Summary

Quantifizierung der infra-langsamen Dynamik der spektralen Kraft und der Herzfrequenz bei schlafenden Mäusen

Published: August 02, 2017
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Summary

Hier stellen wir experimentelle und analytische Verfahren vor, um die zeitliche Dynamik der neuronalen und kardialen Variablen des Nicht-REM-Schlafes bei Mäusen zu beschreiben, die die Schlafreaktion auf akustische Reize modulieren.

Abstract

Drei Wachsamkeitsstaaten dominieren das Leben der Säugetiere: Wakefulness, nicht-schnelle Augenbewegung (Nicht-REM) Schlaf und REM-Schlaf. Da mehr neuronale Korrelate des Verhaltens in frei bewegten Tieren identifiziert werden, wird diese dreifache Unterteilung zu einfach. Während der Wachsamkeit definieren Ensembles der globalen und lokalen kortikalen Aktivitäten zusammen mit peripheren Parametern wie Pupillendurchmesser und sympathovagalem Gleichgewicht verschiedene Grade der Erregung. Es bleibt unklar, inwieweit der Schlaf auch ein Kontinuum von Hirnzuständen bildet, in dem der Grad der Widerstandsfähigkeit gegenüber sensorischen Reizen und Erregbarkeit und vielleicht anderen Schlaffunktionen allmählich variiert und wie sich die peripheren physiologischen Zustände zusammenhängen. Die Forschung, die die Methoden zur Überwachung mehrerer Parameter während des Schlafes vorantreibt, sowie die Zuordnung zu den Konstellationen dieser funktionalen Attribute, ist von zentraler Bedeutung, um unser Verständnis des Schlafes als multifunktionalen Prozess zu verfeinern, in dem viele vorteilhafte Effekte ex sein müssenEcuted Die Identifizierung von neuartigen Parametern, die Schlafzustände charakterisieren, eröffnet Chancen für neuartige diagnostische Wege bei Schlafstörungen.

Wir zeigen ein Verfahren zur Beschreibung von dynamischen Variationen von Maus-Nicht-REM-Schlafzuständen über die kombinierte Überwachung und Analyse von Elektroenzephalogramm (EEG) / Elektrokortikogramm (ECoG), Elektromyogramm (EMG) und Elektrokardiogramm (EKG) unter Verwendung von standardpolysomnographischen Aufzeichnungsverfahren. Mit diesem Ansatz fanden wir, dass der Maus-Nicht-REM-Schlaf in Zyklen von koordinierten neuralen und kardialen Oszillationen organisiert ist, die aufeinanderfolgende 25-s-Intervalle von hoher und niedriger Zerbrechlichkeit zu externen Reizen erzeugen. Daher werden zentrale und autonome Nervensysteme koordiniert, um verhaltensbedingte Schlafzustände während des konsolidierten Nicht-REM-Schlafes zu bilden. Wir präsentieren chirurgische Manipulationen für polysomnographische ( dh EEG / EMG kombinierte mit EKG) Überwachung, um diese Zyklen in der frei schlafenden Maus, die Analyse zu quanti zu verfolgenIhre Dynamik und die akustischen Stimulationsprotokolle, um ihre Rolle in der Wahrscheinlichkeit des Aufwachens zu beurteilen. Unser Ansatz wurde bereits auf den menschlichen Schlaf ausgedehnt und verspricht, gemeinsame organisatorische Prinzipien von Nicht-REM-Schlafzuständen bei Säugetieren aufzuklären.

