Summary

Implantatie en Registratie van Wireless electroretinogram en Visual opgewekte potentiele in Conscious Rats

Published: June 29, 2016
doi:

Summary

We tonen chirurgische implantatie en recording procedures visuele elektrofysiologische signalen van het oog (electroretinogram) en hersenen (visuele evoked potential) in ratten bij bewustzijn, dat meer analoog is aan de menselijke aandoening waarbij opnamen zonder verdoving uitgevoerd worden verwart meten.

Abstract

De full-field electroretinogram (ERG) en visuele evoked potential (VEP) zijn nuttige hulpmiddelen om retinale en visuele traject integriteit, zowel in het laboratorium en klinische settings te beoordelen. Op dit moment zijn preklinische ERG en VEP metingen uitgevoerd met verdoving te zorgen voor een stabiele elektrode plaatsingen. Echter, de aanwezigheid van anesthesie aangetoond dat normale fysiologische reacties verontreinigen. Om deze anesthesie verwart te overwinnen, ontwikkelen we een nieuw platform om ERG en VEP testen in bewuste ratten. Elektroden chirurgisch geïmplanteerd sub-conjunctivally op het oog om de ERG assay en epiduraal via visuele cortex naar het VEP meten. Een reeks van amplitude en gevoeligheid / timing parameters worden getest op zowel de ERG en de VEP op het vergroten van lichtgevende energie. De ERG en de VEP-signalen worden getoond stabiel en herhaalbaar zijn voor ten minste 4 weken na de chirurgische implantatie. Dit vermogen om ERG en VEP signalen opnemen zonder verdoving verwart in de preklinische setting moet superieur vertaling te verstrekken aan klinische gegevens.

Introduction

De ERG en VEP zijn minimaal invasief in vivo instrumenten om de integriteit van retinale en optische paden bepalen respectievelijk zowel het laboratorium en kliniek. De full-field ERG levert een karakteristieke golfvorm die naar beneden in verschillende onderdelen kan worden opgesplitst, waarbij elk element die verschillende cel klassen van de retinale pathway 1,2. De klassieke full-field ERG golfvorm bestaat uit een eerste negatieve helling (a-golf), waarvan is aangetoond dat om fotoreceptor activiteit na blootstelling aan licht 2-4 vertegenwoordigen. De a-golf wordt gevolgd door een substantiële positieve golfvorm (b-wave), die de elektrische activiteit van middelbare netvlies, voornamelijk de ON-bipolaire cellen 5-7 weerspiegelt. Voorts kan worden lichtenergie en inter-stimulus-interval variëren kegel isoleren van stang 8 reacties.

De flitser VEP vertegenwoordigt elektrische potentieel van de visuele cortex en de hersenstam in reactie op het netvlies licht stimulatie9,10. Deze golfvorm kan worden onderverdeeld in vroege en late componenten, met het begin van de component als gevolg van de activiteit van neuronen van de retino-geniculo-gestreept pathway 11-13 en wijlen component vertegenwoordigen corticale verwerking uitgevoerd in verschillende V1 laminae bij ratten 11,13. Daarom gelijktijdige meting van de ERG en VEP geeft uitgebreide beoordeling van de bij de visuele route structuren.

Momenteel, zodat elektrofysiologie bij dieren opnemen, anaesthesie wordt gebruikt voor een stabiele plaatsing van de elektroden mogelijk. Er zijn pogingen geweest om ERG en VEP meten bewuste ratten 14-16 geweest, maar deze studies gebruik van een bedraad setup, die lastig kan zijn en kan leiden tot een dier stress door het beperken van de verplaatsing van dieren en natuurlijk gedrag 17. Met recente ontwikkelingen in draadloze technologie, waaronder verbeterde miniaturisatie en batterij, is het nu mogelijk om een ​​telemetrie benadering ERG een inrichtingd VEP-opname, het verminderen van de stress in verband met bekabelde opnames en het verbeteren van levensvatbaarheid op lange termijn. Eigen centra stabiele implantaten telemetrie probes succesvol gebleken voor chronische controle van temperatuur, bloeddruk 18, activiteit 19 en 20 zijn elektro. Dergelijke vooruitgang in de technologie zal ook helpen met herhaalbaarheid en stabiliteit van de bewuste opnames, het verhogen van nut van het platform voor chronische studies.

