Uveite autoimmune sperimentale: un modello murino infiammatorio intraoculare

Questo protocollo dimostrerà come indurre l’uveite autoimmune sperimentale (EAU) nel topo C57BL/6J mediante una singola iniezione sottocutanea di un antigene retinico in un adiuvante emulsionato. I metodi per il monitoraggio e la valutazione della progressione della malattia saranno dettagliati attraverso l’imaging fundoscopico e l’esame istologico, con parametri di misurazione delineati all’interno. Inoltre, verrà discussa l’angiografia della fluoresceina, una tecnica per esaminare la struttura e la permeabilità dei vasi sanguigni retinici.

Questo modello EAU riassume le caratteristiche centrali dell’uveite posteriore non infettiva nell’uomo per quanto riguarda le caratteristiche clinico-patologiche e i meccanismi cellulari e molecolari di base che guidano la malattia. L’EAU è mediata da sottogruppi Th1 e/o Th17 di linfociti CD4⁺T autoreattivi, come mostrato in esperimenti di trasferimento adottivo e con topi impoveriti di IFNγ¹. Gran parte della nostra comprensione dei potenziali ruoli di queste cellule nell’uveite deriva dallo studio dell’EAU² in cui vengono rilevate sia le cellule Th1 che Th17 all’interno dei tessuti retinici³. Spesso, l’EAU viene utilizzata come modello preclinico per valutare l’utilità di nuove terapie nell’attenuare la malattia. Gli approcci terapeutici che hanno modulato con successo la malattia EAU hanno mostrato una certa efficacia nella clinica e hanno raggiunto lo stato approvato dalla FDA. Esempi di questi sono gruppi di farmaci immunoregolatori come le terapie mirate alle cellule T: ciclosporina, FK-506 e rapamicina ^4,5,6. Recentemente, in questo modello sono stati esplorati anche interventi mirati a nuovi percorsi per studiare sia il meccanismo che l’effetto sull’esito della malattia. Questi includono la regolazione trascrizionale mirata attraverso il lettore di cromatina Bromodomain Extra-Terminal (BET) proteine e inibitori P-TEFb³. Inoltre, approcci più convenzionali come un inibitore VLA-4 hanno recentemente dimostrato la soppressione nell’EAU attraverso la modulazione delle cellule T CD4⁺ effettrici⁷. Inoltre, il targeting delle cellule Th17 con TMP778, un agonista inverso RORγt, è stato trovato anche per sopprimere significativamente EAU⁸. Inoltre, questo modello offre l’opportunità di studiare l’infiammazione autoimmune cronica nella retina e i meccanismi sottostanti di accompagnamento come il priming dei linfociti.

Le letture primarie per gli studi preclinici EAU sono la valutazione clinica eseguendo l’imaging fundoscopia retinica e, meno frequentemente, valutando l’integrità retinica mediante tomografia a coerenza ottica (OCT). La valutazione istopatologica retinica e l’immunofenotipizzazione delle cellule retiniche mediante citometria a flusso vengono quindi intraprese al termine. Fundoscopy è un sistema di live imaging facile da usare che consente una valutazione clinica rapida e riproducibile dell’intera retina. Per le valutazioni immunoistochimiche, le tecniche si basano sulla preparazione di sezioni retiniche che consentono di studiare l’architettura tissutale per il grado di infiammazione e danno strutturale⁹. I criteri di valutazione e i sistemi di punteggio convenzionali, per tutte le tecniche utilizzate, saranno delineati all’interno di questo protocollo. L’entità del danno registrato utilizzando l’imaging fundoscopico è spesso strettamente correlata ai cambiamenti istologici. Questo duplice approccio al monitoraggio e alla valutazione della gravità della malattia offre una maggiore sensibilità e risultati di misurazione più affidabili.

L’EAU è un modello consolidato e comunemente usato per i test preclinici e lo studio della malattia oculare immuno-mediata. Questo modello è affidabile e riproducibile con un’incidenza di malattia del >95% e genera dati completi che possono essere utilizzati per convalidare o ripudiare nuove terapie per il trattamento della malattia infiammatoria intraoculare che rappresenta una delle principali cause di cecità in età lavorativa in tutto il mondo¹⁰.