قياس صلابة انحناء الخلايا البكتيرية باستخدام فخ البصرية
Summary
نقدم بروتوكولا للخلايا بكتيرية الانحناء الخيطية تعلق على سطح الغطاء للانزلاق مع اعتراض الضوئية لقياس صلابة الخلوية الانحناء.
Abstract
وضعنا بروتوكولا لقياس صلابة الانحناء من البكتيريا على شكل قضيب الخيطية. وتطبق القوات مع اعتراض البصرية ، وهي مجهرية ثلاثية الأبعاد الربيع مصنوع من الضوء الذي يتكون عندما تركز ليزر كثافة عالية شعاع لبقعة صغيرة جدا من عدسة المجهر وموضوعية. لثني خلية ، ونحن ربط first البكتيريا تعيش على ساترة كيميائيا المعاملة. وهذه الخلايا تنمو ، وسط الخلايا تظل ملزمة لساترة ولكن ينتهي المتزايد خالية من هذا التقييد. عن طريق حفز النمو الخيطية مع سيفاليكسين المخدرات ، ونحن قادرون على تحديد الخلايا التي كان عالقا في واحدة من نهاية الخلية إلى السطح في حين أن الطرف الآخر لا يزال غير مرتبط وعرضة لقوى الانحناء. ثم يتم تطبيق قوة الانحناء مع اعتراض الضوئية ملزمة حبة متعدد الليزين المغلفة لغيض من خلية المتنامية. وقد سجلت كل من القوة والتشريد من حبة وصلابة الانحناء من الخلية هو المنحدر من هذه العلاقة.
Protocol
Discussion
ويهدف البروتوكول المقدمة هنا لقياس كمي لخصائص الثني من الخلايا البكتيرية. ويمكن تطبيق الإعداد لتجربة أي خلية على شكل قضيب التي يمكن تقديمها للنمو filamentously. وقد استخدمنا بنجاح هذا الإعداد لبحث الآثار المترتبة على شعيرات على صلابة هيكل الخلية الثني من E. القولونية الخلايا. ويمكن استخدام هذا الأسلوب نفسه لتقييم أدوار ، والضغط صلابة جدار الخلية داخل الخلايا ومكوناتها الأخرى في تحديد صلابة الانحناء عموما من الخلايا.
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
نعترف نصائح مفيدة من الشمس على الخلايا Mingzhai ملزمة لالسطوح. نشكر نيد Wingreen وغيتاي زيمر للمناقشات قيمة. وأيد هذا البحث من قبل المعاهد الوطنية للصحة منح P50GM07150 الوطني التوظيف جائزة مؤسسة العلوم PHY – 0844466 وP. ألفريد سلون مؤسسة.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| cephalexin | Sigma | C4895-5G | ||
| polyethylenimine | Sigma | 181978-5G | ||
| polylysine | Sigma | P8920 | ||
| 0.5-μm-diameter polystyrene beads | Bangs Laboratory | PS03N | ||
| Nano-LP Series nanopositioning system | Mad City Labs | NanoLP series | http://www.madcitylabs.com/nanolpseries.html |
References
- Janmey, P. A., McCulloch, C. A. Cell mechanics: integrating cell responses to mechanical stimuli. Annu Rev Biomed Eng. 9, 1-34 (2007).
- Morris, D. M., Jensen, G. J. Toward a biomechanical understanding of whole bacterial cells. Annu Rev Biochem. 77, 583-613 (2008).
