Ici, nous fournissons un protocole qui comprend des instructions détaillées pour la mise en place économique d’emplacement de l’objet murin et objet nouvelle reconnaissance des tests comportementaux, y compris la conception, coût et construction de l’équipement requis ainsi que exécution de tests comportementaux, de collecte et d’analyse.
Tests comportementaux éthologiquement pertinents sont un élément essentiel de toute étude qui utilise des modèles de souris pour étudier les effets cognitifs de divers changements physiologiques ou pathologiques. La tâche de localisation de l’objet (BTA) et la tâche de reconnaissance d’objet roman (NORT) sont deux tâches comportementales efficaces couramment utilisés pour révéler la fonction et la santé relative de certaines régions du cerveau impliquées dans la mémoire. Alors que deux de ces essais exploitent la préférence inhérente de souris pour la nouveauté révéler la mémoire pour précédemment rencontrent objets, le BTA évalue principalement l’apprentissage spatial, qui s’appuie fortement sur l’activité de l’hippocampe. Le NORT, évalue, en revanche, apprentissage non spatiales de l’identité de l’objet, qui s’appuie sur plusieurs régions du cerveau. Les deux tâches requièrent une arène ouverte–essais sur le terrain, les objets ayant une valeur intrinsèque équivalente à des souris, des signaux environnementaux appropriés et matériel d’enregistrement vidéo et le logiciel. Les systèmes disponibles dans le commerce, bien que pratiques, peuvent être coûteuses. Ce manuscrit détaille une méthode simple et économique pour la construction des arènes et de mise en place l’équipement nécessaire pour effectuer l’OLT et NORT. En outre, le manuscrit décrit un protocole d’analyse efficace qui incorpore BTA et NORT et fournit les méthodes typiques d’acquisition de données et analyse, ainsi que des résultats représentatifs. La réussite de ces tests peut fournir de précieuses informations sur la fonction de mémoire de divers systèmes de modèles de souris et d’évaluer les régions neurales sous-jacentes qui prennent en charge ces fonctions.
Les tests cognitifs efficaces isoler et d’évaluer la fonction neurale de certaines régions du cerveau en examinant le comportement dans un environnement contrôlé1. Chez l’homme, des tâches spécifiques ont été conçus pour évaluer la performance des régions cérébrales ciblées, telles que la carte de Wisconsin tri tâche pour fonction préfrontale ou les associés appariés test de la Cambridge neuropsychologiques d’essai automatisé batterie (d’apprentissage CANTAB) pour fonction hippocampal2,3. Ces tests sont conçus pour étudier les fonctions des régions spécifiques du cerveau chez l’être humain en évaluant les comportements qui résultent de l’activité neuronale de ces régions. L’objectif final de la recherche biomédicale plus est l’amélioration de la santé humaine ; Cependant, plusieurs études sur le fonctionnement du cerveau en santé ou maladie éthiquement impossible avec des êtres humains. Pour les études qui ne peuvent pas utiliser des participants humains, petits rongeurs comme les souris sont souvent le modèle de choix. À l’aide de modèles murins permet le contrôle direct des manipulations expérimentales, y compris l’altération de l’expression génique, l’induction de la blessure ou même modulation de l’activité de circuit grâce à des techniques d’optogenetic. Tests comportementaux des souris, semblables à l’expérimentation humaine, visant à évaluer l’effet des variables expérimentales sur le fonctionnement du cerveau en mesurant les comportements qui s’appuient sur des régions spécifiques.
