현장 및 실험실 조건에서 인수공통선충을 진단하기 위한 간단한 분변 부유 방법

위장 기생충은 개에게 영향을 미치는 가장 흔한 건강 문제 중 하나입니다¹. 추정에 따르면 전 세계적으로 ~7억 마리의 반려견이 있으며, 약 1억 7,500만 마리가 자유롭게 돌아다니는 것으로 분류될 수 있습니다². 60종 이상의 기생충이 개와 인간 사이에 공유되고 있으며, 이는 개가 이러한 기생충에 감염된 인간의 감염원이 될 수 있음을 시사한다³. 톡소카라 카니스(Toxocara canis)와 안시로스토마 카니눔(Ancylostoma caninum)은 개와 우연히 인간 숙주를 감염시키는 두 가지 기생 종입니다. 현재 멕시코에서 이 기생충이 생존하고 번식할 수 있는 위치에 대한 여러 연구가 있습니다. 개에서 톡소카라의 유병률은 미국, 멕시코, 중미 및 카리브해 전역에서 0%에서 87% 이상까지 다양합니다⁴. 톡소카라 카니스(Toxocara canis)와 안시로스토마(Ancylostoma spp.) 및 개의 다른 기생 종은 이전에 멕시코에서 보고된 바 있다 5,6,7,8,9,10,11,12,13 (표 1).

표 1: 2001년부터 2020년까지 멕시코의 개 기생충의 지역별 유병률(%). 2001년부터 2020년까지 수행된 이전 조사의 결과를 통해 멕시코의 여러 도시 및 농촌 환경에서 개 기생충 분포를 식별할 수 있었습니다. 이러한 연구는 다양한 생태계에서 개 기생충의 지속성에 도움이 되는 역학적 요소에 대한 깊은 이해를 제공하여 일부 기생충 종의 인수공통감염병 영향에 대한 포괄적인 평가에 기여합니다.

알, 낭종, 난포 또는 유충과 같은 장내 기생충의 생애 주기 단계는 대변 샘플에서 찾을 수 있습니다. 따라서 배설물을 검사하면 동물의 기생충에 대한 귀중한 정보를 얻을 수 있습니다. 인간의 대변에서 Ancylostomidae 알을 검출하는 방법에 대한 필요성으로 인해 1878 년에 간단한 대변 도말이 사용되었으며, 이는 수년 동안 위장 기생충을 검출하는 데 사용되었지만 그다지 민감하지 않은 것으로 간주되었습니다. 따라서 더 나은 공미시적 방법을 개발할 필요성이 제기되었습니다¹⁴. 대변 샘플에서 기생충 알을 회수하고 계수하는 부유 선광 기술이 처음 기술된 지¹⁰⁰년 이상이 지났습니다 15. 그 이후로 부양 기술의 여러 방법과 변형이 숙주에서 일부 기생충을 검출하기위한 표준으로 간주되었습니다.

예를 들어, Lane은 1924년에 원심분리를 통합한 후 SpG 1.2 in 1g(Lane) 또는 10g(Stoll’s modification)의 포화 염화나트륨 용액에 침전물을 띄우는 직접 원심 부유 기술을 포함하는 방법을 설명했습니다. 부유 기술은 이후에 상이한 SpG¹⁴를 갖는 용액을 사용하여 수정하였다. 1939년 Gordon과 Whitlock은 기생충 알을 시각화할 때 찌꺼기의 간섭으로 인한 Stoll 기술의 단점을 보고하고 McMaster¹⁶으로 알려진 정량적 방법을 개발했습니다. 1979년에, 오그래디(O’Grady)와 슬로콤(Slocombe)은 용액의 비중, 타이밍 및 스트레이너의 메쉬 크기가 부유 기술¹⁷을 사용하여 계란 검출의 정확도에 영향을 미친다는 것을 증명하였다. 지난 수십 년 동안 부유 선광 기술에 몇 가지 수정이 이루어졌기 때문에 부양 방법의 표준화가 시급합니다. 현재, 인수공통선충의 감염 단계로 인한 환경 오염을 제한하기 위해 적절한 구충 치료를 적용하기 위해 인수공통감염병 예방의 맥락에서 개 기생충 감염을 검출하는 것이 필요하다¹⁸.

정성적 방법 중에서 분변 부유 기술은 많은 장비가 필요하지 않고 간단하고 저렴하며 재현 가능하기 때문에 널리 사용되고 수용됩니다. 그러나 감염 강도가 낮을 때 민감도가 떨어진다는 큰 단점이 있다¹⁹. 알, 난포, 낭종, 또는 선충 유충과 같은 더 많은 수의 기생 요소의 존재를 드러내는 능력은 통상적으로 용액(²⁰)의 밀도에 의해 결정된다.

