Summary

שיטה נוחה עבור חילוץ וניתוח עם כרומטוגרפיה נוזלית בלחץ גבוה של נוירוטרנסמיטורים קטכולאמין מטבוליטים שלהם

Published: March 01, 2018
doi:

Summary

נציג של מיצוי מוצק-פאזי נוח מצמידים כרומטוגרפיה נוזלית בלחץ גבוה (HPLC) עם זיהוי אלקטרוכימי (ECD) נחישות סימולטני של נוירוטרנסמיטרים מונואמין שלוש ושתיים של מטבוליטים שלהם בשתן תינוקות. אנחנו גם לזהות את המטבוליט MHPG כמו סמן פוטנציאלי לאבחון מוקדם של נזק מוחי תינוקות.

Abstract

החילוץ וניתוח של נוירוטרנסמיטרים קטכולאמין נוזלים הביולוגי הוא בעל חשיבות רבה בהערכת תפקוד מערכת העצבים ומחלות קשורות, אבל המדידה המדויקת שלהם הוא עדיין אתגר. פרוטוקולים רבים תוארו למדידה עצבי על ידי מגוון רחב של כלים, כולל כרומטוגרפיה נוזלית בלחץ גבוה (HPLC). עם זאת, ישנם חסרונות, כמו מבצע מסובך או קשה לזהות מטרות מרובות, אשר לא ניתן למנוע, תוך זמן קצר, טכניקת ניתוח הדומיננטית היא עדיין HPLC בשילוב עם רגיש אלקטרוכימי או זיהוי fluorimetric, בשל רגישות גבוהה, סלקטיביות טוב שלה. כאן, פרוטוקול מפורט מתואר רעלני, זיהוי catecholamines עם כרומטוגרפיה נוזלית בלחץ גבוה עם זיהוי אלקטרוכימי (HPLC-ECD) בדגימות שתן האמיתי של תינוקות, באמצעות electrospun nanofibers ללא הפרדות צבע המורכב של אתר כתר פולימריים עם פוליסטירן כמו adsorbent, הידוע גם בשם שיטת החילוץ (PFSPE) סיבים ארוז מעבדתי. אנו מראים איך שתן דגימות יכול להיות precleaned בקלות על ידי עמודה וגדוש nanofiber מעבדתי, איך analytes המדגם יכולים להיות במהירות מועשר, desorbed, ולא זוהה במערכת ECD. PFSPE מאוד מפשט את נהלי pretreatment דגימות ביולוגיות, המאפשר זמן ירד, הוצאות, הפחתה של האובדן של מטרות.

בסך הכל, עבודה זו ממחישה פרוטוקול פשוט ונוח לחילוץ מוצק-פאזי מצמידים אל מערכת HPLC-ECD נחישות סימולטני של נוירוטרנסמיטרים מונואמין שלוש (נוראפינפרין (NE), אפינפרין (E), דופמין (DA)) ושניים של שלהם מטבוליטים (3-מתוקסי-4-hydroxyphenylglycol (MHPG), חומצה 3,4-dihydroxy-phenylacetic (DOPAC)) בשתן תינוקות. פרוטוקול הוקמה הוחל להעריך את ההבדלים של catecholamines השתן שלהם מטבוליטים בין תינוקות בסיכון גבוה עם נזק מוחי הלידה ופקדים בריא. ניתוח השוואתי גילה הבדל משמעותי בדרכי השתן MHPG בין שתי הקבוצות, המציין כי מטבוליטים קטכולאמין עשוי להיות סמן המועמד חשוב לאבחון מוקדם של המקרים בסיכון נזק מוחי אצל תינוקות.

Introduction

קטכולאמין נוירוטרנסמיטורים ותוכנן מטבוליט בנוזלי גוף יכול להשפיע על תפקוד העצבים ומשפיעים האיזון של הברית תגובה לגירוי במידה רבה1. Abnormities עלול לגרום למגוון של מחלות, כגון pheochromacytoma, ganglioneuroma, נוירובלסטומה, הפרעות נוירולוגיות1,2. החילוץ והנחישות של catecholamines בנוזלי גוף הוא בעל משמעות האבחון של מחלות רלוונטיות. אולם, catecholamines בדגימות ביולוגיות קיימות בריכוזים נמוכים, הם בקלות מחומצן. יתר על כן, הם מאוד קשה elute בגלל כמות גדולה של הפרעה בינונית3. לפיכך, זיהוי סימולטני catecholamines, נוזלים ביולוגיים הוא עדיין אתגר.