Protocol

Ethiek statement: Animal experimenten werden uitgevoerd in overeenstemming met de Australische Code voor de zorg en het gebruik van dieren voor wetenschappelijke doeleinden (2013). Dierethiek goedkeuring werd verkregen van de Animal Ethics Committee, University of Melbourne. De materialen die hierin zijn voor laboratorium experimenten, en niet bedoeld voor medisch of diergeneeskundig gebruik. 1. Voorbereiden Elektroden Opmerking: Een drie kanaalzender wordt gebruikt voor chirurgische impla…

Representative Results

De fotoreceptor reactie wordt geanalyseerd door het aanbrengen van een vertraagde Gaussische aan de voorrand van het eerste neergaande tak van de ERG respons boven 2 lichtgevende energie (1,20, 1,52 log csm -2) per dier, naar het voorbeeld van Lamb and Pugh 22, geformuleerd door Hood en Birch 23. Deze formule geeft een amplitude en een gevoeligheid parameter (figuur 1C en 1D, respectievelijk). Een hyperbolische functie is…

Discussion

Door de minimaal invasieve karakter van visuele elektrofysiologie worden ERG en VEP recordings in menselijke patiënten uitgevoerd onder bewuste gevallen en vereisen het gebruik van topische anesthetica voor elektrodeplaatsing. Daarentegen wordt visueel elektrofysiologie in diermodellen gewoonlijk uitgevoerd onder algemene anesthesie stabiele plaatsing van de elektroden mogelijk door het elimineren vrijwillige oog en lichaamsbewegingen. Echter, veel gebruikte algemene anesthetica veranderen de ERG en VEP reacties zoals …

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

JC would like to acknowledge the David Hay Memorial Fund, The University of Melbourne for financial support in writing this manuscript. Funding for this project was provided by an ARC Linkage grant 100200129 (BVB, AJV, CTON).

