성인 비행에서 말피난 투굴 해부 : Osmo조절 및 배설 기관을 분리
Published: April 30, 2023
Abstract
출처: 로사노, A. J. 및 로메로, M. F. 드로소필라 멜라노가스터 말피기안 투굴 에피텔리아에서 세포내 pH의 광학 적정량은 형광 유전적으로 인코딩된 pH 표시기. J. 비스 익스펙. (2017).
이 문서에서는 여성 드로소필라 플라이의 전방 말피기안 튜블러(MT)와 로사노 외의 예제 프로토콜에 대해 설명합니다. (2017) MT가 관류 챔버에서 라이브 이미징을 위해 준비하는.
Protocol
이 프로토콜은 로사노와 로메로에서 발췌, Drosophila 멜라노가스터 말피난 투불 에피텔리아에서 세포 내 pH의 광학 정량화형은 형광 유전적 인코딩 pH 지표, J. Vis. Exp. (2017). 1. 폴리 L-리신 슬라이드 준비 표준 75 x 25mm 슬라이드 의 상단에 소수성 PAP 펜으로 40 x 20mm 테두리를 그리고 RT에서 15 분 동안 건조하도록 따로 설정합니다. 재고 0.01% 폴리-L-리신(PLL…
Representative Results
그림 1: 말피기안 튜벌레를 처리하기 위한 유리 막대 를 제작합니다.A – E. 가열 및 MT를 처리하는 데 적합한 테이퍼와 각도를 생성하기 위해 유리 막대를 당기는 과정. 화살표는 적용될 힘의 방향과 크기를 나타냅니다. F. 적절하게 조작 된 유리 도구의 사진. 스케일 바 = 10mm. <a href="https://www.jove.c…
Materials
| Poly-L-Lysine (PLL) Solution | Sigma-Aldrich | P4832 | Store at 4 °C, can be reused. |
| Adhesive Perfusion Chamber Covers, adhesive size 1 mm, chamber diameter × thickness 9 mm × 0.9 mm, ports diameter 1.5 mm | Sigma-Aldrich | GBL622105 | Can be substituted as needed to match perfusion system. |
| Sylgard 184 Silicone Elastomer Kit | Ellsworth Adhesives | 184 SIL ELAST KIT 0.5KG | Available from multiple vendors. |
| Helping Hands Soldering Stands | Harbor Freight Tools | 60501 | Available from multiple vendors. |
| Schneider's Medium | Fisher Scientific | 21720024 | Store at 4 °C in sterile aliquots. |
| #5 Inox Steel Forceps | Fine Science Tools | 11252-20 | Can be substituted based on experimenter comfort. |
| 35 x 10 mm polystyrene Petri dish | Corning Life Sciences | Fisher Scientific 08-757-100A | Exact brand and size are unimportant. |
| 75 x 25 mm Microscope Slides | Corning Life Sciences | 2949-75X25 | Exact brand and size can vary as long as perfusion wells are compatible. |
| Filimented Borosilicate Capillary Glass, ID 1.5 mm, OD 0.86 mm, thickness 0.32 mm | Warner Instruments | 64-0796 | Filiment not necessary, glass can be substituted to match perfusion tubing and perfusion wells. |
| Vacuum Silicone Grease | Sigma-Aldrich | Z273554 | Available from multiple vendors. |
| Glass rods, 5 mm diameter | delphiglass.com | 9198 | Exact size is personal preference, multiple vendors available |
| PAP Hydrophobic Pen | Sigma-Aldrich | Z377821 | Available from multiple vendors. |
| Sealing Film | Sigma-Aldrich | P7668 | Available from multiple vendors. |
| 15 mL Falcon tube | BD Falcon | 352096 | Available from multiple vendors. |
| 50 mL Falcon tube | BD Falcon | 352070 | Available from multiple vendors. |
| Dissecting Stereoscope | Zeiss | Discovery.V8 | Any dissecting stereoscope can be used. |
| UAS-pHerry transgenic Drosophila melagnogaster | Available from Romero Lab | First published: Rossano et al., 2017 | |
| capaR-GAL4 driver line Drosophila melagnogaster | Available from Romero Lab | First published: Terhzaz et al., 2012 | |
| c724-GAL4 driver line Drosophila melagnogaster | Available from Romero Lab | First published: Sozen et al., 1997 | |
| Single-edged Carbon Steel Razor Blade | Electron Microscopy Sciences | 71960 | Available from multiple vendors. |
| Microscopy Slide Folder | Fisher Scientific | 16-04 | Available from multiple vendors. |
| Bunsen Burner | Fisher Scientific | 50-110-1231 | Available from multiple vendors. |
| Polystrene Drosophila Rearing Vials with Flugs | Genesee Scientific | 32-109BF | Comparable items can be substituted. |
| 2.5 L Laboratory Ice Bucket | Fisher Scientific | 07-210-129 | Available from multiple vendors. |
| 200 uL barrier pipette tips | MidSci | AV200 | Available from multiple vendors. |
| 200 μL variable volume pipette | Gilson Incorporated | PIPETMAN P200 | Available from multiple vendors. |
Citazione di questo articolo
Malpighian Tubule Dissection from an Adult Fly: Isolating an Osmoregulatory and Excretory Organ. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20102, doi: (2023).