Immunohistochemistry : 벡터 연구소에서 Vectastain ABC 키트를 사용하여 파라핀 섹션

파라핀 섹션의 염색법 Dewax 각 5 분 배 크실렌 (피셔 X3 S -4)로 슬라이드 (사용에 따라 매월 변경 크실렌, 크실렌은 독성입니다.) 피셔 심판 08-812 – 1A 및 랙에서 20 슬라이드에 요리와 커버를 사용하여 이러한 요리를 맞게했다. 접시 당 200 ML 액체. (모든 이주 경사도를 변경) 다음과 같이 알코올 기울기를 통해 하이드 레이트 : 2 분 각각에 대해 100 %의 에탄올 (피셔 # A406 – 20)의 2 배 2 분 각 95 % 에탄올에 2 배 2 분 70 %의 에탄올에 1X 1X 2 분 50 % 에탄올에 1X 2 분 30 %의 에탄올에 2 분 1X ddH 2 O 5 분 DPBS의 소크 (DPBS = Dulbecco의 수정 인산이 칼슘 2 살린 버퍼 +와 MG 2 +). 항원 복구 : 전자렌지에 미리 열을 나 – 구연 산염 완충액 (10 MM, 산도 6.5). 전자 레인지에서 15 분 슬라이드를 요리. 슬라이드 이렇게 모든 분을 확인하고 필요한 경우 나이 – 구연 산염 추가 건조하지 않습니다. 실온에서 냉각하자. 1% 20 분 대한 DPBS에서 H 2 O 2 (30 % 주식의 1.5 ML 시그마 50 ML의 DPBS에서 H – 1009).과 내생 퍼옥시데이즈 활동 블럭 DPBS 3 X 5 분에서 만끽해보세요. 4 ° DPBS에서 C + 5% 소 혈청 알부민 (BSA) + 0.1 % 나 Azide + 5% 혈청에서 하룻밤 잠복기가 아닌 특정 사이트를 차단합니다. 참고 : 혈청 중 선택이 얼룩에 사용되는 항체가 만들어진하는 종류에 따라 달라집니다. 보조 AB가 (비오틴에 복합)되었다있는 수종의 혈청과 차단합니다. 이 사용할 수없는 경우, 기본 AB가되었다하는 것과 다른 종 혈청 사용합니다. 아비딘 / 비오틴 차단 키트 (벡터 실험실 카탈로그 # SP – 2001)와 비오틴 사이트를 차단 : 15 분 아비딘 D와 부화. DPBS로 간단히 씻어. 15 분 대한 비오틴 솔루션과 부화. DPBS에 상온에서 2 시간, + 2% BSA + 0.1 % NaAzide + 혈청 2% (단계를 차단과 같은)에 대한 기본 AB에 품어. PBS 3 X 5 분에서 만끽해보세요. DPBS에서 실온 + 2% BSA + 0.1 % 나 Azide + 혈청 2퍼센트 (차단 단계에 사용되는 동일). 1 시간 동안 비오틴과 복합 보조 AB와 부화 이것을 사용하기 전에 최소한 30 분 개발할 수 있기 때문에 동시에 ABC 시약을 준비! (자료 참조) 50 ML 원뿔 관에 준비합니다. 15 ML의 DPBS에서 (없음 묘약, 아니 azide) 시약 3 방울을 추가, 믹스 및 시약의 B와 믹스 3 방울을 추가합니다. 병 쥐어 않도록, 오히려 자신의 양식에 방울 기다립니다. 벡터 실험실에서 ABC 키트 Vectastain PK – 6100. DPBS 3 X 5 분에서 만끽해보세요. 실온에서 30-45 분 ABC 시약과 부화. DPBS 3 X 5 분에서 만끽해보세요. (자료 참조) 사용하기 전에 즉시 유리관 5 ML ddH 2 O에서 (벡터 실험실 #은 SK – 4100) DAB 퍼옥시데이즈 기판 준비 버퍼 주식 솔루션 2 방울, 혼합 DAB 4 방울, 혼합 (약간 갈색이 될해야합니다) 2 방울 H 2 O 2, 믹스 슬라이드 위에 DAB 기판을 드롭과 갈색 얼룩 살펴보십시오. 얼음 파고 슬라이드 + 반응을 중지 수돗물. 5 분 차가운 수돗물에 따라 헹굼. Hematoxylin (20 초, 피셔 CS401 – D)와 Counterstain과 물이 빠져나가 올때까지 수돗물에 씻어. 알코올 기울기는 100 % 에탄올 (2 분 각)으로 30 % 에탄올로 최대 시작을 통해 탈수. 크실렌 3 X 5 분에서 만끽해보세요. Permount와 마운트 (피셔 # SP15 – 100) : 슬라이드에있는 섹션 위의 일부를 넣고 기포없이 coverslip으로 섹션에 천천히 누르십시오. ~ 24 시간이 소요되는, 완전히 건조까지 coverslip를 이동하지 마십시오.