혈액 처리를위한 빠른 방법은 인간의 혈액에서 혈장 펩타이드 수준의 수율을 증가하는
Summary
신속한 혈액 처리 방법은 인간에 사용되는 더 높은 펩티드 농도를 얻을뿐만 아니라 올바른 분자 형태의 평가를 허용 할 수있다. 따라서,이 방법은 펩타이드 연구에 귀중한 도구가 될 것입니다.
Abstract
음식 섭취 조절 분야에서의 연구는 중요성을 얻고있다. 이것은 종종 음식 섭취를 조절하는 펩타이드의 측정을 포함한다. 펩티드의 농도의 정확한 결정을 위해, 그 피 처리 동안에 안정해야한다. 그러나,이 신속 내인성 펩티다아제에 의해 분해되는 여러 펩티드의 경우에는 아니다. 최근에, 우리는 R educed 온도하는 cidification를 사용하는 혈액 처리 방법을 개발, P 나는 외생 컨트롤과 쥐의 사용을위한 D의 ilution (RAPID)를 sotopic, 억제를 rotease. 여기서 우리는 인간의 사용을위한이 기술을 확립 및 복구, 분자 형태와 음식 섭취 조절 호르몬의 순환 농도를 조사 하였다. 신속한 방법은 크게 125 I 표지 된 소마토스타틴 -28 (+ 39 %), 글루카곤 유사 펩티드 -1 (+ 35 %)을위한 복구 아실 그렐린 글루카곤 (+ 32 %), 인슐린 kisspeptin (+ 29 % 향상 ) nesfatin-1 (+ 28 %), 렙틴(+ 21 %) 및 표준 처리 (얼음 EDTA 혈액, P <0.001)에 비해 펩티드 YY 3-36 (+ 19 %). 표준 후 처리 아실 그렐린의 62 % 가능성 desacyl 그렐린을 나타내는 피크 이전에 얻어진 분해 동안 고성능 액체 크로마토 그래피는 RAPID 처리 후의 예상 위치 내인성 아실 그렐린의 용출 하였다. 표준 처리 하였다 (p = 0.03) 다음 1시 23분에 비해 3 : 신속한 처리 후 정상 체중 환자의 혈액에서 아 / desacyl 그렐린의 비는 1. 또한 내인성 kisspeptin 레벨 표준 처리에 비해 RAPID 후에 높았다 (+ 99 %, p = 0.02). 신속한 혈액 처리 방법은 인간에서 사용될 수있는 더 높은 펩티드 농도를 산출하고 정확한 분자 형태의 평가를 허용한다.
Introduction
1,2- 비만의 세계적인 보급 증가에 비추어, 음식 섭취 조절 분야에서의 연구는 중요성을 얻고있다. 지금까지 단 하나의 펩티드 둘레 생성하는 것으로 알려져 중앙 지난 수십 년 내에 음식 섭취, 즉 그렐린 (3)을 자극하는 역할을하는 반면, 펩티드의 다양한 예 : 음식물 섭취를 줄이는 것이 확인되었다. 렙틴, 펩티드 YY (PYY)과 같은 글루카곤 유사 펩티드 -1 (GLP-1) 및 인슐린 (4), 따라서, 기아 포만 펩티드 레벨의 조절 메커니즘을 조사하는 연구들은 평가되고 동시에, 상정 검토 펩타이드 안정적인 플라즈마 형성시 높은 수율로 회수된다. 예에 대한 이전 바와 같이 단, 자주 이는 급속한 내인성 고장이 아니다. 그렐린 5 desacyl하는 아에서 분해되는 그렐린. 따라서, 우리는 최근 혈액 처리 용 빠른 방법을 설명R educed 온도하는 cidification를 사용하는 쥐에서 노래, P 나는 외생 컨트롤 및 D의 ilution 6 sotopic, 억제를 rotease. 이 방법 (11) (12)의 테스트 펩타이드 (얼음 EDTA 혈액) 표준 혈액 처리에 비해 정확한 순환하는 분자 형태를 결정하기위한 허용 6 회복을 향상시켰다. 이 방법은 부 신피질 자극 호르몬 방출 인자 (13)뿐만 아니라 그렐린 순환을 검출하기위한 몇 가지 후속 연구 7-12에 사용되어왔다. 따라서,이 방법은 설치류에서 펩타이드 연구에 유용 입증되었습니다. 설치류 연구는 다른 종 항상 병진 아니므 그러나,이 방법도 사람의 혈액에서 사용하기 위해 설정되어야한다.
본 연구의 목적은 광범위 14 U 자주 추천 표준 혈액 처리 얼음 EDTA 혈액에 비하여 인간의 혈액 처리를위한 신속한 방법을 시험했다임상과 연구 환경에서 나오지. 최근 다음 처리 (식품 섭취에 대한 효과를 표 1에 나타낸다) 규제 공급에 중요한 역할을 제안 확립 펩타이드뿐만 아니라 새로운 후보 비롯한 음식 섭취의 조절에 관여하는 125 I 표지 된 펩타이드의 선택 회수 시험 두 가지 방법으로. 호르몬은 또한 다른 길이 및 충전 (표 2)의 펩티드를 표현하기 위해 선택되었다. 또한, 그렐린을 위해 우리는 표준 및 RAPID 방법에 따라 분자 형태 (들)을 조사 하였다. 마지막으로, 내생 그렐린 (아실 desacyl 그렐린)뿐만 아니라 kisspeptin 레벨 최근 RAPID 또는 표준 처리 다음 15,16 음식 섭취의 조절에 중요한 역할을 제안 펩타이드를 평가 하였다. 또,도 possib을 연구 (10.2-67.6 kg 범위 / m 2) 체질량 지수의 광범위한 환자의 집단에서 이러한 펩티드 수준을 조사만성 변경 체중 관련 르 차이.
