Génération de mammosphères primaires : une technique pour déterminer la puissance cellulaire
Published: April 30, 2023
Abstract
Source : Lombardo et coll., Mammosphere Formation Assay from Human Breast Cancer Tissues and Cell Lines. J. Vis. Exp. (2015).
Cette vidéo décrit l’isolement des cellules souches cancéreuses des lignées de cellules cancéreuses du sein. Nous avons cultivé ces cellules souches cancéreuses pour générer des mammosphères primaires pour évaluer l’auto-renouvellement et calculer l’efficacité de formation de sphère, permettant la comparaison entre différentes densités d’ensemencement.
Protocol
1. Génération de mammosphères primaires à partir de lignées cellulaires du cancer du sein humain REMARQUE: Effectuez les étapes suivantes sous un capot de culture stérile. Préparer Mammosphere Media contenant du DMEM/F12 complété par 2 mM de L-glutamine, 100 U/ml de pénicilline, 100 U/ml de streptomycine. Préparer les supports complets immédiatement avant l’utilisation en ajoutant 20 ng/ml de facteur de croissance épidermique humain recombinant (FEM; …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
| DMEM/F12 | Lonza | CC-3151 | |
| 2 mM L-glutamine | Sigma Aldrich | G8540 | |
| 100 U/ml Penicillin & Streptomycin | Sigma Aldrich | P4083 | |
| 20 ng/ml Recombinant human epidermal growth factor (EGF) | Sigma Aldrich | E9644 | |
| 20 ng/ml Recombinant human basic fibroblast growth factor (bFGF) | R&D systems | 233-FB-025 | |
| 1x B27 supplement | Invitrogen | 17504-044 | |
| Phosphate buffered saline (PBS) | Thermo Scientific | 12399902 | |
| 0.5% trypsin/0.2% EDTA | Sigma Aldrich | 59418C | |
| Fetal calf serum | First Link UK | 02-00-850 | |
| Trypan blue | Sigma Aldrich | 93595 | |
| Low attachment 6-well plates | Corning | CLS3814 |
Cite This Article
Generation of Primary Mammospheres: A Technique to Determine Cell Potency. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20211, doi: (2023).