היו ביקורות מראה כי catecholamines השתן יכולה להיות מידה של מתח, וכי רמות שלהם הם סמנים ביולוגיים חשובים להגיב על גירוי חוש המישוש עיבוד ילודים5. על פי המחקר, כל התינוקות שסבלו מ מקרים מוקדמת נמצאים בסיכון במוח פציעה4,5,6, פציעה עשוי לגרום לשחרור חריגה של catecholamines ו בנושאים הקשורים לתוך הנוזלים. קיימות טכניקות מתקדמות תהודה מגנטית שיכול לזהות נזק מוחי ב שלבים קודמת7,8. עם זאת, בתוך 48 שעות הראשון, תהליך נורמלי התפתחותיות יגרום פגיעה מוחית קבועה זה לא יהיה ניכר תמונות רפואיות11. חוץ מזה, המשאבים כלי עלות גבוה ויקר, יחד עם גורמים אחרים, לאחראי על כל היחידות neonatal גישה אלו טכניקות הדמיה עצבית מיוחדים. עם זאת, השימוש סמן בקלות נגיש ומעשי (כגון catecholamines ו מטבוליטים שלהם) יכול להתגבר על חסרונות אלה, ההקרנה של סמן בנוזלים אנושי עשוי לעזור באבחון מוקדם של פגיעה מוחית, להוביל בקשה זיהוי של תינוק בן יומו תינוקות הזקוקים neuroprotection9. Catecholamines בשתן יכול להיות אינדקס קל וברור, בגלל הקשר ישיר בין כמות אותם שוחרר לתוך נוזלים ותפקוד neuroactivity.

בין נוזלים ביולוגיים, נוזל מוחי שדרתי (CSF) ודוגמאות פלזמה לא קל להשיג באמצעות הליכים טראומטי הקיים, זה גם מאוד קשה להיפטר הפרעות עקב דבק חלבון ו אחרים זיהומים, המוביל בעייתי, תהליך הדגימה גוזלת זמן מתאים לסערת חוזר על עצמו לזיהוי. בנוסף, לילדים, זה כמעט בלתי אפשרי לתפוס את הדגימות בצורה טראומטית. לכן, דגימת השתן הוא טוב יותר מאשר צורות אחרות של הדגימה, כפי שהוא לא פולשנית, קלה לתפעול, ניתן לעשות שוב ושוב. בדיקות שתן הן שופע קל לאחסן ולהציג יתרון רב על הטפסים האחרים של דגימות ביולוגיות.

השיטות העיקריות לכמת catecholamines, נוזלים ביולוגיים כוללים מבחני radioenzymic10, מקושרים-אנזים מבחני החיסון-sorbent11, voltammetry12 , עדשה תרמי ספקטרומטר13. אבל חסרונות קיימים, כגון פעולות מסובכות, קשה לזהות מטרות מרובות. היום, טכניקת ניתוח הדומיננטית היא ביצועים גבוהים כרומטוגרפיה נוזלית (HPLC)14, בשילוב עם רגישות אלקטרוכימי15 או fluorimetric זיהוי16, בשל רגישות גבוהה טוב סלקטיביות. עם טכנולוגיית ספקטרומטר מסה טנדם, כגון כרומטוגרפיה נוזלית/ספקטרומטר מסה (LC/MS) ו כרומטוגרפיה נוזלית/מסה ספקטרומטר מסות/מסה (LC/MS/MS), ניתוח כימות נוירוטרנסמיטורים יכולים להשיג גבוה דיוק וספציפיות17,18. עם זאת, הטכניקה MS דורשת מכשור יקר, כמו גם כוח אדם מוסמך באופן משמעותי, מקשה על השיטה להחיל אוניברסלית במעבדות המקובלת ביותר. HPLC-ECD מערכות מצוידים בדרך כלל במעבדות המקובלת ביותר קליני, ובכך הפכו בחירה נפוצה וטובה עבור קבוצות מחקר לשימוש עבור קביעת כימי, אבל הם דורשים את הדגימה הציג לתוך מערכת נקי ושל נפח microscale19. לכן חשיבות רבה כדי לטהר לדחוס את המדגם לפני הניתוח. השיטה הקלאסית עבור השלב טיהור היא מיצוי נוזל-נוזל14,15,20 ו- off-line החילוץ מוצק-פאזי, כולל אלומינה מופעל טור21,22 ו- diphenylborate (DPBA) complexation23,24,25,26.