L’hippocampe est une structure essentielle pour la formation de la mémoire à l’homme et les rongeurs4. Plus précisément, l’hippocampe joue un rôle déterminant dans la mémoire déclarative impliquant des représentations relationnelles, mais de mémoire pas procédurale, qui s’appuie sur les centres moteurs du cerveau4. Fonction mémoire hippocampe a été un objet d’étude à travers de nombreux domaines des neurosciences, parce qu’il est extrêmement sensible aux perturbations. Des perturbations négatives allant de stress prolongé et le vieillissement de convulsions et d’accidents vasculaires cérébraux sont associées à des lésions hippocampiques5. En revanche, des interventions positives, telles que l’interaction sociale, enrichissement environnemental physique ou exercice, améliorent la fonction hippocampal6,7,8. Études sur les rongeurs avec des tests adéquats de mémoire hippocampe peuvent révéler la perspicacité dans les médiateurs cellulaires et moléculaires de la mémoire ainsi que les effets des différentes interventions environnementales sur la fonction hippocampe.
Chez les rongeurs, plusieurs tests ont été développés pour étudier l’hippocampe-dépendantes d’apprentissage et la mémoire9,10,11. Ils peuvent être largement subdivisés en tâches qui requièrent un stimulus avec valence émotionnelle pour susciter un changement de comportement et les tâches qui s’appuient sur la préférence de rongeur pour étudier de nouveaux stimuli11. Contextuelle peur conditionnée, paires, par exemple, un stimulus désagréable (choc de pied) avec un contexte environnemental et de la mémoire de tests puis plus tard pour le cadre en mesurant la peur induite par la congélation comportement de9,11. Le labyrinthe de l’eau de Morris et son homologue sec, le labyrinthe de Barnes, utilisent renforcement externe négatif pour promouvoir l’apprentissage spatial4,11. Dans chaque cas, les rongeurs cherchent échapper à une situation aversive, être immergé dans l’eau froide ou exposées sur une plate-forme lumineuses, respectivement. Le labyrinthe de bras radial, par contre, repose sur le renforcement positif comme les animaux utilisent le comportement alimentaire naturel, couplé avec la mémoire spatiale pour récupérer les petits aliments récompenses4,11. Ces tâches sont largement utilisés et ont donné lieu à des connaissances de base sur la mémoire hippocampe. Cependant, renforts externes ou stimulus induisant la peur comme choc ajoutent une composante émotionnelle à ces comportements positifs et négatifs teste qui dans certains cas peut s’avérer indésirable. Par exemple, le hippocampe dorsal et ventral est associés à des fonctions distinctes, mémoire spatiale versus régulation émotionnelle, respectivement12. Les tests qui s’appuient sur une réaction émotionnelle à un stimulus ne peuvent pas fidèlement troubles de la mémoire spatiale si les fonctions de régulation émotionnelle hippocampe ventral sont également touchées.
Le BTA est un test simple et efficace qui fournit une mesure de la mémoire spatiale hippocampe-dépendantes13. La tâche s’appuie sur la préférence intrinsèque de l’animal pour la nouveauté sans armature externe supplémentaire et peut donc généralement éviter les complications associées à des réactions émotionnelles différentiel13. Le présent protocole pour la BTA est présenté pour les souris, mais il est également efficace chez les rats, si les dimensions de l’équipement sont convenablement réglées. Le protocole se compose d’acclimater une souris à une arène ouverte–essais sur le terrain et ensuite lui permettant d’enquêter sur les 2 objets en ce qui concerne les signaux environnementaux spatiales. La souris est alors supprimée de l’arène, et lors d’un retard (intervalle inter du procès ou ITI), l’un des objets est déplacé. Après l’ITI, la souris est réintroduite dans l’arène et a permis d’explorer librement. En général, les souris préfèrent nouveauté, et si ils souviennent de l’emplacement des objets de leur exposition initiale, ils passeront plus de temps sur l’objet déplacé. Les animaux avec des lésions de l’hippocampe ont une déficience d’apprentissage contextuel spatiale et en conséquence ne démontrent aucune préférence pour les objets dans les nouveaux lieux14,15.
