単一ワームPCR:ゲノムDNAを抽出し増幅する方法
Published: April 30, 2023
Abstract
出典:前、H.、他.CRISPR/Cas9リボヌクレオタンパク質を用いたC.エレガンスにおけるゲノムポイント変異体を生成するための迅速かつ容易なパイプライン。J. ヴィス・エクス(2018).
このビデオでは、PCRスクリーニングによって単一の線虫を遺伝子マーカーに対して迅速にスクリーニングする手法について説明します。プロトコルの例では、CRISPRベースのゲノム編集をスクリーニングします。
Protocol
以下のプロトコルは、CRISPR/Cas9リボヌクレオタンパク質を使用してC.エレガンスでゲノムポイント変異体を生成するための迅速かつファシリティパイプライン、J.Vis.Expからの抜粋である。(2018). 単一ワーム PCR とジェノタイピング 産卵の1-2日後、ワームピックを使用?…
Representative Results
図 1.C.エレガンソド-1遺伝子座のCRISPR-Cas9エンジニアリング。(A) C.エレガンスにおけるソド-1軌跡のエキソンイントロン構造を描いた模式図。赤いバーは、エキソン3のG93の位置を示します。プライマー対セットは赤い矢印(F1-R1)で示される。(B<…
Materials
| Nuclease-free water | Synthego Inc. | provided with the sgRNA kit EZ kit | |
| KCl | Sigma | P5405 | |
| DNA Clean & Concentrator | Zymo Research | D4004 | |
| Zymoclean Gel DNA Recovery Kit | Zymo Research | D4002 | |
| Q5 Hot Start High-Fidelity 2X Master Mix | New England Biolabs | M0494L | |
| Proteinase K | Sigma | P2308 | |
| MgCl2 | Sigma | M2393 | |
| NP-40 | Sigma | 74385 | |
| Tween-20 | Fisher Scientific | BP337-100 | |
| RNaseZap Decontamination Solution | Fisher Scientific | AM9780 |
Cite This Article
Single Worm PCR: A Method to Extract and Amplify Genomic DNA. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20133, doi: (2023).