. לי Myeongho et al. כבר משתמש שרף פולימרי כימית שונה עם אתר כתר כמו adsorbent באופן סלקטיבי לחלץ catecholamines מ שתן מאז 200727. כמו כן, בשנת 2006, הוא Haibo et al. הפגינו בגישה סינתזה נתיישב בשביל boronate זיקה החילוץ byutilizing sorbent functionalizable nanomagnetic silsesquioxane oligomeric לכל מקרה (עתירת) nanomagnetic בסיס מורכב, וליישם אותו העשרת catecholamines ב שתן (לנורה, אפינפרין ו- isoprenaline)28. הם גם ניצל ננו כדי למלא את העבודה, תוך שימוש בטכנולוגיה הנקראת ננו-electrospinning ויוצרים חומר סיבי פולימר ב הננומטרי. תהליך electrospinning ניתן להתאים את קוטר, מורפולוגיה ויישור המרחבי של המוצר באמצעות שליטה את מתח העבודה של שינוי התוכן של הפתרון ספינינג יחד עם פרמטרים נוספים29. לעומת הדיו SPE המקובלת, electrospun nanofibers מתאימים מאוד לחלץ ולהעשיר את המטרה analytes של מטריצה מורכבת, כפי הם מצוידים עם יחס פני-שטח-כדי-נפח גבוה כדי לספוח את analytes עם יעילות גבוהה, ו התערוכה יותר בקלות שבשליטת משטח הכימיות, ומאפשר מצורף בהישג יד של תרכובות היעד. מאפיינים אלה לגרום להם בחירה מוצלחת SPE adsorbents, מאוד לצמצם את מעבדתי ואת desorption כמות הממס30,31,32,33. עבור catecholamines בדגימות שתן, nanofibers electrospun, המורכבת apolymeric אתר כתר עם פוליסטירן (PCE-PS) שימשו באופן סלקטיבי לחלץ שלושה catecholamines (NE, E ו- DA)34. העיתון ציין כי האתר כתר סלקטיבי adsorbed המטרות של NE, E, ודה, שהתבסס על הגיאומטריה הנכון עבור איגוד catecholamines באמצעות יצירת קשרי מימן. התוצאות להציג את אתר כתר גשמי ביעילות, הסרת תרכובות אחרות מפריעות הכלול דגימות ביולוגיות. בהשראת דו ח זה, שיטה פותחה עבור הפקת סלקטיבי catecholamines על ידי שימוש electrospun nanofibers ללא הפרדות צבע המורכב PCE-PS.

בנייר זה, שיטת דיווח בעבר34 שיפור והעסיק לא רק לנתח בהצלחה E, NE, ועל דא, אלא גם שלהם מטבוליטים, MHPG, DOPAC, בשתן. אנחנו גם לחקור אפשרויות חדשות עבור המנגנון של התהליך ספיחה. השיטה מציגה מספק יעילות החילוץ, סלקטיביות עבור analytes חמש, השיטה אומתה בניתוח של שתן מן תינוקות בסיכון גבוה עם נזק מוחי הלידה שולטת בריא.

