概要

Organotypic Hippocampal 슬라이스 문화

Published: February 03, 2011
doi:

概要

우리는 쉽게 다른 뇌 영역 적용할 수 있습니다 organotypic hippocampal 조각을 준비하는 방법을 설명합니다. 뇌 조각이 인터페이스를 형성하기 위해 허용되는 구멍이 세포막과 문화 미디어에 누워있다. 이 방법은 최대 문화에 이주하는 해마의 매출 구조를 유지합니다.

Abstract

해마는 변연 계 시스템의 구성 요소, 장기 기억과 공간적 탐색 1 중요한 역할을 담당하고 있습니다. Hippocampal 신경 강력한 정품 인증 짧은 기간 이후에 그들의 연결 강도를 수정할 수 있습니다. 장기 potentiation (LTP)으로 알려진이 현상은, 몇 시간 또는 며칠 동안 지난 수 있으며, 학습과 기억이 가장 적합한 후보기구가되었다. 또한, 해마 3 잘 정의된 해부 및 연결은 시냅스 전달 및 시냅스 소성 4를 공부하는 클래식 모델 시스템을 만들었습니다.

hippocampal 시냅스의 생리에 대한 우리의 이해가 성장하고 분자 플레이어가 확인되자, 시냅스 단백질을 조작할 필요가 필수적이되었습니다. Organotypic hippocampal 문화는 쉬운 유전자 조작과 정확한 약리 개입 가능성을 제공하지만, 일상 문화 dissociated 뉴런 방법보다 더 자연 맥락에서 버렸네 기능을 이해하는 것이 중요합니다 신경 조직을 유지합니다.

여기 우리는 쉽게 다른 뇌 영역 적용할 수 있습니다 hippocampal 조각 준비하고 문화에 방법을 제시한다. 이 방법은 바이러스 감염 5,6 또는 biolistics 7과 같은 다른 방법을 사용하여 유전자 조작을위한 조각에 쉽게 액세스할 수 있습니다. 또한, 조각 쉽게 생화학 assays 8 복구할 수, 또는 영상 9 electrophysiological 실험 10 현미경으로 전송.

Protocol

1. Hippocampal 조각의 준비를 시작하기 전에. 테플론 시트의 한 조각을 배치하고 새 블레이드를 장착하여 조직의 기계를 준비​​합니다. 70 % 에탄올과 조직 문화 (TC) 후드를 닦으과 해부 현미경 내부를 설정합니다. 후드, 현미경, 조직 슬라 이서 및 자외선과 함께 15 분 동안 모든 해부기구를 소독. 식스 웰 TC 플레이트를 준비합니다. 각 우물에 750 μL 슬라이스 문화 미디어 (SCM)?…

Discussion

이 방법은 11. 첫째 Stoppini 외에 기술된 방법에 따라 문화 hippocampal 조각하는 빠른 방법을 제공합니다. 이 프로토콜의 가장 중요한 부분은 조각이 멸균 유지하는 것입니다, 따라서 그것은 적절한 살균 기술을 사용하고 적절히 조직과의 접촉에있는 모든 자료를 소독하고 소독하는 것이 중요합니다.

다른 serums 소스는 조각의 품질에 영향을 미칠 수있다. 우?…

開示

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

이 작품은 NINDS에 의해 투자되었다 – NIH R01NS060756은

Materials

Material Name タイプ Company Catalogue Number Comment
Cell culture inserts   Millipore PICM03050  
6 well plates   BD Falcon 353046  
Tissue Slicer   Stoelting 51425/51415  
Microscope   Olympus SZX7-ILLD2-100  
Hippocampus dissecting tool   F.S.T 10099-15  
Large utility scissors. Perfection   F.S.T 37500-00/37000-00 Right/ Left handed  
Iris Spatula   F.S.T 10093-13  
Straight spatula   F.S.T 10094-13  
Rounded spoon micro spatula   VWR 57949-039  
Dissecting single cutting edge needle   Electron Microscopy Science 72946  
Dissecting tweezers   Dummont #2  
Small dissecting scissors   F.S.T 14060-10  
MEM Eagle medium   Cellgro 50-019 PB  
Horse serum heat inactivated   Invitrogen 26050-88  
L-Glutamine (200 mM)   Invitrogen 25030081  
CaCl2 (1 M)   Sigma C3881  
MgSO4 (1 M)   Sigma M2773  
Insulin (1 mg/ml), dissolved in HCl 0.01 N   Sigma I0516  
Ascorbic Acid, solution (25%)   Sigma A4544  
D-Glucose   Sigma G5767  
NaHCO3   Sigma S6014  
Hepes   Sigma H7523  
Sucrose   Sigma S5016  
Phenol Red Solution 0.5% in DPBS   Sigma P0290  
KCl   Sigma P3911  
MgCl2 (1 M)   Sigma M9272  

参考文献

  1. Martin, S. J., Grimwood, P. D., Morris, R. G. Synaptic plasticity and memory: an evaluation of the hypothesis. Annu Rev Neurosci. 23, 649-711 (2000).
  2. Bliss, T. V., Collingridge, G. L., Morris, R. G. I. n. t. r. o. d. u. c. t. i. o. n. Long-term potentiation and structure of the issue. Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci. 358, 607-611 (2003).
  3. Shepherd, G. M. . The synaptic organization of the brain. , (2004).
  4. Malinow, R., Tsien, R. W. Presynaptic enhancement shown by whole-cell recordings of long-term potentiation in hippocampal slices. Nature. 346, 177-180 (1990).
  5. Malinow, R. Introduction of green fluorescent protein (GFP) into hippocampal neurons through viral infection. Cold Spring Harb Protoc. , (2010).
  6. Shi, S., Hayashi, Y., Esteban, J. A., Malinow, R. Subunit-specific rules governing AMPA receptor trafficking to synapses in hippocampal pyramidal neurons. Cell. 105, 331-343 (2001).
  7. Woods, G., Zito, K. Preparation of gene gun bullets and biolistic transfection of neurons in slice culture. J Vis Exp. , (2008).
  8. Esteban, J. A. PKA phosphorylation of AMPA receptor subunits controls synaptic trafficking underlying plasticity. Nat Neurosci. 6, 136-143 (2003).
  9. Mainen, Z. F. Two-photon imaging in living brain slices. Methods. 18, 231-239 (1999).
  10. Barria, A., Malinow, R. Subunit-specific NMDA receptor trafficking to synapses. Neuron. 35, 345-353 (2002).
  11. Stoppini, L., Buchs, P. A., Muller, D. A simple method for organotypic cultures of nervous tissue. J Neurosci Methods. 37, 173-182 (1991).
  12. Simoni, A. D. e., Griesinger, C. B., Edwards, F. A. Development of rat CA1 neurones in acute versus organotypic slices: role of experience in synaptic morphology and activity. J Physiol. 550, 135-147 (2003).

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記事を引用
Opitz-Araya, X., Barria, A. Organotypic Hippocampal Slice Cultures. J. Vis. Exp. (48), e2462, doi:10.3791/2462 (2011).

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