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章
- 00:05Introduction
- 01:34Engineering a Fluorescence-Based Reporter Cell Line
- 03:10Designing gRNAs for CRISPR/dCas9-Based Epigenetic Silencing of Target Gene
- 04:13Arrayed Transient Delivery of CRISPR/dCas9-Based ETRs in Reporter Cell Line
- 07:19Analyzing Transcriptional Activity of Target Gene Over Time
- 08:11Results: dCas9 ETR-Mediated Epigenetic Silencing of Human B2M Gene by gRNAs
- 09:23Conclusion
Qui, presentiamo un protocollo per la selezione in vitro di repressori trascrizionali ingegnerizzati (ETR) con un'efficienza di silenziamento alta, a lungo termine, stabile, on-target e bassa attività a livello di genoma, off-target. Questo flusso di lavoro consente di ridurre un repertorio iniziale e complesso di ETR candidati a un breve elenco, adatto per un'ulteriore valutazione in contesti terapeuticamente rilevanti.