Protocol

הושגה הסכמה מדעת מההורים, באישור מועצת סקירה מוסדיים הושג לצורך המחקר. המחקר בוצע על פי הקוד האתי של ההסתדרות הרפואית העולמית (הצהרת הלסינקי) לניסויים מעורבים בני אדם. המטפלים של כל המשתתפים בתנאי ובכתב בשביל להיות נרשמו המחקר. אישור הוועדה האתית מבית החולים Zhongda, שותפים עם אוניברסיטת דרום…

Representative Results

פרוטוקול זה היא שיטה פשוטה ונוחה PFSPE pretreat דגימות שתן ולהעשיר catecholamines חמש לגילוי באמצעות מערכת HPLC-ECD; דיאגרמה של התהליך מוצג באיור1. הפרוטוקול בעיקר כולל ארבעה הפעלת צעדים, טעינה, שטיפה, ו eluting – בשילוב עם כמות קטנה של nanofibers PCE-PS ומכשיר פשוט מיצוי מוצק-פאזי. המו…

Discussion

השיטה PFSPE המוצעת במאמר זה עשוי להיות משמעותי ומשמעותי ביחס שלו במהירות, פשטות ונוחות. Adsorbents להשתמש בפרוטוקול הם electrospun nanofibers, אשר גבוה יחסי נפח באיזור פני השטח, לספוח את analytes עם יעילות גבוהה. ההליך רק צריך כמה מיליגרמים של nanofiber, נפח קטן של הממס eluant, אינו דורש שלב אידוי לרכז את analytes. . הנה, הוצג?…

Divulgations

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

מחקר זה נתמך על ידי את הלאומי למדע קרן של סין (No.81172720, לא 81673230), חברתי פיתוח מחקר תוכנית של ג’יאנגסו מחוז מדע טכנולוגיה המחלקה (מס ‘ BE2016741), מדע & טכנולוגיה פרויקט של סין מינהל כללי של פיקוח איכות, פיקוח, בידוד (2015QK055), תוכנית הפרוייקט הפתוח של המעבדה מפתח של התפתחות הילד ולמידה המדע של משרד החינוך, אוניברסיטת דרום מזרח (CDLS-2016-04). אנו בכנות להכיר יואן השיר לבין ליאו פינג שסייעו לנו אוסף דגימות.

Materials

200 µL pipette tip column to contain nanofibers
PCE-PS nanofibers material for PFSPE extraction
steel rod (about 0.5 mm diameter) fill the nanofibres into the column
gastight plastic syringe (5 ml) compress solution into the end of the tip
methanol Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd 67-56-1
diphenylborinic acid 2-aminoethyl ester(DPBA) Sigma-Aldrich.Inc A-106408 complex reagent
norepinephrine(NE) Sigma-Aldrich.Inc A-9512 analyte
3-Methoxy-4-hydroxyphenylglycol(MHPG) Sigma-Aldrich.Inc H1377 analyte
epinephrine(E) Sigma-Aldrich.Inc 100154-200503 analyte
3, 4-Dihydroxyphenylacetic acid(DOPAC) Sigma-Aldrich.Inc D-9128 analyte
dopamine(DA) Sigma-Aldrich.Inc H-8502 analyte
3, 4-dihydroxybenzylamine hydrobromide(DHBA) Sigma-Aldrich.Inc 858781 interior label
acetonitrile Sigma-Aldrich.Inc 75-05-8 eluriant and mobile phase
phosphoric acid Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd 7664-38-2 eluriant
uric acid Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd 69-93-2 artifical urine
creatinine Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd 60-27-5 artifical urine
trisodium citrate Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd 6132-04-3 artifical urine
KCl Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd 7447-40-7 artifical urine
NH4Cl Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd 12125-02-9 artifical urine
NaHCO3 Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd SWC0140326 artifical urine
C2Na2O4 Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd 62-76-0 artifical urine
NaSO4 Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd 7757-82-6 artifical urine
disodium hydrogen phosphate Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd 10039-32-4 artifical urine
urea Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd 57-13-6 artifical urine
NaCl Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd 7647-14-5 artifical urine
MgSO4.7H2O Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd 10034-99-8 artifical urine
CaCl2 Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd 10035-04-8 artifical urine
HCl Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd 7647-01-0 artifical urine
citric acid Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd 77-92-9 artifical urine and mobile phase
EDTA disodium salt Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd 34124-14-6 mobile phase
monometallic sodium orthophosphate Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd 7558-80-7 artifical urine and mobile phase
1-heptanesulfonic acid sodium salt Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd 22767-50-6 mobile phase
sodium hydroxide Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd 1310-73-2 mobile phase
phenylboronic acid column(PBA column) Aglilent 12102018 PBA extraction
Inertsil® ODS-3 5 µm 4.6×150 mm column Dikma 5020-06731 HPLC column for seperation
SHIMADZU SIL-20AC prominence AUTO SAMPLER Shimadzu Corporation, Japan SIL-20AC auto injection for eluriant
SHIMADZU LC-20AD High Performance Liquid Chromatography Shimadzu Corporation, Japan LC-20AD HPLC pump
SHIMADZU L-ECD-60A electrochemical detector Shimadzu Corporation, Japan L-ECD-60A detector for the analytes
ASAP 2020 Accelerated Surface Area and Porosimetry System Micromeritics, USA surface and porosity analyzer 

