Uveíte Autoimune Experimental: Um Modelo de Rato Inflamatório Intraocular

Este protocolo demonstrará como induzir a Uveíte Autoimune Experimental (EAU) em camundongos C57BL/6J por uma única injeção subcutânea de um antígeno da retina em um adjuvante emulsionado. Os métodos para monitorar e avaliar a progressão da doença serão detalhados por meio de imagens fundoscópicas e exame histológico, com parâmetros de medição delineados dentro. Além disso, a angiografia fluoresceína, uma técnica para examinar a estrutura e a permeabilidade dos vasos sanguíneos da retina, será discutida.

Este modelo EAU recapitula as características centrais da uveíte posterior não infecciosa em humanos no que diz respeito às características clínico-patológicas e aos mecanismos celulares e moleculares básicos que impulsionam a doença. A EAU é mediada por subconjuntos Th1 e/ou Th17 de linfócitos CD4⁺T auto-reativos, como demonstrado em experimentos de transferência adotiva e com camundongos empobrecidos de IFNγ¹. Grande parte da nossa compreensão dos papéis potenciais para essas células na uveíte vem do estudo da EAU², onde as células Th1 e Th17 são detectadas nos tecidos da retina³. Muitas vezes, a EAU é usada como um modelo pré-clínico para avaliar a utilidade de novas terapias na atenuação da doença. Abordagens terapêuticas que modularam com sucesso a doença EAU mostraram alguma eficácia na clínica e atingiram o status de aprovação da FDA. Exemplos disso são grupos de drogas imunorreguladoras, como as terapias direcionadas às células T: ciclosporina, FK-506 e rapamicina ^4,5,6. Recentemente, intervenções direcionadas a novas vias também foram exploradas neste modelo para investigar o mecanismo e o efeito no desfecho da doença. Estes incluem o direcionamento da regulação transcricional através de proteínas Bromodomain Extra-Terminal (BET) leitoras de cromatina e inibidores de P-TEFb³. Além disso, abordagens mais convencionais, como um inibidor de VLA-4, demonstraram recentemente supressão na EAU via modulação de células T CD4⁺ efetoras⁷. Além disso, a segmentação de células Th17 com TMP778, um agonista inverso RORγt, também foi encontrada para suprimir significativamente EAU⁸. Além disso, este modelo oferece uma oportunidade para estudar a inflamação autoimune crônica na retina e os mecanismos subjacentes que o acompanham, como o priming de linfócitos.

As leituras primárias para estudos pré-clínicos de EAU são a avaliação clínica por meio da realização de imagens de fundoscopia da retina e, com menor frequência, pela avaliação da integridade da retina por Tomografia de Coerência Óptica (OCT). A avaliação histopatológica da retina e a imunofenotipagem das células da retina por citometria de fluxo são então realizadas no término. A fundoscopia é um sistema de imagem ao vivo fácil de usar que permite uma avaliação clínica rápida e reprodutível de toda a retina. Para as avaliações imuno-histoquímicas, as técnicas baseiam-se na preparação de cortes da retina que permitem estudar a arquitetura tecidual quanto ao grau de inflamação e dano estrutural⁹. Os critérios de avaliação e os sistemas convencionais de pontuação, para todas as técnicas utilizadas, serão descritos neste protocolo. A extensão do dano registrado usando imagens fundoscópicas geralmente se correlaciona estreitamente com alterações histológicas. Essa abordagem dupla para monitorar e avaliar a gravidade da doença proporciona maior sensibilidade e resultados de medição mais confiáveis.

A EAU é um modelo bem estabelecido e comumente usado para testes pré-clínicos e investigação de doenças oculares imunomediadas. Esse modelo é confiável e reprodutível com incidência de doença de >95% e gera dados abrangentes que podem ser utilizados para validar ou repudiar novas terapias para o tratamento da doença inflamatória intraocular que representa uma das principais causas de cegueira em idade ativa em todo o mundo¹⁰.