Intraductal injektion: Levering injektion mix i kanalerne i musens mammary Gland

1. Intraductal injektion

1. Brug aseptiske teknikker under hele den kirurgiske procedure.
2. Lav et snit sted på huden i en længde på ~ 1 cm mellem de to fjerde inguinal MGs (Figur 1). Adskil forsigtigt hudflappen (med MG) fra parietal peritoneum for at visualisere brystkanaltræet.
3. Hold forsigtigt brystvorten med Urmagerens pincet, og fjern den udvendige brystvorte uden at skære i nærliggende hud ved hjælp af en mikrodissektionssaks.
4. Lad ~3-5 μL Ad-Cre injektionsblanding i en 25 μL Hamilton sprøjte med en 33 G metalnav nål fastgjort. Estimer mængden af injektionsblandingen i sprøjten baseret på det blå farvestof, der indgår i blandingen.
   BEMÆRK: Brug et mindre volumen (f.eks. 3 μL), når du injicerer i LAG'er på 3-4 uger gamle hunner og et større volumen (f.eks. 10 μL), når de injiceres i MGs af ammende hunner.
5. Hold forsigtigt kanten af hudflappen med en fin buet pincet og injicere Ad-Cre injektion blandingen langsomt ind i brystvorten, i mellemtiden overvågning spredning af blå farvestof i brystkanalen træet. Hold injektionshastigheden så lav som muligt for at undgå skader på ductal lumen.
   BEMÆRK: Injiceret væske (som illustreret ved den medfølgende bromophenol blå farvestof) breder sig over hele kanaltræet uden at lække ind i det stromale rum indikerer en vellykket intraductal injektion.
6. Træk forsigtigt nålen ud af brystvorten for at undgå lækage af den injicerede væske.
7. Undersøg mg'ens distale side (dvs. væk fra brystvorten) eller det omgivende område af den injicerede brystvorte. Bemærk, at hævelse blå farvestof (dvs. farvestof spredes i den nærliggende stroma) indikerer en bryst fedt pad injektion snarere end en vellykket intraductal injektion.
8. Luk de kirurgiske sår (fra 1,2) i huden med sårklemmer.

2. Postoperativ pleje

1. Fjern musen fra anæstesi og læg den på en varmepude inde i et rent bur til genopretning.
2. Meloxicam underbydes igen ved 5 mg/kg igen, 24 timer efter operationen.
3. Overvåg dyrets generelle forhold og se efter tegn på infektion på indsnitsstedet i 5 dage.
4. Sårklemmer fjernes ~ 7-10 dage efter operationen.

Figur 1: Skematisk diagram over intraductal injektion af Ad-Cre-virus i en MG. (A) Indsnit i midterlinjen mellem de to fjerde MGs. (B) Intraductal injektion af Ad-Cre med et blåt farvestof (for bedre visualisering) i en af de fjerde MGs. (C) Lukning af indsnit i huden ved sår klip