References

  1. Elhwuegi, A. S. Central monoamines and their role in major depression. Prog. Neuropsychopharmacol. Biol. Psychiatry. 28, 435-451 (2004).
  2. Da, C. F., Ngoabdalla, S., Houzel, J. C., Rehen, S. K. Murine model for Parkinsons disease: From 6-OH dopamine lesion to behavioral test. J. Vis. Exp. (35), e1376 (2010).
  3. Varley, H., Gowenlock, A. H. The clinical chemistry of monoamines. Brit. Med. J. 2, 1330 (1963).
  4. Wang, X., Rousset, C. I., Hagberg, H., Mallard, C. Lipopolysaccharide-induced inflammation and perinatal brain injury. Semin. Fetal. Neonatal. Med. 11, 343-353 (2006).
  5. Inder, T. E., Volpe, J. J. Mechanisms of perinatal brain injury. Semin. Neonatol. 5, 3-16 (2000).
  6. Miller, S. P., Ferriero, D. M. From selective vulnerability to connectivity: Insights from newborn brain imaging. Trends. Neurosci. 32, 496-505 (2009).
  7. Barkovich, A. J., et al. Proton MR spectroscopy for the evaluation of brain injury in asphyxiated, term neonates. Am. J. Neuroradiol. 20, 1399-1405 (1999).
  8. Liauw, L., van Wezel-Meijler, G., Veen, S., van Buchem, M. A., van der Grond, J. Do apparent diffusion coefficient measurements predict outcome in children with neonatal hypoxic-ischemic encephalopathy?. Am. J. Neuroradiol. 30, 264-270 (2009).
  9. Varsami, M., et al. Inflammation and oxidative stress biomarkers in neonatal brain hypoxia and prediction of adverse neurological outcome: A review. J. Pediatr. Neonat. Individual. Med. 2, e020203 (2013).
  10. Cooper, R. L., Walker, R. F. Microradioenzymic assays for the measurement of catecholamines and serotonin. Methods. Enzymol. 103, 483-493 (1983).
  11. Murphy, J. F. The development of enzyme linked immunosorbent assays (ELISA) for the catecholamines adrenaline and noradrenaline. J. Immunol. Methods. 154, 89-98 (1992).
  12. Jones, S. R., Mickelson, G. E., Collins, L. B., Kawagoe, K. T., Wightman, R. M. Interference by pH and Ca2+ ions during measurements of catecholamine release in slices of rat amygdala with fast-scan cyclic voltammetry. J. Neurosci. Methods. 52, 1-10 (1994).
  13. Sanchismallols, J. M., Villanuevacamañas, R. M., Ramisramos, G. Determination of unconjugated catecholamine in urine as dopamine by thermal lens spectrometry. Analyst. 117, 1367-1371 (1992).
  14. Lan, C., Liu, W. Determination of catecholamines by HPLC-ECD in urine. Medical Laboratory Science and Clinics. , (2007).
  15. Tsunoda, M., Aoyama, C., Ota, S., Tamura, T., Funatsu, T. Extraction of catecholamines from urine using a monolithic silica disk-packed spin column and high-performance liquid chromatography-electrochemical detection. Anal. Methods. 3, 582-585 (2011).
  16. Bartolini, B., et al. Determination of monoamine oxidase activity by HPLC with fluorimetric detection. Neurobiology (Bp). 7, 109-121 (1999).
  17. Dunand, M., Gubian, D., Stauffer, M., Abid, K., Grouzmann, E. High throughput and sensitive quantitation of plasma catecholamines by ultraperformance liquid chromatography tandem mass spectrometryusing a solid phase microwell extraction plate. Anal. Chem. 85, 3539-3544 (2013).
  18. He, H., Carballo-Jane, E., Tong, X., Cohen, L. H. Measurement of catecholamines in rat and mini-pig plasma and urine by liquid chromatography-tandem mass spectrometry coupled with solid phase extraction. J. Chromatogr. B. 997, 154-161 (2015).
