免疫活性化エージェント評価: リンパ組織抽出・注入経路依存性樹状細胞活性化
Summary
リンパの樹状細胞の活性化をテストするリンパ組織のそれに続く抽出の実験の手順を免疫ナノマテリアルの治療後。
Abstract
免疫療法やワクチン接種の新しい治療薬の評価、リンパ組織で免疫細胞の活性化の解析が不可欠です。ここでは、マウスの異なる投与経路からナノ粒子の形態での新規脂質 DNA 免疫賦活剤の免疫学的影響について調べた: 口腔・鼻腔内・皮下・足蹠、腹腔内、および静脈内投与。免疫反応とリンパ組織の収穫、これらの注射は直接影響、組織における樹状細胞 (DC) 活性化の分析はこれらの評価の重要な部分です。縦隔のリンパ節 (mLNs) の抽出が重要な非常に複雑なサイズとこの器官の位置のためです。鼠径リンパ節 (iLN)、百万、および脾臓を収穫し、フローサイトメトリーによる DC の活性化を分析するための段階的な手順を説明します。
Introduction
免疫学およびナノ材料の進歩は、生物医学、薬剤投与や免疫刺激などでアプリケーションの潜在的な新しい治療戦略の豊かさにつながっています。投与経路の最適化は、免疫刺激剤の有効性に影響を与える重要な側面です。DNA から成る免疫活性化ナノ粒子 (INP) は脂質 DNA1の両親媒性構造のためミクロ相分離法による自己組織化、新たに開発したナノ免疫アジュバントです。したがって、材料1の体内の別ルート、および鼠径リンパ節 (iLN)、縦隔の LN (mLN) や脾臓など、適切な組織を収穫するための 3 つの手順による管理を含む INP のプロトコル説明します。最後に、これらの組織は、樹状細胞 (DC) の活性化、免疫システムの最も強力な抗原提示細胞を分析しました。このプロトコルは、抗原、抗体、免疫アジュバントの他の2の評価にも適用できます。
偉大な約束を示しているエージェントである INP の定式化をテストしました。INP は Toll 様受容体 9 (TLR9) 免疫刺激のどの評価の有効性が別の射出成形方法3をテストに必要な核酸を含む補助材料。このコンテキストでは、DCs の刺激は生体内の評価のため強力なエンドポイントです。抗原や免疫活性化の分子は、末梢組織や血液での Dc によって貪食されて後、これらの細胞は LNs4、5脾臓などのリンパ器官に移行します。したがって、脾臓、iLN、注入された動物の mLN の DC の活性化を行った。従って、正しくこれらのティッシュの収穫は5新規アジュバントまたは病原体に対する免疫応答の評価のために重要ではまたです。このような組織の採取も癌治療としての新しい免疫学的方法論を開発するため重要です。さらに、このプロトコルは、他の薬剤、抗ひと免疫不全ウイルス治療6の性能を検証する使用できます。
Protocol
Representative Results
Discussion
ナノテクノロジーと免疫は多くの進歩は、ドラッグデリバリーや免疫刺激の治療法の研究によって達成されています。注入法の慎重な選択は、本研究の焦点だった、免疫刺激のため重要であると知られています。
当然のことながら非毒性と生分解性 DNA ベース材料、INP (免疫活性化ナノ粒子)、どのルートが最善の結果を得られた決定するためのルート別の射出成形を行っ…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この研究は創造的な材料探索プログラムを通じて国立研究財団の韓国 (NRF) 科学省、ICT および将来計画 (NRF 2017M3D1A1039421)、海洋バイオ テクノロジー プログラムによって資金を供給された資金を供給に支えられ、省の海洋と水産、韓国および補助金 (20150220)。
Materials
| Material | |||
| phosphate buffer saline | Corning | 21-040-CVR | Washing organs |
| (PBS, pH 7.4) | |||
| isoflurane solution | Aesica Queenborough limited | 26675-46-7 | Anesthesia process |
| Tuberculin 1mL syringe – | Junglim | N/A | Injection |
| 50 mL conical tube | S.P.L | 50050 | Anesthesia process |
| 1mL Insulin Syringe | (BD Ultra-FineTMII)_short needle | 324826 | Intramuscular Injection |
| DMEM High Glucose | Hyclone | SH30081.01 | Storing organs |
| Histopaque | Sigma-Aldrich | 10771 | FACS analysis |
| Ethyl alcohol anhydrous 99.5 % | Daejung | 4022-4110 | Disinfectant |
| Equipments | |||
| FineCycler C100 (Thermocycler) | Ssufine | – | Anealing |
| Centrifuge | Centrifuge | ||
| FACS tube | FALCON | 2052 | FACS analysis |
| Automated High-performance Flow Cytometer | BD (USA), FACSVerse | – | FACS analysis |
References
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