Introduction

Säugetier-Schlaf ist ein Verhaltenszustand der Ruhe und der Resilienz gegenüber Umweltreizen. Trotz dieser scheinbaren Homogenität, Polysomnographie und vegetative Parameter zeigen , dass die Schlaf bewegt sich zwischen qualitativ und quantitativ unterschiedliche neuronale und somatische Zustände auf verschiedenen räumlichen und zeitlichen Skalen 1. Über Minuten bis zu zehn Minuten tritt der Wechsel zwischen Nicht-REM und REM-Schlaf auf. Nicht-REM-Schlaf wird von einer großampligen, niederfrequenten Aktivität im EEG mit einem spektralen Peak um ~ 0,5 – 4 Hz begleitet, während REM-Schlaf eine regelmäßige EEG-Aktivität im Theta-Band (6 – 10 Hz) aufweist Muskel atonia 2 Innerhalb des Nicht-REM-Schlafes radeln die Menschen durch Licht (S2) und tiefen Langsamwellen-Schlaf (SWS). Wie ihre Benennung zeigt, zeigen diese beiden Stufen niedrigere und höhere Erregungsschwellen 3 , 4 , und sie unterscheiden sich primär in der Dichte von NiedrighäutenEn-kortikale EEG-Leistung, die als langsame Aktivität (SWA; 0,75 – 4 Hz) bezeichnet wird. Die Ungleichförmigkeit bleibt während der einzelnen Kämpfe von S2 und SWS auf der Minute-zu-Sub-Sekunde-Zeitskala bestehen, die durch die variable Präsenz von SWA im Laufe eines Kampfes 5 , 6 , aber auch durch EEG- und Feldpotential-Rhythmen ausführlich dokumentiert wird Höhere Frequenzen, einschließlich Spindelwellen im Sigma-Band (10-15 Hz) und Gamma-Rhythmen (80 – 120 Hz) (für eine Überprüfung siehe 7 , 8 , 9 , 10 ).

Anstatt subtil zu sein, verschieben diese Variationen den schlafenden kortikalen Zustand beim Menschen auf die Extreme des Spektrums. Für Nicht-REM – Schlaf, diese reichen von einer Dominanz von SWA zu Staaten , dass ungefähre wake-artiger Aktivität , weil sie 11 einen wesentlichen Anteil an Hochfrequenzkomponenten enthalten <suP>, 12 Bei Nagetieren und Katzen, obwohl Nicht-REM-Schlaf nicht in Stufen unterteilt ist, tritt eine kurze Periode, die Zwischenschlaf (IS) genannt wird, vor dem REM-Schlaf-Beginn 13 auf . Während des IS werden REM-Schlaf-Features wie Hippocampal-Theta-Aktivität und Ponto-Geniculo-Okzipital-Wellen initiiert, während Nicht-REM-Schlafsignaturen wie Spindelwellen und SWA noch vorhanden sind, was auf eine Mischung zwischen den beiden Schlafzuständen 14 , 15 hinweist. Dennoch könnte IS funktionell unterschiedlich sein, weil es durch Antidepressiva 16 moduliert wird und durch neuartige Objektpräsentation während des vorigen Aufwachens 17 , und es trägt zur Einstellung der Erregungsschwelle 18 bei . Weiterhin zeigen die Zustandsflächen von EEG- und EMG-Parametern frei beweglicher Ratten eine Gruppe von Punkten 14 , die zwischen Nicht-REM-Schlaf, REM-Schlaf und Wachsamkeit kontinuierlich ist. Es gibt auch sporadische Abnahmen in der SWA, ohne in den Wach- oder REM-Schlaf einzutreten, was zu erheblichen Schwankungen der relativen Präsenz der nieder- und hochfrequenten Komponenten während eines konsolidierten Nicht-REM-Schlafkampfes 14 , 19 , 20 führt . Schließlich treten variable Verhältnisse von SWA und höherfrequenten Rhythmen während des Nicht-REM-Schlafes nicht nur zeitlich auf, sondern zeigen auch regionale Unterschiede in der Amplitude und Synchronisation zwischen den kortikalen Bereichen 19 .