  19. Simon, N., Young, P. How to increase serotonin in the human brain without drugs. J. Psychiatry. Neurosci. 32, 394-399 (2007).
  20. Grossi, G., et al. Improvements in automated analysis of catecholamine and related metabolites in biological samples by column-switching high-performance liquid chromatography. J. Chromatogr. A. 541, 273-284 (1991).
  21. Iwamot, T., Yoshiura, M., Iriyama, K. Liquid chromatographic identification of urinary catecholamine metabolites adsorbed on alumina. J. Liq. Chromatogr. R. T. 10, 1217-1235 (1987).
  22. Maycock, P. F., Frayn, K. N. Use of alumina columns to prepare plasma samples for liquid-chromatographic determination of catecholamines. Clin. Chem. 33, 286-287 (1987).
  23. Grossi, G., Bargossi, A., Lippi, A., Battistoni, R. A fully automated catecholamines analyzer based on cartridge extraction and HPLC separation. Chromatographia. 24, 842-846 (1987).
  24. Rondelli, I., et al. New method for the resolution of the enantiomers of 5,6-dihydroxy-2-methyl-aminotetralin by selective derivatization and HPLC analysis: Application to biological fluids. Chirality. 8, 381-389 (1996).
  25. Kumar, A., Hart, J. P., McCalley, D. V. Determination of catecholamines in urine using hydrophilic interaction chromatography with electrochemical detection. J. Chromatogr. A. 1218, 3854-3861 (2011).
  26. Sabbioni, C., et al. Simultaneous liquid chromatographic analysis of catecholamines and 4-hydroxy-3-methoxyphenylethylene glycol in human plasma: Comparison of amperometric and coulometric detection. J. Chromatogr. A. 1032, 65-71 (2004).
  27. Lee, M., et al. Selective solid-phase extraction of catecholamines by the chemically modified polymeric adsorbents with crown ether. J. Chromatogr. A. 1160, 340-344 (2007).
  28. He, H., et al. Facile synthesis of a boronate affinity sorbent from mesoporous nanomagnetic polyhedral oligomeric silsesquioxanes composite and its application for enrichment of catecholamines in human urine. Anal. Chim. Acta. 944, 1-13 (2016).
  29. Subbiah, T., Bhat, G. S., Tock, R. W., Parameswaran, S., Ramkumar, S. S. Electrospinning of nanofibers. J. Appl. Polym. Sci. 96, 557-569 (2005).
  30. Hu, W. Y., et al. Packed-fiber solid-phase extraction coupled with high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry for determination of diethylstilbestrol, hexestrol, and diedestrol residues in milk. J. Chromatogr. B. 957, 7-13 (2014).
  31. Liu, Z., Kang, X., Fang, F. Solid phase extraction with electrospun nanofibers for determination of retinol and α-tocopherol in plasma. Microchim. Acta. 168, 59-64 (2010).
  32. Qi, D., Kang, X., Chen, L., Zhang, Y., Wei, H., Gu, Z. Electrospun polymer nanofibers as a solid-phase extraction sorbent for the determination of trace pollutants in environmental water. Anal. Bioanal. Chem. 390, 929-938 (2008).
  33. Kang, X. J., Chen, L. Q., Zhang, Y. Y., Liu, Y. W., Gu, Z. Z. Performance of electrospun nanofibers for SPE of drugs from aqueous solutions. J. Sep. Sci. 31, 3272-3278 (2008).
  34. Chen, L. Q., Wang, Y., Qu, J. S., Deng, J. J., Kang, X. J. Selective extraction of catecholamines by packed fiber solid-phase using composite nanofibers composing of polymeric crown ether with polystyrene. Biomed. Chromatogr. 29, 103-109 (2015).
