유전체 수정을 위한 검열: Drosophila에 있는 CRISPR 생성한 돌연변이를 확인하는 방법
Published: April 30, 2023
Abstract
출처: Du, L., 외. 게놈 편집에 의해 Drosophila에서 조직 특정 이진 전사 시스템을 생성하기위한 효율적인 전략. J. 비스 익스펙. (2018).
이 비디오는 CRISPR-Cas9를 사용하여 게놈이 변형된 트랜스제닉 드로소필라 파리를 식별하는 스크리닝 방법을 설명합니다. CRISPR-Cas9는 과학자들이 유기체의 게놈을 조작할 수 있는 방식에 혁명을 일으켰던 강력한 게놈 편집 도구입니다. 실시예 프로토콜에서, 우리는 환원 서열의 삽입이 분기리스(bnl) 유전자의 첫 번째 엑소온을 대체하는 CRISPR 생성 돌연변이를 식별하는 방법을 볼 수 있으며, 따라서 bnl 유전자 특이적 드라이버 라인, bnl-LexA를 생성한다.
Protocol
이 프로토콜은 Du et al.에서발췌, 게놈 편집에 의해 Drosophila에서 조직 특정 이진 전사 시스템을 생성하기위한 효율적인 전략, J. Vis. Exp. (2018). 1. 비행 유전학 및 스크리닝 (그림 1 및 그림 2) 주입된 태아가 성인으로 발전할 때, 각 G0 파리를 교차하여 균형을 이면 파리를 날아갑니다. 대상 적색을 포함하는 염색체에 적합한 밸러싱을 선택합니다…
Representative Results
그림 1: CRISPR/Cas9 매개 게놈 편집을 위한 워크플로우 개요를 통해 이진 전사 시스템을 생성합니다. 각 단계에 필요한 대략적인 시간 시간이 표시됩니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오. <img alt="Figure 2" class="xfig…
Materials
| Tris-HCl | Sigma Aldrich | T3253 | Molecular Biology |
| EDTA | Sigma Aldrich | E1161 | Molecular Biology |
| NaCl | Sigma Aldrich | S7653 | Molecular Biology |
| UltraPure DNase/RNase-Free Water | ThermoFisher Scientific | 10977-023 | Molecular Biology |
| Primers | IDT-DNA | PCR | |
| Proteinase K | ThermoFisher Scientific | 25530049 | Molecular Biology |
| 2x PCR PreMix, with dye (red) | Sydlab | MB067-EQ2R | Molecular Biology |
| MKRS/TB6B | Kornberg lab | Fly line | |
| CO2 station | Genesee Scientific | 59-122WCU | fly pushing |
| Stereo microscope | Olympus | SZ-61 | fly pushing |
| Microtube homogenizing pestles | Fisher-Scientific | 03-421-217 | genomic DNA isolation |
Cite This Article
Screening for Genomic Modifications: A Method to Identify CRISPR-Generated Mutants in Drosophila. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20110, doi: (2023).