Säugetier Nicht-REM-Schlaf ist weit von Uniform. Ob diese Ungleichförmigkeit jedoch zu Zuständen führt, die sich in Funktions- und Verhaltensattributen unterscheiden, ist nicht klar. Bei verschiedenen Arten von Schlafstörungen wird der kontinuierliche Schlaf durch spontane Erwachungen und unangemessenes motorisches Verhalten gestört. Darüber hinaus zeigen Spektralanalysen Veränderungen in der relativen Präsenz höherer Frequenzen im EEG 21Und in autonomen Parametern wie Atemnoten und Herzschlag 22 . Die geordnete Abfolge von stabilen Schlafzuständen ist also gestört, und Elemente der kortikalen und / oder autonomen Erregung dringen unkontrolliert ein. Daher ist das Verständnis des Kontinuums der Schlafzustände für Krankheiten von Bedeutung. Darüber hinaus ist die Störung des Schlafes durch Umgebungslärm in städtischen Umgebungen mit allgemeinen Gesundheitsrisiken verbunden, was es entscheidend macht, Momente der erhöhten Verwundbarkeit während des Schlafes zu identifizieren 23 .

Verhaltenserregung Versuche beim Menschen Schlaf zeigen an, dass es am schwersten ist aus aufzuwecken SWA dominierten Nicht-REM – Schlaf (Stufe S3), während Licht nicht-REM – Schlaf (Stufe S2) und REM – Schlaf zeigen vergleichbare und unteren Erregungsschwellen 4. Die kortikale Verarbeitung von kurzen Schallreizen variiert im wesentlichen zwischen REM-Schlaf, S2 und S3 24 ,25 , was anzeigt, dass staatsspezifische kortikale Aktivitätsmuster die ersten Stadien der sensorischen Verarbeitung modulieren. Für Nicht-REM-Schlaf beim Menschen variiert die Neigung zum Aufwachen als Reaktion auf Lärm mit dem Vorhandensein von Spindelwellen und Alpha-Rhythmen im EEG 26 , 27 , 28 . Thalamokortikalen rhythmicity während Spindeln wird durch verbesserte synaptische Hemmung bei beiden thalamischen und kortikalen Ebenen begleitet, die auf die Dämpfung der sensorischen Verarbeitung 7 beitragen gedacht wird.

Wie sind geräuschresistente und verwundbare Zeiträume in der Zeit organisiert und was sind ihre Determinanten? Bei Mäusen und Menschen haben wir vor kurzem eine infra-langsame, 0,02-Hz-Oszillation in neuronalen Rhythmen identifiziert. Abhängig von der Phase dieser 0,02-Hz-Oszillation zeigten Mäuse eine variable Reaktivität gegenüber externen Reizen, entweder aufwachen oder schlafenGh das Geräusch Interessanterweise war diese Oszillation mit der Rate des Herzschlags korreliert, was darauf hinweist, dass das autonome Nervensystem an der Modulation der Anfälligkeit des Schlafes an äußere Reize beteiligt ist 1 . Gedächtnisbezogene hippocampale Rhythmen wurden auch in diesem Rhythmus organisiert, und am auffallendsten war seine Stärke mit der Qualität der Gedächtniskonsolidierung beim Menschen korreliert. Die 0,02-Hz-Oszillation scheint also ein organisatorisches Prinzip des Nagetier- und menschlichen Nicht-REM-Schlafes zu sein, das sowohl die Empfindlichkeit für die Umwelt als auch die interne Speicherverarbeitung moduliert. Dies unterstreicht erneut die Notwendigkeit von multiparametrischen und kontinuierlichen Einschätzungen von Schlafzuständen, um ihre Funktionalität zu erkennen und Orte von potentieller Verwundbarkeit zu identifizieren.

Hier präsentieren wir ein Verfahren zur Extraktion der Wellenform dieser Dynamik, einschließlich der chirurgischen Implantation von Mäusen für kombinierte EEG / ECoG- und EMG-EKG-Messungen, Exposition gegenüber sensorischen Reizen, aAnalyseanalyse. Diese Prozedur stellt eine Grundlage für die Betrachtung des Schlafes als ein kontinuierlich variierender, aber stark organisierter Vigilanzzustand dar, während dessen verschiedene grundlegende Schlaffunktionen sequentiell ausgeführt werden. Allgemeiner ist das Verfahren auf Ansätze anwendbar, die darauf abzielen, die spektralen und autonomen Merkmale zu extrahieren, die einem Verhaltensergebnis während des Schlafes sowohl im Gesundheits- als auch im Krankheitszustand vorausgehen.

