ניתוח טובולה מאליפיאני מזבוב למבוגרים: בידוד אוסמורגולטוריה ואיבר הפרשה
Published: April 30, 2023
Abstract
מקור: רוסאנו, A. J. ורומרו, M. F. כימות אופטי של pH תאיים ב Drosophila מלנוגאסטר מאפיגי צינור אפיתליה עם מחוון pH מקודד גנטית פלואורסצנט. ג’יי ויס אקספ. (2017).
מאמר זה מתאר את הניתוח של הצינוריות המלפיגיות (MT) מטיסת דרוזופילה נקבה ופרוטוקול לדוגמה מרוסאנו ואח ‘. (2017) שבו MTs מוכנים להדמיה חיה בתא זלוף.
Protocol
פרוטוקול זה הוא קטע מתוך רוסאנו ורומרו, כימות אופטי של pH תאיים ב Drosophila melanogaster מלופיג’יאן Tubule Epithelia עם מחוון pH מקודד גנטית פלואורסצנט, J. Vis. Exp. (2017). 1. הכנת שקופיות פולי-ל-ליסין צייר גבול של 40 x 20 מ”מ עם עט PAP הידרופובי סביב החלק העליון של שקופיות סטנדרטיות של 75 x 25 מ”מ …
Representative Results
איור 1: ייצור מוטות זכוכית לטיפול בצינורות מלופיגיים.A – E. תהליך חימום ומשיכת מוט זכוכית כדי לייצר התחדדות וזווית המתאימים לטיפול ב- MTs. חצים מציינים כיוון ועוצמת כוח שיש ליישם. F.תצלום של כלי זכוכית מפוברק כראוי. סרג?…
Materials
| Poly-L-Lysine (PLL) Solution | Sigma-Aldrich | P4832 | Store at 4 °C, can be reused. |
| Adhesive Perfusion Chamber Covers, adhesive size 1 mm, chamber diameter × thickness 9 mm × 0.9 mm, ports diameter 1.5 mm | Sigma-Aldrich | GBL622105 | Can be substituted as needed to match perfusion system. |
| Sylgard 184 Silicone Elastomer Kit | Ellsworth Adhesives | 184 SIL ELAST KIT 0.5KG | Available from multiple vendors. |
| Helping Hands Soldering Stands | Harbor Freight Tools | 60501 | Available from multiple vendors. |
| Schneider's Medium | Fisher Scientific | 21720024 | Store at 4 °C in sterile aliquots. |
| #5 Inox Steel Forceps | Fine Science Tools | 11252-20 | Can be substituted based on experimenter comfort. |
| 35 x 10 mm polystyrene Petri dish | Corning Life Sciences | Fisher Scientific 08-757-100A | Exact brand and size are unimportant. |
| 75 x 25 mm Microscope Slides | Corning Life Sciences | 2949-75X25 | Exact brand and size can vary as long as perfusion wells are compatible. |
| Filimented Borosilicate Capillary Glass, ID 1.5 mm, OD 0.86 mm, thickness 0.32 mm | Warner Instruments | 64-0796 | Filiment not necessary, glass can be substituted to match perfusion tubing and perfusion wells. |
| Vacuum Silicone Grease | Sigma-Aldrich | Z273554 | Available from multiple vendors. |
| Glass rods, 5 mm diameter | delphiglass.com | 9198 | Exact size is personal preference, multiple vendors available |
| PAP Hydrophobic Pen | Sigma-Aldrich | Z377821 | Available from multiple vendors. |
| Sealing Film | Sigma-Aldrich | P7668 | Available from multiple vendors. |
| 15 mL Falcon tube | BD Falcon | 352096 | Available from multiple vendors. |
| 50 mL Falcon tube | BD Falcon | 352070 | Available from multiple vendors. |
| Dissecting Stereoscope | Zeiss | Discovery.V8 | Any dissecting stereoscope can be used. |
| UAS-pHerry transgenic Drosophila melagnogaster | Available from Romero Lab | First published: Rossano et al., 2017 | |
| capaR-GAL4 driver line Drosophila melagnogaster | Available from Romero Lab | First published: Terhzaz et al., 2012 | |
| c724-GAL4 driver line Drosophila melagnogaster | Available from Romero Lab | First published: Sozen et al., 1997 | |
| Single-edged Carbon Steel Razor Blade | Electron Microscopy Sciences | 71960 | Available from multiple vendors. |
| Microscopy Slide Folder | Fisher Scientific | 16-04 | Available from multiple vendors. |
| Bunsen Burner | Fisher Scientific | 50-110-1231 | Available from multiple vendors. |
| Polystrene Drosophila Rearing Vials with Flugs | Genesee Scientific | 32-109BF | Comparable items can be substituted. |
| 2.5 L Laboratory Ice Bucket | Fisher Scientific | 07-210-129 | Available from multiple vendors. |
| 200 uL barrier pipette tips | MidSci | AV200 | Available from multiple vendors. |
| 200 μL variable volume pipette | Gilson Incorporated | PIPETMAN P200 | Available from multiple vendors. |
Citazione di questo articolo
Malpighian Tubule Dissection from an Adult Fly: Isolating an Osmoregulatory and Excretory Organ. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20102, doi: (2023).