Uveítis autoinmune experimental: un modelo de ratón inflamatorio intraocular

Este protocolo demostrará cómo inducir Uveítis Autoinmune Experimental (EAU) en el ratón C57BL / 6J mediante una sola inyección subcutánea de un antígeno retiniano en un adyuvante emulsionado. Los métodos para monitorear y evaluar la progresión de la enfermedad se detallarán a través de imágenes fundoscópicas y examen histológico, con parámetros de medición descritos dentro. Además, se discutirá la angiografía con fluoresceína, una técnica para examinar la estructura y permeabilidad de los vasos sanguíneos de la retina.

Este modelo EAU recapitula las características centrales de la uveítis posterior no infecciosa en humanos con respecto a las características clínico-patológicas y los mecanismos celulares y moleculares básicos que impulsan la enfermedad. La EAU está mediada por subconjuntos Th1 y/o Th17 de linfocitos T CD4⁺ autorreactivos, como se muestra en experimentos de transferencia adoptiva y con ratones sin IFNγ¹. Gran parte de nuestra comprensión de las funciones potenciales de estas células en la uveítis proviene del estudio de EAU², donde se detectan células Th1 y Th17 dentro de los tejidos de la retina³. A menudo, la EAU se utiliza como modelo preclínico para evaluar la utilidad de nuevas terapias para atenuar la enfermedad. Los enfoques terapéuticos que han modulado con éxito la enfermedad EAU han demostrado cierta eficacia en la clínica y han alcanzado el estado aprobado por la FDA. Ejemplos de estos son grupos de medicamentos inmunorreguladores como las terapias dirigidas a células T: ciclosporina, FK-506 y rapamicina ^4,5,6. Recientemente, las intervenciones dirigidas a nuevas vías también se han explorado en este modelo para investigar tanto el mecanismo como el efecto sobre el resultado de la enfermedad. Estos incluyen la regulación transcripcional dirigida a través del lector de cromatina Bromodomain Extra-Terminal (BET) proteínas e inhibidores de P-TEFb³. Además, enfoques más convencionales, como un inhibidor de VLA-4, han demostrado recientemente la supresión en EAU a través de la modulación de células T CD4 ⁺ efectoras⁷. Además, también se ha encontrado que dirigirse a las células Th17 con TMP778, un agonista inverso de RORγt, suprime significativamente EAU⁸. Además, este modelo ofrece la oportunidad de estudiar la inflamación autoinmune crónica en la retina y los mecanismos subyacentes que lo acompañan, como el cebado de linfocitos.

Las lecturas primarias para los estudios preclínicos de EAU son la evaluación clínica mediante la realización de imágenes de fundoscopia de retina y, con menos frecuencia, mediante la evaluación de la integridad de la retina mediante tomografía de coherencia óptica (OCT). La evaluación histopatológica de la retina y el inmunofenotipado de las células de la retina mediante citometría de flujo se llevan a cabo al finalizar. La fundoscopia es un sistema de imágenes en vivo fácil de usar que permite una evaluación clínica rápida y reproducible de toda la retina. Para las evaluaciones inmunohistoquímicas, las técnicas se basan en la preparación de secciones retinianas que nos permiten estudiar la arquitectura tisular para el grado de inflamación y daño estructural⁹. Los criterios de evaluación y los sistemas de puntuación convencionales, para todas las técnicas utilizadas, se perfilarán dentro de este protocolo. La extensión del daño registrado mediante imágenes fundoscópicas a menudo se correlaciona estrechamente con los cambios histológicos. Este enfoque dual para monitorear y evaluar la gravedad de la enfermedad ofrece una mayor sensibilidad y resultados de medición más confiables.

EAU es un modelo bien establecido y comúnmente utilizado para pruebas preclínicas e investigación de enfermedades oculares inmunomediadas. Este modelo es confiable y reproducible con una incidencia de enfermedad del >95% y genera datos completos que pueden usarse para validar o repudiar nuevas terapias para el tratamiento de la enfermedad inflamatoria intraocular que representa una causa importante de ceguera en edad laboral en todo el mundo¹⁰.