진단, 평가 및 계획 :
연구 참여자
모든 연구 참가자는 새로 샤리 테 – Universitätsmedizin 베를린에서 정신 신체 의학 부문 (포함 병원에 입원 이틀 이내) 환자를 입원하고 동의서를 작성했다. 성별의 영향 만 여성 환자가 포함되었다을 방지합니다. 42 과목의 총이 연구에 참여하고 세 그룹으로 나누었다 : 정상 체중 (BMI 18.5-25 kg / m 2, N = 12), 신경성 식욕 부진 (BMI <17.5 kg / m 2, N = 15)과 비만 (BMI> 30kg / m 2, N = 15). 식욕 부진과 비만 환자였다질병-10의 국제 분류에 따라 진단 각각 체중 증가 (신경성 식욕 부진) 또는 체중 감소 (비만), 병원에 입원. 모든 정상 체중 환자 인해 관련 신체 장애없이 신체형 증상에 독점적으로 병원에 입원했다. 위장 신체형 증상이나 위장 수술의 병력이있는 환자는 제외 하였다. 제외 기준은 시대 <십팔년, 현재 임신과 치료 정신 질환에 포함. 채혈은 각각 증가하거나, 체중을 감소시키기 위해식이 요법 치료를 받기 전에 입원 후 2 일 또는 3 일에 수행 하였다. 인체 파라미터는 같은 날에 평가 하였다.
Protocol
Representative Results
Discussion
우리는 혈액 처리 용 RAPID 방법 래트 6 표준 혈액 처리에 비해 11/12 펩티드 회복을 개선하는 것이 이전에보고 하였다. 본 연구에서 우리는이 방법은 또한 인간의 사용에 적합 것으로 나타났습니다. 신속한 처리에 따라, 시험 구 (125) 9 I-표시 펩티드에 대한 복구는 표준 혈액 처리 (얼음 EDTA 혈액)에 비해 향상되었다. 관찰 된 향상은, 특히 펩티드의 수율이 낮은 경우 만 마스크 할 수 ?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 작품은 교육 및 연구 03IPT614A (CG)에 대한 독일 연구 재단 STE 1765 / 3-1 (AS)와 독일 정부에 의해 지원되었다. 우리는 조직과 인체 측정의 실행에 대한 도움말은 라인 하르트 Lommel와 페트라 BUSSE 우수한 기술 지원뿐만 아니라 카린 요한슨과 크리스티나 Hentzschel 감사합니다
Materials
| diprotin A | Peptides International, Louisville, KY, USA | IDP-4132 | |
| E-64-d | Peptides International, Louisville, KY, USA | IED-4321-v | |
| antipain | Peptides International, Louisville, KY, USA | IAP-4062 | |
| leupeptin | Peptides International, Louisville, KY, USA | ILP-4041 | |
| chymostatin | Peptides International, Louisville, KY, USA | ICY-4063 | |
| Sep-Pak C18 cartridges | Waters Corporation, Milford, MA, USA | WAT051910 | 360 mg, 55-105 µm |
| acyl-ghrelin | Millipore, Billerica, MA, USA | 9088-HK | Radioactive |
| GLP-1 | Millipore, Billerica, MA, USA | 9035-HK | Radioactive |
| glucagon | Millipore, Billerica, MA, USA | 9030 | Radioactive |
| insulin | Millipore, Billerica, MA, USA | 9011S | Radioactive |
| leptin | Millipore, Billerica, MA, USA | 9081-HK | Radioactive |
| kisspeptin-10 | Phoenix Pharmaceuticals, Burlingame, CA, USA | T-048-56 | Radioactive |
| nesfatin-1 | Phoenix Pharmaceuticals, Burlingame, CA, USA | T-003-26 | Radioactive |
| PYY3-36 | Phoenix Pharmaceuticals, Burlingame, CA, USA | T-059-02 | Radioactive |
| somatostatin-28 | Phoenix Pharmaceuticals, Burlingame, CA, USA | T-060-16 | Radioactive |
| ZORBAX Rapid Resolution HT SB-C18 column | Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA | 822700-902 | 2.1 x 50 mm, 1.8 µm |
| Agilent 1200 LC | Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA | HPLC, several components, therefore no single catalog number | |
| Kisspeptin RIA | Phoenix Pharmaceuticals, Burlingame, CA, USA | # RK-048-56 | Radioactive |
| Total ghrelin RIA | Millipore, Billerica, MA, USA | # GHRT-89HK | Radioactive |
| Active ghrelin RIA | Millipore, Billerica, MA, USA | # GHRA-88HK | Radioactive |
| SigmaStat 3.1 | Systat Software, San Jose, CA, USA | online download |
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