Materials

Bioamplifier ADInstruments ML 135 Amplifies ERG and VEP signals
Carboxymethylcellulose sodium 1.0% Allergan CAS 0009000-11-7 Maintain corneal hydration during surgery
Carprofen 0.5% Pfizer Animal Health Group CAS 53716-49-7 Post-surgery analgesia, given with injectable saline for fluid replenishment
Chlorhexadine 0.5% Orion Laboratories 27411, 80085 Disinfection of surgical instrument
Cyanoacrylate gel activator RS components 473-439 Quickly dries cyanoacrylate gel
Cyanocrylate gel  RS components 473-423 Fix stainless screws to skull
Dental burr Storz Instruments, Bausch and Lomb E0824A Miniature drill head of ~0.7mm diameter for making a small hole in the skull over each hemisphere to implant VEP screws
Drill Bosch Dremel 300 series Automatic drill for trepanning
Enrofloxin Troy Laboratories Prophylactic antibiotic post surgey
Ganzfeld integrating sphere Photometric Solutions International Custom designed light stimulator: 36 mm diameter, 13 cm aperture size
Gauze swabs Multigate Medical Products Pty Ltd 57-100B Dries surgical incision and exposed skull surface during surgery
Isoflurane 99.9% Abbott Australasia Pty Ltd CAS 26675-46-7 Proprietory Name: Isoflo(TM) Inhalation anaaesthetic. Pharmaceutical-grade inhalation anesthetic mixed with oxygen gas for VEP electrode implant surgery
Kenacomb ointment Aspen Pharma Pty Ltd To reduce skin irritation and itching after surgery
Luxeon LEDs Phillips Lighting Co. For light stimulation, twenty 5 watt and one 1 watt LEDs, controlled by Scope software
Needle (macrosurgery) World Precision Instruments 501959 for suturing abdominal and head surgery, used with 3-0 suture, eye needle, cutting edge 5/16 circle Size 1, 15mm
Needle holder (macrosurgery) World Precision Instruments 500224 To hold needle during abdominal and head surgery
Needle holder (microsurgery) World Precision Instruments 555419NT To hold needle during ocular surgery
Optiva catheter Smiths Medical International LTD 16 or 21 G Guide corneal active electrodes from skull to conjunctiva
Povidone iodine 10% Sanofi-Aventis CAS 25655-41-8 Proprietory name: Betadine, Antiseptic to prepare the shaved skin for surgery 10%, 500 mL
Powerlab data acquisition system ADInstruments ML 785 Acquire signal from telemetry transmitter, paired to telemetry data converter
Proxymetacaine 0.5% Alcon Laboratories  CAS 5875-06-9 Topical ocular analgesia
Restrainer cutom made Front of the restrainer is tapered to minimize head movement, length can be adjusted to accommodate different rat length, overall diameter is 60 mm. 
Scapel blade R.G. Medical Supplies SNSM0206 For surgical incision
Scissors (macrosurgery) World Precision Instruments 501225 for cutting tissue on the abodmen and forhead
Scissors (microsurgery) World Precision Instruments 501232 To dissect the conjunctiva for electrode attachment
Scope Software ADInstruments version 3.7.6 Simultaneously triggers the stimulus via the ADI Powerlab system and collects data
Shaver Oster Golden A5 Shave fur from surgical areas
Stainless streel screws  MicroFasteners L001.003CS304 0.7 mm shaft diameter, 3 mm in length 
Stereotaxic frame David Kopf Model 900 A small animal stereotaxic instrument for locating the implantation landmarks on the skull
Surgical drape Vital Medical Supplies GM29-612EE Ensure sterile enviornment during surgery
Suture (macrosurgery) Ninbo medical needles 3-0 for suturing abdominal and head surgery, sterile silk braided, 60cm
Suture needle (microsurgery) Ninbo medical needles 8-0 or 9-0 for ocular surgery including, suturing electrode to sclera and closing conjunctival wound, nylon suture, 3/8 circle 1×5, 30cm
Telemetry data converter  DataSciences International R08 allows telemetry signal to interface with data collection software
Telemetry Data Exchange Matrix DataSciences International Gathers data from transmitters, pair with receiver
Telemetry data receiver DataSciences International RPC-1 Receives telemetry data from transmitter
Telemetry transmitter DataSciences International F50-EEE 3 channel telemetry transmitter
Tropicamide 0.5% Alcon Laboratories  Iris dilation
Tweezers (macrosurgery) World Precision Instruments 500092 Manipulate tissues during abdominal and head surgery
Tweezers (microsurgery) World Precision Instruments 500342 Manipulate tissues during ocular surgery