L’OLT peut être utilisé indépendamment ou en combinaison avec un essai supplémentaire de mémoire qui s’appuie sur l’activité neuronale de plusieurs régions du cerveau, la tâche de reconnaissance d’objet roman (NORT). Le NORT est identique à l’OLT jusqu’à la phase de test, quand un des objets est remplacé par un nouvel objet au lieu d’être déplacé vers un nouvel emplacement. Comme c’est le cas avec le BTA, souris avec une bonne mémoire des objets préférera spontanément enquêter sur le nouvel objet. Contrairement à la mémoire de localisation de l’objet, qui s’appuie fortement sur des substrats de l’hippocampe, mémoire de reconnaissance de l’objet semble s’inspirer de diverses régions du cerveau et l’implication de l’hippocampe est instable. Nombreuses études que les lésions hippocampiques ou inactivation n’affecte pas la nouvelle objet préférence10,13,16,17, tandis que d’autres trouvent l’opposé de18,19. Cependant, c’est toujours une tâche couramment utilisée pour évaluer la fonction de mémoire générale chez les rongeurs.
Le protocole présenté ici délimite les étapes impliquées dans le lancement et l’exécution de l’OLT et NORT, deux utilisent une arène ouverte–essais sur le terrain. Équipement d’essai comportemental disponible dans le commerce peut être prohibitif, notamment pour les plus petits laboratoires. Ce protocole comprend la conception et les étapes simples pour construire des arènes internes au coût minimal et sans outils spécialisés. En outre, ce protocole détaille la zone test comportementale idéale, y compris le placement des arènes, indices contextuels et système d’enregistrement vidéo qui ouvre la voie à la mise en œuvre des protocoles BTA et NORT. Résultats représentatifs d’études réussies mais aussi imparfaites sont présentées, mettant l’accent sur l’importance de l’optimisation de tous les matériaux et les procédures pour chaque étude.
Description | Option | Quantité |
Partie A: feuille acrylique – blanc Opaque (0,635 cm x 40 cm x 40,64 cm) | Bords routés | 2 |
Partie B: feuille acrylique – blanc Opaque (0,635 cm x 40 cm x 41,91 cm) | Bords routés | 2 |
Partie C: feuille acrylique – blanc Opaque (0,635 x 41,91 cm x 41,91 cm) | Bords routés | 1 |
Ciment acrylique (1 pt.) | NA | 1 |
Applicateur d’Hypo calibre 16 | NA | 1 |
Équerre à combinaison | NA | 1 |
Webcam HD | NA | 1 |
Logiciel de Capture vidéo | NA | 1 |
Câble USB 2.0 | NA | 1 |
Conduit de câble | NA | 1 |
Tableau 1 : Liste détaillée des matériaux et de matériel nécessaire aux tests comportementaux.
Ce protocole prévoit une méthode rentable pour mener l’emplacement de l’objet et reconnaissance d’objets nouveaux comportementale stable chez les souris. Ces tests permettent l’évaluation de fonction hippocampe ainsi que la fonction des autres régions corticales, telles que le cortex préfrontal, impliqué dans l’objet reconnaissance10. Le BTA et NORT ont l’avantage d’éviter les stimuli avec valence émotionnelle forte qui sont requises pour le labyrinthe aquatique Morris, conditionnement de peur contextuelle, labyrinthe de Barnes ou de labyrinthe de bras radial. Ils évitent également la nécessité pour la privation de nourriture selon les besoins pour le labyrinthe de bras radial. En outre, ce protocole décrit une procédure d’essai deux jours simple qui ne nécessite pas d’équipement importants ou complexe pour l’exécution ou l’analyse. Un inconvénient de ces tâches, c’est qu’ils ne permettent pas aux mesures d’apprentissage ou d’acquisition. Une différence dans l’enquête de nouveauté pourrait découler d’apprentissage les plus pauvres sur les objets au cours de la formation, les plus pauvres de mémoire pour ce qui a été appris ou les deux. Temps total passé étudie les objets constitue une mesure importante pour exclure les différences inhérentes dans le lecteur de l’exploration, mais n’est pas une mesure de l’apprentissage. Si les mesures d’apprentissage sont importants pour une question expérimentale, un labyrinthe d’eau, labyrinthe de Barnes, ou dédale de bras radial serait sans doute préférable.
