Immunostimulatory הסוכן הערכה: הלימפה רקמות החילוץ, הזרקת תא דנדריטי תלויי-נתיב ההפעלה
Summary
ניסיוני נהלי מיצוי הבאים של רקמות הלימפה כדי לבדוק את הפעלת תא דנדריטי הלימפה מתוארים לאחר טיפול nanomaterial immunostimulating.
Abstract
להערכה של סוכן טיפולית חדשה חיסוני או חיסון, ניתוח של הפעלת תא החיסון ברקמות לימפתי הוא חיוני. כאן, חקרנו אימונולוגי השפעות immunostimulant שומנים בדם הרומן-DNA בצורת ננו-חלקיק של נתיבי ממשל שונים העכבר: אוראלי, תוך-אפי, תת עורית, לו טביעות רגל, בקרום הבטן, תוך ורידי. זריקות אלה ישפיעו באופן ישיר את התגובה החיסונית, ולוקחים ברקמות לימפתי, ניתוח של הפעלת תא דנדריטי (DC) ברקמות מכריע חלקי בהערכות. החילוץ של בלוטות הלימפה mediastinal (mLNs) היא חשובה אבל מורכב למדי הגודל והמיקום של איבר זה. מתואר הליך stepwise קציר את הצומת לימפה במפשעה (iLN), mLN, טחול וניתוח DC הפעלה על ידי cytometry זרימה.
Introduction
ההתקדמות אימונולוגיה ו ננו הובילו שפע של פוטנציאל אסטרטגיות טיפוליות חדשות עבור יישומים וההתערבות, כולל משלוח סמים immunostimulation. אופטימיזציה של המסלול המינהל הוא היבט חיוני המשפיעים על היעילות של סוכנים immunostimulatory. Nanoparticle immunostimulatory (INP) בהיקף של ה-DNA הוא אדג’וונט ננו-החיסון פיתח עצמית נאספו על ידי הפרדה microphase בגלל המבנה amphiphilic של השומנים-DNA1. לכן, פרוטוקולים עבור INP מעורבים הניהול של ה גשמי1 ויוו דרך מסלולים שונים, שלושה הליכים על קצירת רקמות המתאימים כגון הצומת לימפה במפשעה (iLN), mediastinal LN (mLN), טחול, הם תיאר. לבסוף, רקמות אלו נותחו עבור הפעלת תא דנדריטי (DC), התאים אנטיגן החזקים ביותר במערכת החיסונית. פרוטוקול זה גם יכול להיות מיושם להערכת אנטיגנים, נוגדנים או אחרים adjuvants המערכת החיסונית2.
בדקנו את ניסוח INP כי הוא סוכן הראו הבטחה גדולה. INP הוא קולטן דמוי אגרה 9 (TLR9) חומר אדג’וונט המכיל חומצות גרעין, עבור איזו הערכה של immunostimulation יעילות נדרש לבדוק שיטות הזרקה שונים3. בהקשר זה, הגירוי של Dc הוא נקודת קצה של עוצמה להערכת ויוו . לאחר מולקולות של אנטיגן או immunostimulatory הם phagocytosed על-ידי בקרי רקמות היקפיים או דם, תאים אלה נודדים לאיברים הלימפה כגון הטחול ואת שירותי ההגירה4,5. לפיכך, DC הפעלה נותחו בטחול, iLN, ו mLN של החיות מוזרק. כראוי קצירת רקמות אלו לכן חיוני גם להערכת התגובה החיסונית הרומן אדג’וונט או פתוגנים5. קצירת רקמות כאלה חשוב גם לפיתוח מתודולוגיה הרומן אימונולוגי כטיפול בסרטן. יתר על כן, פרוטוקול זה יכול לשמש כדי לאמת את היעילות של תרופות אחרות, כגון כשל חיסוני האנטי-האדם וירוס הרפוי6.
Protocol
Representative Results
Discussion
ההתקדמות הרבה ננוטכנולוגיה ו אימונולוגיה הושגו באמצעות מחקר טיפולית של תרופות, immunostimulation. בחירה זהירה של שיטת הזרקת ידוע להיות חשובה עבור immunostimulation, אשר היה מוקד המחקר הנוכחי.