References

  1. Frishman, L. J. . Origins of the Electroretinogram. , (2006).
  2. Granit, R. The components of the retinal action potential in mammals and their relation to the discharge in the optic nerve. J Physiol. 77, 207-239 (1933).
  3. Brown, K. T. The eclectroretinogram: its components and their origins. Vision Res. 8, 633-677 (1968).
  4. Brown, K. T., Murakami, M. Biphasic Form of the Early Receptor Potential of the Monkey Retina. Nature. 204, 739-740 (1964).
  5. Kline, R. P., Ripps, H., Dowling, J. E. Generation of b-wave currents in the skate retina. Proc Natl Acad Sci U S A. 75, 5727-5731 (1978).
  6. Krasowski, M. D., et al. Propofol and other intravenous anesthetics have sites of action on the gamma-aminobutyric acid type A receptor distinct from that for isoflurane. Mol Pharmacol. 53, 530-538 (1998).
  7. Stockton, R. A., Slaughter, M. M. B-wave of the electroretinogram. A reflection of ON bipolar cell activity. J Gen Physiol. 93, 101-122 (1989).
  8. Nixon, P. J., Bui, B. V., Armitage, J. A., Vingrys, A. J. The contribution of cone responses to rat electroretinograms. Clin Experiment Ophthalmol. 29, 193-196 (2001).
  9. Weinstein, G. W., Odom, J. V., Cavender, S. Visually evoked potentials and electroretinography in neurologic evaluation. Neurol Clin. 9, 225-242 (1991).
  10. Sand, T., Kvaloy, M. B., Wader, T., Hovdal, H. Evoked potential tests in clinical diagnosis. Tidsskr Nor Laegeforen. 133, 960-965 (2013).
  11. Brankack, J., Schober, W., Klingberg, F. Different laminar distribution of flash evoked potentials in cortical areas 17 and 18 b of freely moving rats. J Hirnforsch. 31, 525-533 (1990).
  12. Creel, D., Dustman, R. E., Beck, E. C. Intensity of flash illumination and the visually evoked potential of rats, guinea pigs and cats. Vision Res. 14, 725-729 (1974).
  13. Herr, D. W., Boyes, W. K., Dyer, R. S. Rat flash-evoked potential peak N160 amplitude: modulation by relative flash intensity. Physiol Behav. 49, 355-365 (1991).
  14. Guarino, I., Loizzo, S., Lopez, L., Fadda, A., Loizzo, A. A chronic implant to record electroretinogram, visual evoked potentials and oscillatory potentials in awake, freely moving rats for pharmacological studies. Neural Plast. 11, 241-250 (2004).
  15. Szabo-Salfay, O., et al. The electroretinogram and visual evoked potential of freely moving rats. Brain Res Bull. 56, 7-14 (2001).
  16. Valjakka, A. The reflection of retinal light response information onto the superior colliculus in the rat. Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol. 245, 1199-1210 (2007).
  17. Lapray, D., Bergeler, J., Dupont, E., Thews, O., Luhmann, H. J. A novel miniature telemetric system for recording EEG activity in freely moving rats. J Neurosci Methods. 168, 119-126 (2008).
  18. Lim, K., Burke, S. L., Armitage, J. A., Head, G. A. Comparison of blood pressure and sympathetic activity of rabbits in their home cage and the laboratory environment. Exp Physiol. 97, 1263-1271 (2012).
  19. Nguyen, C. T., Brain, P., Ivarsson, M. Comparing activity analyses for improved accuracy and sensitivity of drug detection. J Neurosci Methods. 204, 374-378 (2012).
  20. Ivarsson, M., Paterson, L. M., Hutson, P. H. Antidepressants and REM sleep in Wistar-Kyoto and Sprague-Dawley rats. Eur J Pharmacol. 522, 63-71 (2005).
  21. He, Z., Bui, B. V., Vingrys, A. J. The rate of functional recovery from acute IOP elevation. Invest Ophthalmol Vis Sci. 47, 4872-4880 (2006).
  22. Lamb, T. D., Pugh, E. N. A quantitative account of the activation steps involved in phototransduction in amphibian photoreceptors. J Physiol. 449, 719-758 (1992).
  23. Hood, D. C., Birch, D. G. Rod phototransduction in retinitis pigmentosa: estimation and interpretation of parameters derived from the rod a-wave. Invest Ophthalmol Vis Sci. 35, 2948-2961 (1994).
  24. Charng, J., et al. Conscious wireless electroretinogram and visual evoked potentials in rats. PLoS Onez. 8, e74172 (2013).
  25. Galambos, R., Szabo-Salfay, O., Szatmari, E., Szilagyi, N., Juhasz, G. Sleep modifies retinal ganglion cell responses in the normal rat. Proc Natl Acad Sci U S A. 98, 2083-2088 (2001).
  26. Meeren, H. K., Van Luijtelaar, E. L., Coenen, A. M. Cortical and thalamic visual evoked potentials during sleep-wake states and spike-wave discharges in the rat. Electroencephalogr Clin Neurophysiol. 108, 306-319 (1998).
  27. Nair, G., et al. Effects of common anesthetics on eye movement and electroretinogram. Doc Ophthalmol. 122, 163-176 (2011).
  28. Amouzadeh, H. R., Sangiah, S., Qualls, C. W., Cowell, R. L., Mauromoustakos, A. Xylazine-induced pulmonary edema in rats. Toxicol Appl Pharmacol. 108, 417-427 (1991).
  29. Charng, J., et al. Retinal electrophysiology is a viable preclinical biomarker for drug penetrance into the central nervous system. J Ophthalmol. , (2016).

Play Video

Cite This Article
Charng, J., He, Z., Bui, B., Vingrys, A., Ivarsson, M., Fish, R., Gurrell, R., Nguyen, C. Implantation and Recording of Wireless Electroretinogram and Visual Evoked Potential in Conscious Rats. J. Vis. Exp. (112), e54160, doi:10.3791/54160 (2016).

View Video