Personnalisé construction d’arénas comportementales a le potentiel de sauver des centaines de dollars et placer l’objet de tests au sein de la portée d’une grande variété de laboratoires. Ce protocole élimine les nombreux obstacles et rationalise le processus de fabrication pour faire la construction interne arène plus accessible aux scientifiques n’ayant aucune formation spécialisée en acrylique. Il est important de noter que d’acheter des feuilles d’acrylique colorés qui contrastent avec les souris, tels que l’acrylique blanc pour souris noirs et acrylique noir pour les souris blanches, facilite d’acquisition de données et d’analyse, surtout lorsque vous utilisez disponibles dans le commerce logiciel d’analyse. Commander des feuilles à découper avec « routé bords » élimine le besoin d’une table a vu (tableau 1), et l’utilisation de ciment acrylique supprime la nécessité de percer et fraiser les trous pilotes. Vissage dans les attaches, forage et acrylique coupe souvent provoque la rupture, puce et le crack en raison de sa nature fragile. Parce que le ciment est un solvant, il coulera dans la zone de jonction, dissolution et adoucir tout acrylique qu’il rencontre. Ainsi, il devrait n’être appliqué à chaque pièce séparément comme si c’était une colle traditionnelle. Contrairement à la colle, le ciment ne va pas remplir les espaces négatifs ou adhèrent aux surfaces. C’est la raison principale pour commander « routés edges » car ceci s’assurera un bord lisse et plat, créant un lien beaucoup plu solide. Quand le ciment sèche, il s’ont fusionné les deux feuilles d’acrylique en une seule pièce dans un processus appelé « solvant de soudage ». Tout comme le métal de soudure, le produit fini est une pièce unique, mais la zone soudée restera toujours l’emplacement les plus faibles. Par conséquent, une fois que les arènes sont utilisées, il faut pour éviter l’impact direct ou un stress extrême à ces moments.
Ce protocole indique également comment mettre en place 4 arénas pour le test simultané de jusqu’à 4 souris (Figure 1 et Figure 2). Les murs opaques des arènes empêchent souris de voir un autre au cours des essais, mais il y a encore une possibilité qu’avoir d’autres souris dans la chambre provoque des odeurs ou des distractions de bruit qui risque de nuire aux essais. Essais d’accoutumance comme détaillé ici peut aident à atténuer cette préoccupation, comme les souris sont exposés aux conditions multiples animalerie avant des tests comportementaux. Toutefois, si distractions provenant d’autres souris ou expérimentateur bruit associé aux autres souris de manutention est une préoccupation forte, une arène avec une souris peut être utilisée, aussi bien, si il va augmenter le temps nécessaire pour achever le BTA et NORT avec plusieurs souris. Plus de 4 arènes pourraient théoriquement être utilisés ainsi, mais la plupart des caméras n’ont pas un assez large champ de vision pour montrer que de nombreuses arènes avec une bonne résolution.
Les dimensions et les distances fournies ici sont des orientations générales pour la souris tests comportementaux dans une salle d’examen typique qui est 16 x 16 x 16 m3 Dimensions (Figure 1 b et 1C). Mettre en place des signaux environnementaux appropriés, arénas et enregistreur vidéo doivent être optimisé pour chaque environnement. Des indices peuvent se composer de grandes formes ou motifs (généralement en noir et blanc) permettant aux souris de s’orienter dans l’espace au cours de l’OLT. Au lieu de placer les signaux à différents endroits en face de l’autre, les indices peuvent également être montés sur les murs de la zone d’essai. Ce protocole recommande de diviser la salle d’examen avec un rideau pour cacher le chercheur et l’ordinateur au cours des tests comportementaux. Pendant tous les accoutumance, intervalles entre procès et essais actives, les chercheurs devraient fermer le rideau pour se séparer de la zone d’essai. Si ce n’est pas pratique, l’ordinateur peut rester compte tenu des souris, mais le chercheur doit se déplacer hors de la vue au cours de la tâche. Si le chercheur est présent, les souris peuvent tenter de s’appuyer sur lui comme un repère spatial.
