Um método rápido para processamento de sangue para aumentar o rendimento dos níveis plasmáticos de peptídeos no sangue humano

À luz da crescente prevalência de obesidade em todo o mundo ^1,2, a pesquisa no campo da regulação da ingestão de alimentos está a ganhar importância. Embora até agora apenas um péptido é conhecido que está perifericamente produzido e actuando centralmente para estimular a ingestão de alimentos, ou seja, a grelina ^3, dentro das últimas décadas, uma ampla variedade de péptidos foi identificado e reduzir a ingestão de alimentos, por exemplo. leptina, péptido YY (PYY) e também glucagon-like peptide-1 (GLP-1) e insulina ^4, portanto, em estudos investigando os mecanismos de regulação dos níveis de fome e de péptidos saciedade são frequentemente avaliada e, ao mesmo tempo, é assumido que o péptido estudado seja estável e recuperados em rendimentos elevados durante a formação do plasma. No entanto, muitas vezes não é este o caso, devido à rápida desagregação endógena como mostrado anteriormente por ex. grelina que é degradada a partir de acilo para desacil grelina ^5. Por isso, recentemente descreveu o método rápido para proces sanguecantar em ratos empregando temperaturas R educed, A cidification, P rotease inibição, eu sotopic controles exógenas e D ilution ^6. Este método melhorou a recuperação para 11 dos 12 péptidos testados e permitidos para a determinação da forma molecular circulando correcta em relação ao padrão de processamento de sangue (sangue com EDTA em gelo) ^6. Este método tem sido utilizado em vários estudos subsequentes ^7-12 para a detecção de grelina de circulação, bem como o factor de libertação da corticotropina ^13. Por isso, o método tem-se revelado útil para a pesquisa de péptidos em roedores. No entanto, uma vez que estudos com roedores não são sempre traduzível a outra espécie animal, o método deve ser estabelecida para o uso no sangue humano bem.

O objetivo do presente estudo foi testar o método rápido para processamento de sangue em seres humanos em comparação com o processamento de sangue padrão, o sangue EDTA em gelo, que é amplamente recomendada ¹⁴ e frequentemente used no, bem como ambiente de pesquisa clínica. Testamos a recuperação de uma selecção de ¹²⁵ péptidos I-rotulados envolvidas na regulação da ingestão de alimentos, incluindo péptidos estabelecidos, bem como novos candidatos recentemente sugerido para desempenhar um papel na alimentação de regulação (efeitos sobre o consumo de alimentos são mostrados na Tabela 1) após tratamento com ambos os métodos. As hormonas também foram escolhidos para representar péptidos de comprimento e carga (Tabela 2) diferente. Além disso, para a grelina foi investigada a forma (s) molecular seguindo o método padrão e RAPID. Por fim, avaliamos grelina endógena (acil e grelina desacil), bem como os níveis de kisspeptin, um peptídeo também sugeriu recentemente a desempenhar um papel na regulação da ingestão de alimentos ^15,16 seguinte processamento rápido ou padrão. Além disso, também foi investigado estes níveis de péptido numa população de indivíduos com uma vasta gama de índice de massa corporal (variando 10,2-67,6 kg / m ²⁾ para estudar podiferenças le relacionados ao peso corporal cronicamente alterado.

Diagnóstico, Avaliação e plano:
Os participantes do estudo
Todos os participantes do estudo foram pacientes recentemente hospitalizados (inclusão estava dentro de dois dias de admissão ao hospital) da Divisão de Medicina Psicossomática na Charité-Universitätsmedizin Berlim e deu consentimento informado por escrito. Para evitar qualquer impacto do gênero só foram incluídos pacientes do sexo feminino. Um total de 42 sujeitos participaram neste estudo e foram divididos em três grupos: peso normal (IMC 18,5-25 kg / m ^2, n = 12), anorexia nervosa (IMC <17,5 kg / m ^2, n = 15) e obesidade (IMC> 30 kg / m ^2, n = 15). Anoréxica e pacientes obesos eramdiagnosticados de acordo com a Classificação Internacional de Doenças-10 e hospitalizado por ganho de peso (anorexia nervosa) ou redução do peso (obesidade), respectivamente. Todos os pacientes com peso normal foram hospitalizados exclusivamente devido a sintomas somatoformes sem perturbações somáticas relevantes. Foram excluídos pacientes com sintomas somatoformes gastrointestinais ou história de cirurgia gastrointestinal. Os critérios de exclusão também engloba uma idade <18 anos, gravidez atual e doenças psicóticas não tratados. A colheita de sangue foi efectuada no dia 2 ou 3 após a admissão hospitalar antes de receber o tratamento dietético, a fim de aumentar ou reduzir o peso corporal, respectivamente. parâmetros antropométricos foram avaliados no mesmo dia.