yordamı iğneyle kaldırıldı doku küçük hacimli sınırlamalardır. Araç sadece iğne biyopsi olmak doku içinde ve birden çok deneme kez işlemden sonra süt ve mastit kan riskini artırır doku yeterli miktarda elde etmek gerekli olduğunda etkinleştirilmesi gerekir. Çekirdek biyopsi sınırlamaları dahil işlem sonrası kanama doku büyük miktarda varsa, daha yüksek bir risk (> 200 mg) elde edilir. Buna ek olarak, biyopsi aracı kullanmadan önce yeterli eğitim gerektiren bir araya daha zordur.
The authors have nothing to disclose.
Bu araştırma ulusal hayvan beslenme programı ve Virginia Tech tarafından desteklenmiştir. Bayan Tara Pilonero, Dr. Julie Settlage ve Dr. Izabelle Teixeira teknik yardımı minnetle kabul vardır.
70% Isopropyl alcohol | Walmart | 565106257 | 1 L |
Aerosol spray to kill and repel flies | MWI | 14339 | 1 bottle (if necessary) |
Biopsy needles, 12 G × 16 cm | C. R. Bard | MN1216 | 2 |
Butterfly infusion set (18 G needle) | Fisher | 22-258087 | 1 |
Cell culture dishes | Fisher | 08-772E | 4 |
Cordless drill (low speed) | Hitachi | DS10DFL | 1 |
Core biopsy instrument, Farr et al. (1996) | 2, custom metal fabrication. To request the tool contact the authors. | ||
Cows | cattle healthy | ||
Flunixin meglumine | MWI/VetOne | 501018 | 1.1 to 2.2 mg/kg of body weight |
Folding table | Amazon | 1 | |
Forceps | Fisher | 09-753-50 | 1 |
Gloves non-sterile | Fisher | 17-200-845 | 9, size dependent |
Hard brush | Sullivan Supply | 18270 | 1, to wash the cows |
Head gate | 1, customized for dairy cows | ||
Lidocaine hydrochloride 2% injectable | MWI/VetOne | 510212 | 6 mL was used, from 3 to 8 mL |
Livestock body wash | eZall Technologies | 39384 | 1, to wash the cows |
Needle 18 G (1 to 1/5“) | Fisher | 14-821-15A | 6 |
Needle 20 G (1 to 1/5“) | Fisher | 14-815-526 | 6 |
Phosphate buffered saline (0.9%) | Fisher | 20-012-043 | 1 L |
Povidone Iodine ointment | Jeffers | #VED1A | 500 g (if necessary) |
Povidone iodine scrub solution (0.75% iodine) | MWI/VetOne | 510094 | 1 L |
Reusable biopsy instrument | C. R. Bard | MG1522 | 1 |
Rope halter | Nasco farm and ranch | C10852 | 2, cow size |
Scalpel blades (#10) | MWI | 033870 | 2 |
Scalpel holders (#3) | MWI | 602008 | 1 |
Self seal autoclave pouch 10 x 5.5 in. | Fisher | 19-130-0038 | 1 case of 800 |
Sterile cotton gauze sponges | Fisher | 22-037-986 | 4 |
Sterile gauze pads | Fisher | 19-090-735 | 4 |
Sterile surgical gloves | Surgical gloves | 19-166-679 | 3, size dependent |
Sterile surgical towels | Fisher | 50-118-0339 | 6 |
Stethoscope | Littmann Master Classic II | 1392 | 1 |
Surgical clipper | Oster A5 | 078005-010-003 | 1, preparation of the animal for biopsy |
Surgical clipper blades (#40 ) | Oster | 78919-016 | 1, preparation of the animal for biopsy |
Surgical staple remover | MWI | 541 | 1 |
Surgical stapler pre-loaded | MWI | 17713 | 5 |
Syringes of 10 mL | Fisher | 14-823-224 | 3 |
Syringes of 2 mL | Fisher | 22-028854 | 3 |
Syringes of 20 mL | Fisher | 22-034507 | 3 |
Syringes of 5 mL | Fisher | 22-028855 | 3 |
Thermometer | Agri-Pro Enterprises Inc | 72000 | 1 |
Tolazine hydrochloride | Akorn Animal Health | 61311-486-10 | 2 to 4 mg/kg of body weight (if necessary) |
Tweezer | Fisher | 14-955-025 | 1, for handle the tissue sample |
Water hose | Miracle-Gro, Walmart | 554990501 | 1, to wash the cows |
Water-resistant aerosol bandage (aluminum powder 40 mg) | MWI | 010728 | 1 bottle |
Xylazine hydrochloride | MWI/VetOne | 510650 | 0.01 to 0.05 mg/kg of body weight |