Tous les tests comportementaux devraient être achevée dans un environnement contrôlé en température et en humidité avec illumination dim, mais même à environ 310 lux et indices d’odeur étrangère sonore ou une forte environnement minimal, comme des parfums sur les expérimentateurs. Entre chaque jour du procès et à l’essai, tous les arénas et les objets doivent être nettoyés avec l’animalerie méthodes de stérilisation comme essuyer avec l’éthanol à 70 % ou l’eau de Javel non parfumé lingettes recommandée pour réduire au minimum les signaux olfactifs. Si l’on utilise des désinfectants chimiques, un rinçage avec l’éthanol à 70 % est recommandé car beaucoup de désinfectants chimiques peuvent être irritants pour les pieds des animaux. Comme avec n’importe quelle tâche comportementale, manipulation souris pendant plusieurs jours avant l’essai n’est nécessaire pour les familiariser avec les individus qui va effectuer la BTA et NORT et réduire le stress au cours des essais de20,22. Comme les souris peuvent éprouver un stress aigu en raison des individus inconnus à proximité de la zone d’essai, il est également recommandé que tous les tests comportementaux devraient être achevé par le même individu (s). Les paramètres de test et les conditions décrites dans le présent protocole ont été optimisées pour 6 personnes à souris C57Bl/6 adultes de 9 semaines et seraient plus utiles pour révéler des troubles de la mémoire à cause de blessures dans ce groupe d’âge ou de troubles de la mémoire due elle-même l’âge chez les souris âgées. Si l’objectif est de tester pour l’amélioration de la mémoire chez les jeunes souris, un ITI plus longue allant de 1 heure à 1 jour serait plus approprié éviter les effets du plafond sur les performances dans la version ITI 20 min plus facile. En effet, ITIs peuvent varier de 5 min (pour rappel immédiat) à plusieurs heures ou jours (pour les mémoires de distance), selon les besoins spécifiques de l’expérience et les souches et les âges des souris. Ce qui est important, quelle que soit la durée, ITIs tous doivent être cohérents entre les sessions dans une expérience. Comme les souches différentes et l’âge des souris présentent des différences dans le comportement et l’apprentissage, le calendrier pour chaque essai et chaque intervalle, tests d’agencement de l’espace, et les objets utilisés peuvent être modifiés selon la souche de souris, leur âge et le préjudice spécifique / maladie/intervention modèle testé9,21,23,25.
Alors que la dépendance hippocampe des fonctions mémoire spatiale testé dans l’OLT sont bien établies, le NORT peut ou ne peut pas se fonder sur l’hippocampe. Interprétation des données de la NORT prenne cette mise en garde au compte. Les variables déterminants, pour savoir si l’hippocampe est impliqué, en mémoire de reconnaissance d’objet ne sont pas convenues encore, mais pourraient inclure ITI longueur ou la saillance de repères spatiaux,18. Notamment, le protocole présenté utilise OLT spatiale avant le NORT, qui peut-être biaiser la souris vers l’utilisation de processus de l’hippocampe dans le NORT. Ainsi, il est important de noter que l’ordre peut être inversé, ou chaque tâche peut être exécutée indépendamment, selon des expérimentateurs questions et besoins.