이전 보고서에서는 개 선충 알을 검출하기 위한 공기생충 기술을 비교했습니다. 운동성 원생동물의 검출과 관련하여 직접 분변 도말이 사용됩니다. 침강 방법은 trematodes²¹과 같은 기생충의 무거운 알을 진단하는 데 유용합니다. 가장 널리 사용되는 현장 기반 진단 검사 중 하나는 대변 도말 방법입니다. 그러나 이 기술의 낮은 수준의 감도는 기생충 알의 감지를 방해하는 파편이 포함되어 있다는 사실에 기인할 수 있습니다. 적절한 SpG를 제공하는 용액과 함께 체질 단계를 통합함으로써 부유선광 분석법은 무서룩 및 십이지장충 알을 보다 명확하고 덜 복잡하게 관찰할 수 있습니다. 이는 현미경 스크리닝을 위한 보다 정밀하고 효율적인 프로세스로 이어진다²². 마찬가지로, 단순 부유선광법과 직접 원심 부유선광법은 기생충 알과 난포낭을 회수하기 위해 매우 일반적으로 활용된다¹⁴. 고전적인 부유 선광 방법은 McMaster 방법¹⁵와 같은 계수 챔버의 사용에 따라 정성적 또는 정량적 인 것으로 간주 될 수 있습니다. 그럼에도 불구하고 부유 선광 기술은 민감도가 낮고 특허 기간 동안 기생충 검출에 중점을 두기 때문에 부정적인 결과가 결정적인 것으로 간주되어서는 안 됩니다. 그러나 정확도는 분변 샘플의 보존 절차 또는 부유 용액의 SpG에 따라 달라질 뿐만 아니라 사용자의 분변 검사 수행에 대한 기술적 숙련도와 경험에 따라 달라집니다.

결과적으로, 대변에서 개 기생충을 검출하기 위한 다른 방법이 연구되었습니다. 개의 장내 기생충 감염 진단을 위해 가장 널리 사용되는 접근법 중 하나는 튜브 내의 부유 프로토콜 및 맥마스터 기법(^McMaster technique)과 비교할 때 개의 A. caninum 진단을 위한 정확하고 신뢰할 수 있는 결과를 산출하는 다가 민감하고 정확한 방법인 FLOTAC 기법인 FLOTAC 기법이라는 것이 일반적으로 인식되어 왔다. ²³. 침전법은 흡충 알, 배아 선충 알 및 대부분의 촌충 알을 회수하는 데 유용하며, 이러한 구조물은 부유하지 않기 때문에 부유 용액의 표면에서 회수할 수 없다²⁴. 부유선광/침강 기법보다 우수한 것으로 입증된 한 가지 방법은 변변 내 세스토드 알을 검출할 수 있고, 시간이 덜 걸리며, 분변 파편에서 아노플로세팔라 알을 분리하고, 결정화를 감소시키기 때문에 수정된 이중 원심 부유선광법이다²⁵. 더욱이, 이 기술은 고감도²⁶으로 아스카리드 알을 검출하는데 성공적으로 사용되었다. 그러나 앞서 언급한 기술 및 Ovassay와 같은 원심 분리 방법 중 일부는 이 연구에서 제안하는 부유 프로토콜과 달리 포르말린, 상용 키트, 실험실 조건에서의 샘플 처리, 고가의 황산아연²⁷과 같은 시약의 사용과 같은 시약의 사용이 필요하며 환경 독성을 피하기 위해 특별한 폐기 절차가 필요합니다.

최근에는 SpG가 높은 용액을 첨가하여 부유선광법의 감도를 높이는 기법을 사용하는 것이 선호되고 있습니다. 그러나 이러한 솔루션의 단점은 최종 준비에서 파편이 증가하여 기생충 알이 부정확하다는 점을 고려해야합니다. 또한, 재료, 시약, 비용, 환경 영향 문제 및 원심 방법의 사용의 어려움의 상업적 가용성은 부유 기술¹⁴의 선택에 영향을 미치며, 이는 우리가 본 연구에서 제시하는 프로토콜과 달리 현장 조건에서 어려울 수 있습니다. 식염으로 부유 용액을 준비하는 것은 현장 조건에서 설탕이 말벌 및 꿀벌과 같은 곤충을 유인하고 준비가 끈적 거리기 때문에 설탕을 사용하는 것보다 유리합니다. 또한, 끈적임을 피하기 위해 설탕 용액에 첨가되는 페놀 또는 ZnSO₄와 같은 용액은 환경 보호 지침에 따라 적절하게 폐기하기가 복잡하고 현장에서 폐기할 수 없습니다. 식염 용액과 달리.

이 원고의 목표는 현장 및 실험실 조건에서 간단한 부유 기술을 적용하여 대변 샘플에서 T. canis 및 Ancylostoma spp. 알을 검출하는 단계를 보여주는 것입니다. 여기에 설명된 프로토콜에 따라 백업 배터리가 있는 현미경을 사용하여 실험실 장비 및 인프라를 사용할 수 없는 경우 시골 및 교외 지역에서 이러한 개 인수공통감염병 기생충을 진단할 수 있습니다. 이 연구에서 설명하는 간단한 부유선광 방법은 빠른 결과를 제공할 수 있으며 일상적인 스크리닝을 위한 비침습적이고 비용 효율적인 기술입니다.