  35. Chen, L. Q., Zhu, X. H., Shen, J., Zhang, W. Q. Selective solid-phase extraction of catecholamines from plasma using nanofibers doped with crown ether and their quantitation by HPLC with electrochemical detection. Anal. Bioanal. Chem. 408, 4987-4994 (2016).
  36. Hu, H., Zhang, Y., Zhang, Y., Huang, X., Yuan, D. Preparation of a new sorbent based on boronate affinity monolith and evaluation of its extraction performance for nitrogen-containing pollutants. J. Chromatogr. A. 1342, 8-15 (2014).
  37. Chen, J., et al. Sensitive determination of four camptothecins bysolid-phase microextraction-HPLC based on a boronic acid contained polymer monolithic layer. Anal. Chim. Acta. 879, 41-47 (2015).
  38. Li, D., Chen, Y., Liu, Z. Boronate affinity materials for separation and molecular recognition: structure, properties and applications. Chem. Soc. Rev. 44, 8097-8123 (2015).
  39. Yan, J., Springsteen, G., Deeter, S., Wang, B. The relationship among pKa, pH, and binding constants in the interactions between boronic acids and diols: It is not as simple as it appears. Tetrahedron. 60, 11205-11209 (2004).
  40. Reuster, T., Rilke, O., Oehler, J. High correlation between salivary MHPG and CSF MHPG. Psychopharmacology. 162, 415-418 (2002).
  41. Beckmann, H., Goodwin, F. K. Urinary MHPG in subgroups of depressed patients and normal controls. Neuropsychobiology. 6, 91-100 (1980).
  42. Mitoma, M., et al. Stress at work alters serum brain-derived neurotrophic factor (BDNF) levels and plasma 3-methoxy-4-hydroxyphenylglycol (MHPG) levels in healthy volunteers: BDNF and MHPG as possible biological markers of mental stress?. Prog. Neuropsychopharmacol. Biol. Psychiatry. 32, 679-685 (2008).
  43. Ressler, K. J., Nemeroff, C. B. Role of Norepinephrine in the Pathophysiology and Treatment of Mood Disorders. Biol. Psychiatry. 46, 1219-1233 (1999).
  44. Alonso-Spilsbury, M., et al. Perinatal asphyxia pathophysiology in pig and human: A review. Anim. Reprod. Sci. 90, 1-30 (2005).
  45. Shalak, L., Perlman, J. M. Hypoxic-ischemic brain injury in the term infant: Current concepts. Early. Hum. Dev. 80, 125-141 (2004).
  46. Maas, J. W., Leckman, J. F. relationships between central nervous system noradrenergic function and plasma and urinary MHPG and other norepinephrine metabolites. MHPG: Basic Mechanisms and Psychopathology. , 33-43 (1983).
  47. Maas, J. W. Relationships between central nervous system noradrenergic function and plasma and urinary concentrations of norepinephrine metabolites. Adv. Biochem. Psychopharmacol. 39, 45-55 (1984).
  48. Peyrin, L., Pequignot, J. M., Chauplannaz, G., Laurent, B., Aimard, G. Sulfate and glucuronide conjugates of 3-methoxy-4-hydroxyphenylglycol (MHPG) in urine of depressed patients: Central and peripheral influences. J. Neural. Transm. 63, 255-269 (1985).
  49. Peyrin, L. Urinary MHPG sulfate as a marker of central norepinephrine metabolism: A commentary. J. Neural. Transm. 80, 51-65 (1990).

Play Video

Citer Cet Article
Xie, L., Chen, L., Gu, P., Wei, L., Kang, X. A Convenient Method for Extraction and Analysis with High-Pressure Liquid Chromatography of Catecholamine Neurotransmitters and Their Metabolites. J. Vis. Exp. (133), e56445, doi:10.3791/56445 (2018).

View Video