Sélection d’objets est un aspect crucial de l’OLT et NORT22,24. Les objets idéales sont assez lourdes ne pas pour être facilement déplacés par une souris et en matières, comme le verre ou en métal, une souris ne peut pas endommager par la mastication ou en grattant. En bois, mousse, ou des objets en plastique souples ne conviennent pas car ils sont déforment facilement et sont difficiles à garder sans odeur. En outre, les objets utilisés dans les essais devraient tous être relativement similaires en taille, texture, odeur et matériel. La figure 1 donne un exemple d’un objet approprié qui pourrait être utilisé. Cette figurine en plastique orange d’une poule est remplie avec du sable pour lui donner assez de poids et scellée pour empêcher la fuite de nettoyage réactifs ou autres agents qui causent les odeurs. En raison de la forme du haut, souris ne peuvent pas grimper au-dessus d’ou s’asseoir sur cet objet. Pour le BTA ou NORT, cet objet est mieux couplé avec un autre objet de même taille, poids, matière, couleur et complexité, comme une figurine en plastique similaire d’un lapin. Pour s’assurer que l’enquête objet reflète véritablement la préférence pour la nouveauté, tous les objets doivent être validées pour la valeur intrinsèque équivalente avec un minimum de 8 souris dans la même souche, sexe et l’âge du groupe expérimental comme décrit dans la section 2.9 du protocole. En outre, les objets doivent être randomisés en termes d’objet qui est l’objet de nouveaux ou déplacé entre les souris dans la même étude pour s’assurer que les caractéristiques intrinsèques des objets sont sans incidence sur la préférence. Placement de l’objet peut aussi grandement affecter le succès ou l’échec de l’OLT et NORT. Les objets doivent être contrebalancé dans les arènes et ne pas être trop près des murs. Un coin pas encombré par un objet est un endroit attrayant pour les souris à cacher et cela va confondre les mesures d’enquête.
Une condition importante pour la collecte des données est la définition de « investigation active », c’est-à-dire quand une souris engage un objet avec le nez pointé vers l’objet pas plus de 2 cm de distance. Une souris se déplaçant au-dessus de l’objet ou la recherche au-delà de l’objet n’est pas considéré comme une enquête active. En outre, depuis le BTA et NORT dépendent d’une souris, se souvenant de la localisation spatiale ou les caractéristiques réelles de l’objet, il doit y avoir une étude suffisante d’entre eux lors des procès de formation. Ainsi, le chercheur doit définir un temps minimal enquête et exclure tous les sujets qui ne respectent pas ce niveau de référence de l’enquête, traditionnellement fixée à 20 secondes21.
Quantification du temps enquête objet peut être accomplie de différentes manières, avec ou sans logiciel d’analyse cher. Si le pointage manuel est utilisé, tel que décrit ici, la plus vaste collection de données est possible en enregistrant les horodateurs sur la vidéo quand la souris étudie l’objet. Les temps de marche / arrêt d’enquête objet lors des trois essais individuels d’enregistrement crée un journal permanent des horodatages impartiale et facilite le calcul manuel précis de données, contrairement à d’autres méthodes comme l’utilisation d’un chronomètre à additivement enregistrer le temps total qu’une souris examine chaque objet.
Progiciels commerciaux sont également disponibles pour la notation d’enquête de l’objet. Logiciels disponibles dans le commerce peuvent fournir une multitude de données au-delà de la main marquant les données décrites ici, y compris la distance totale parcourue, temps passé dans certaines zones de l’arène et la vitesse de mouvement16,23. Logiciel, une fois correctement étalonné et confirmé à détecter de manière fiable enquête objet, peut donner aussi données beaucoup plus rapides que la notation manuelle. Ce rendement de données plus rapide, à long terme, la production des économies nettes par rapport à l’homme-heures requises pour pointage manuel. Cependant, plupart des logiciels d’analyse comportementale ont des coûts initiaux élevés qui peuvent être prohibitifs pour nombreux laboratoires, et le pointage manuel souvent peut être réalisé par des étudiants-chercheurs, rendant les coûts horaires de la notation comportementales minimales. Logiciel commercial vient aussi souvent avec des restrictions sur combien d’utilisateurs peut accéder au logiciel simultanément, en limitant les économies de débit et temps de données. Bien qu’il y a beaucoup d’avantages à ces logiciels, ils ne sont pas nécessaires pour recueillir les informations essentielles de temps à étudier les objets de l’OLT et NORT. La capacité d’acquérir manuellement ces données rend les tâches de l’objet roman financièrement plus accessible à un plus large éventail de chercheurs.