מסלולים שונים זריקה הוערכו על טבעי רעיל ולא מתכלה מבוסס DNA חומר INP (ננו-חלקיק immunostimulatory), כדי לקבוע א?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
מחקר זה נתמך על ידי תוכנית גילוי חומרים יצירתית באמצעות לאומי מחקר קרן של קוריאה (ב- NRF) ממומן על ידי משרד המדע, תקשוב העתיד תכנון (ה-NRF-2017M3D1A1039421), על-ידי תוכנית ביוטכנולוגיה ימית במימון משרד של אוקיינוסים, חלוצת, הרפובליקה של קוריאה, מענק (20150220).
Materials
| Material | |||
| phosphate buffer saline | Corning | 21-040-CVR | Washing organs |
| (PBS, pH 7.4) | |||
| isoflurane solution | Aesica Queenborough limited | 26675-46-7 | Anesthesia process |
| Tuberculin 1mL syringe – | Junglim | N/A | Injection |
| 50 mL conical tube | S.P.L | 50050 | Anesthesia process |
| 1mL Insulin Syringe | (BD Ultra-FineTMII)_short needle | 324826 | Intramuscular Injection |
| DMEM High Glucose | Hyclone | SH30081.01 | Storing organs |
| Histopaque | Sigma-Aldrich | 10771 | FACS analysis |
| Ethyl alcohol anhydrous 99.5 % | Daejung | 4022-4110 | Disinfectant |
| Equipments | |||
| FineCycler C100 (Thermocycler) | Ssufine | – | Anealing |
| Centrifuge | Centrifuge | ||
| FACS tube | FALCON | 2052 | FACS analysis |
| Automated High-performance Flow Cytometer | BD (USA), FACSVerse | – | FACS analysis |
References
- Park, H. . Preparation of dodecynyl modified DNA nanoparticles with unmethylated CpG adjuvant and ovalbumin for immunostimulation. , (2016).
- Jin, J. O., Park, H., Zhang, W., de Vries, J. W., Gruszka, A., Lee, M. W., Ahn, D. R., Herrmann, A., Kwak, M. Modular delivery of CpG-incorporated lipid-DNA nanoparticles for spleen DC activation. Biomaterials. 115, 81-89 (2017).
- Pal, I., Ramsey, J. D. The role of the lymphatic system in vaccine trafficking and immune response. Advanced Drug Delivery Reviews. 63 (10-11), 909-922 (2011).
- Jin, J. O., Kwak, M., Xu, L., Kim, H., Lee, T. H., Kim, J. O., Liu, Q., Herrmann, A., Lee, P. C. W. Administration of soft matter lipid-DNA nanoparticle as the immunostimulant via multiple routes of injection in vivo. ACS Biomaterial Science & Engineering. 3 (9), 2054-2058 (2017).
- Worbs, T., Hammerschmidt, S. I., Förster, R. Dendritic cell migration in health and disease. Nature Review Immunology. 17 (1), 30-48 (2017).
- Milling, S. W. F., Jenkins, C., MacPherson, G. Collection of lymph-borne dendritic cells in the rat. Nature Protocols. 1 (5), 2263-2270 (2006).
- Desormeaux, A., Bergeron, M. G. Lymphoid tissue targeting of anti-HIV drugs using liposomes. Methods in Enzymology. 391, 330-351 (2005).
- Machholz, E., Mulder, G., Ruiz, C., Corning, B. F., Pritchett-Corning, K. R. Manual restraint and common compound administration routes in mice and rats. Journal of Visualized Experiments. (67), (2012).
- Turner, P. V., Brabb, T., Pekow, C., Vasbinder, M. A. Administration of substances to laboratory animals: routes of administration and factors to consider. Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 50 (5), 600-613 (2011).
- . . General anesthesia of mice and rats. , (2016).
- . . Guidelines for the Euthanasia of Animals. , (2013).
- . JoVE Science Education Database. Lab Animal Research. Compound Administration I. Journal of Visualized Experiments. , (2018).
- . JoVE Science Education Database. Lab Animal Research. Compound Administration III. Journal of Visualized Experiments. , (2018).
- Mebius, R. E., Kraal, G. Structure and function of the spleen. Nature Review Immunology. 5 (8), 606-616 (2005).
