Поколение первичных маммосфер: методика определения потенции клеток
Published: April 30, 2023
Abstract
Источник: Lombardo et. al., Mammosphere Formation Assay от тканей рака молочной железы человека и клеточных линий. J. Vis. Exp. (2015).
Это видео описывает изоляцию раковых стволовых клеток от линий клеток рака молочной железы. Мы культурируем эти раковые стволовые клетки для генерации первичных маммосфер для оценки самообновления и расчета эффективности формирования сферы, что позволяет проводить сравнение по различным плотностям посева.
Protocol
1. Поколение первичных маммосфер из человеческих линий клеток рака молочной железы ПРИМЕЧАНИЕ: Выполните следующие шаги под стерильным вытяжки культуры. Приготовьте Mammosphere Media, содержащий DMEM/F12, дополненный 2 мМ Л-глутамином, 100 U/ml пенициллином, 100 U/ml стрептом…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
| DMEM/F12 | Lonza | CC-3151 | |
| 2 mM L-glutamine | Sigma Aldrich | G8540 | |
| 100 U/ml Penicillin & Streptomycin | Sigma Aldrich | P4083 | |
| 20 ng/ml Recombinant human epidermal growth factor (EGF) | Sigma Aldrich | E9644 | |
| 20 ng/ml Recombinant human basic fibroblast growth factor (bFGF) | R&D systems | 233-FB-025 | |
| 1x B27 supplement | Invitrogen | 17504-044 | |
| Phosphate buffered saline (PBS) | Thermo Scientific | 12399902 | |
| 0.5% trypsin/0.2% EDTA | Sigma Aldrich | 59418C | |
| Fetal calf serum | First Link UK | 02-00-850 | |
| Trypan blue | Sigma Aldrich | 93595 | |
| Low attachment 6-well plates | Corning | CLS3814 |
Cite This Article
Generation of Primary Mammospheres: A Technique to Determine Cell Potency. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20211, doi: (2023).