Une caractéristique supplémentaire du présent protocole est que la première session d’accoutumance est essentiellement un essai en plein champ, qui peut obtenir des données sur l’activité et les niveaux d’anxiété. Niveaux d’activité peuvent être quantifiées à l’aide de la distance totale parcourue ou moyenne vitesse, si le logiciel de suivi est disponible. De même, avec le logiciel de suivi, les mesures d’anxiété peuvent provenir de temps passé dans le centre de l’arène ou la distance parcourue dans le centre. Ces données peuvent également être acquises manuellement en superposant la vidéo de la scène avec une grille et de quantifier les passages à niveau. Ces données de plein champ peuvent aider à exclure des déficits moteurs bruts ou une anxiété excessive qui pourrait interférer avec l’enquête objet plus tard.
Les tests statistiques utilisés dans le présent protocole sont représentatifs des méthodes traditionnelles d’analyse. Lors de la comparaison de 2 groupes de souris, un test t à deux échantillons, à deux points est recommandé de tester l’importance de la différence de pourcentage temps à étudier l’objet déplacé ou roman entre les groupes. Si la taille des échantillons n’est pas alignée, ont exceptionnellement forte variabilité ou présentent une variabilité inégale entre les groupes, qu’un test non paramétrique est recommandé au lieu de cela, car beaucoup des hypothèses sous-jacentes de l’essai soient violés dans ces conditions. Lors de la comparaison des groupes de 3 ou plus de souris, ANOVA est recommandés pour tester si le groupe a un effet significatif sur le pourcentage de temps enquêter sur l’objet déplacé ou roman. Erreur corrigée post-hoc essais, tels que le test de Tukey ou la correction de Bonferroni comparaisons deux à deux, peut être appliqué pour tester la différence de temps de l’enquête pour cent entre chaque paire de groupes. Avec le BTA, un moyen supplémentaire d’analyser des données est pour tester un changement important en pourcentage temps à étudier l’objet déplacé de formation aux essais d’OLT. Avec un seul groupe de souris, ce test prendrait la forme d’un appariés, bilatérale t-test, test des changements importants en pourcentage de temps avec l’objet déplacé d’une formation d’OLT dans chacune des souris (sans oublier que ce sont appariés analyses et pas indépendants mesures, étant donné que chaque souris donne deux points de données). Avec deux groupes de souris, une ANOVA bidirectionnelle serait utilisé, des mesures répétées avec la mesure répétée étant le procès (formation versus OLT) et affectation de groupe étant le deuxième facteur. Les tests post hoc des différences entre les groupes de traitement devraient comparer les groupes les uns aux autres dans les essais.
Alternativement, si preuve de mémoire dans le BTA ou NORT est tout ce qui est mis à l’essai, un test t à un échantillon du pourcentage de temps enquêter sur un objet par rapport à la valeur fixe de 50 % peut servir. Un pourcentage significativement plus élevé que 50 % de temps suggère la mémoire pour l’objet. Un pourcentage significativement inférieure à 50 % de temps suggère aversion (pour une raison quelconque), et choix de l’objet doivent être réévaluées. Toutefois, l’one-sample t-test ne peut pas révéler si deux ou plusieurs groupes diffèrent les uns des autres. Par exemple, dans une expérience avec deux groupes de souris, si le groupe A dépensé 60 % du temps avec l’objet nouveau pour p = 0,049 par un-sample t-test comparaison à 50 % et groupe B seulement dépensé 59 % du temps avec l’objet nouveau pour p = 0.051 , Groupe A est significativement différente de 50 % (et le groupe B n’est pas). Toutefois, il est erroné de conclure que ces deux groupes diffèrent sensiblement les uns des autres. Une comparaison de deux échantillons t-essai A et B peuvent facilement révèlent que ces deux groupes sont statistiquement indiscernables. Si l’objectif final est de comparer les performances de la mémoire de deux ou plusieurs groupes, ces groupes doivent être statistiquement comparées entre elles, non seulement par rapport à une norme externe. Un principe similaire s’applique pour une comparaison du temps passé avec un objet déplacé entre formation et BTA. Dans ce cas, trouver une différence significative dans le pourcentage de temps avec un objet déplacé entre formation et BTA dans un groupe et non dans un autre ne montre pas que ces groupes sont statistiquement différentes. Groupes doivent se trouver à posteriori contre uns contre les autres au sein de chaque procès, non seulement dans des essais au sein du groupe.
Il est important de garder à l’esprit que le temps de l’enquête de toute souris individuel ne peuvent pas être utilisée comme preuve pour ou contre la mémoire. Au contraire, mémoire pour l’emplacement de l’objet ou l’identité de ces tâches ne peut être conclu basé sur des données agrégées qui sont statistiquement par rapport aux données agrégées d’un autre groupe ou les niveaux de la chance fixe (50 % pour l’heure, 0 pour le ratio de la discrimination). La taille de l’échantillon nécessaire dépendra fortement de l’ampleur de l’effet d’une manipulation particulière et de la variabilité dans le comportement, qui dépendra à son tour les souris utilisées. Âge, sexe et manipulations tout impact de variabilité. Dans les données de l’exemple présentées dans la Figure 3 a et 3 b, n = 14 sujets ont été utilisés, ce qui donne une taille de l’effet de 0,68 et puissance de 0,65 pour un test t apparié avec α = 0,05. Si une puissance de 0,8 était souhaitée pour ce comparatif, un échantillon de 18 serait nécessaire.
Cette discussion est structurée autour des valeurs de p et de seuils de signification parce que ce sont les mesures et les analyses plus généralement rapportés pour données BTA et NORT et sont donc susceptibles de familier à la fois des expérimentateurs et des examinateurs. Cette dépendance sur les valeurs de p a été fortement critiquée comme non statistiquement valide26. Cependant, bien que les méthodes d’analyse des choix existent et sont approuvés dans certaines revues27, aucun ont été largement adoptés par les domaines biomédicaux et comportements comme norme26.
En résumé, ce protocole teste efficacement la mémoire chez les souris à un coût minime. Recommandations pour les modifications appropriées au protocole sont incluses pour s’assurer de la mise en œuvre réussie avec n’importe quel modèle petit rongeur. Application du présent protocole, des blessures spécifiques ou des modèles d’intervention thérapeutique peut révéler précieuse pertinence fonctionnelle qui complète les mécanismes cellulaires et moléculaires à l’étude.
The authors have nothing to disclose.
Ce travail a été financé par R00 NS089938 du NIH et des fonds de démarrage d’une lésion cérébrale chronique et thèmes de découverte à la Ohio State University à EDK.
Sign White – 9% Translucent and Opaque Colored Cast Acrylic (Chemcast) | TAP Plastics | NA | 1/4" x 15.75" x 15.75" with Routed Edges |
Sign White – 9% Translucent and Opaque Colored Cast Acrylic (Chemcast) | TAP Plastics | NA | 1/4" x 15.75" x 16.5" with Routed Edges |
Sign White – 9% Translucent and Opaque Colored Cast Acrylic (Chemcast) | TAP Plastics | NA | 1/4" x 16.5" x 16.5" with Routed Edges |
TAP Acryllic Cement (1 pt.) | TAP Plastics | NA | |
16 Gauge Hypo Applicator | TAP Plastics | NA | |
Debut Video Capture Software Pro Edition | NCH Software | NA | |
Stanely SAE/Metric Comb Square | Grainger | 6R171 | |
Logitech Pro Stream Webcam C922x | CDW | 4429927 | |
Belkin 16' USB 2.0 Active Extension Cable | CDW | 570691 | |
Panduit Pan-Way LD Surface Raceway (8') | CDW | 300902 | |
Spatial/Environmental Cues | Variable | NA | |
Objects for testing | Variable | NA | |
70% ethanol | Variable | NA | |
Double-sided tape | Variable | NA |