Protocol

Alle experimentellen Verfahren wurden in Übereinstimmung mit dem Tierarztausschuss der Universität Lausanne und dem Service de la Consommation et des Affaires Vétérinaires des Kantons Vaud durchgeführt. 1. Chirurgie für EEG / EMG-EKG-Aufnahmen Tierhaltung und Auswahl. Halten Sie Tiere (C57Bl / 6J, 7 – 9 Wochen, 25 – 30 g) in einem 12: 12-h dunklen / leichten Zyklus, einzeln untergebracht und unter Standardbedingungen (40% Feuchtigkeit, 22 ° C), mit…

Representative Results

Abbildung 2 A (obere Platte) zeigt 100-minütige Abschnitte des spontanen Schlaf-Wach-Verhaltens, aufgezeichnet durch polysomnographische Elektroden, die wie beschrieben implantiert wurden (siehe Abbildung 1 ). Die Erhöhungen und Abnahmen der EEG- und EMG-Amplitude bei Nicht-REM-Schlafbeginn sind deutlich sichtbar. Der intermittierende REM-Schlaf ist durch eine Abnahme der EEG-Amplitude und eine weitere Abnahme…

Discussion

Hier zeigen wir, wie ein kontinuierliches zeitliches Profil des Nicht-REM-Schlafes aufgebaut wird, der EEG-, EMG- und EKG-Variablen integriert. Dies ist ein erster Schritt zur Entwicklung einer integrativen Beschreibung des Mausschlafes, die dazu beitragen kann, die bisher nicht erkannte Zeitskala zu identifizieren, über die bei Nicht-REM-Schlaf 1 hohe und geringe Geräuscharmität organisiert wird. Eine ähnliche zeitliche Struktur wurde auch im menschlichen Nicht-REM-Schlaf durch eine analoge …

Divulgations

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Wir danken allen Labormitgliedern für ihren Beitrag zum Schreiben und sorgfältigen Lesen dieses Manuskripts. Wir danken Paul Franken für die Anregung von Diskussionen, Dr. Gisèle Ferrand für hilfreiche Kommentare zum chirurgischen Protokoll und Dr. Jean-Yves Chatton für die Bereitstellung der Original Labview ausführbaren Dateien für die Lärmbelastung. Die Finanzierung erfolgte durch den Schweizerischen Nationalfonds (Stipendien 31003A_146244 und 31003A_166318) und den Etat de Vaud.

Materials

2-components epoxy glue Henkel Loctite EA 3450
Absorbable Suturing Fiber (Prolene) Ethicon 5-0 FS-3
Adson Forceps FST 11006-12
Antiseptic swab VWR 149-0332
Attane Isoflurane Piramal Isoflurane 250mL
Connectors 3×2-channels ENA AG 2.316 Raster 2.00 x 2.00 mm; size 5x8x9 mm; pin size 5mm; http://www.ena.ch/
Dragonfly commutator Dragonfly Model #SL-10
EMBLA amplifier EMBLA A10 amplifier
Fine scissors FST 14108-09
Flat Head Gold-plated steel screw J.I. Morris FF00CE125 https://jimorrisco.com/
Gold wire CMSA T.69 5gr http://www.cmsa.ch/en/
Hemostatic sponge Pfizer Gelfoam
iodine-based disinfectant (Betadine) Mundipharma standart solution 60mL
Komet drill steel 1/005PM104 UNOR AG 22310
Matlab Analysis Software MathWorks R2016b https://ch.mathworks.com/products/matlab.html
Microdrill Fine Science Tools 96758
Mouse Gas Anesthesia Head Holder Kopf Instruments Model 923-B http://kopfinstruments.com/product/model-923-b-mouse-gas-anesthesia-head-holder/
Ophtalmic ointment Pharmamedica VITA-POS
Paladur (liquid) UNOR AG 2260215 for dental cement
Palavit (powder) UNOR AG 5410929 for dental cement
Small Animal Stereotaxic Frame Kopf Instruments Model 930 http://kopfinstruments.com/product/model-930-small-animal-stereotaxic-frame-assembly/
Soldering wire Stannol 593072
Temperature controller – Mini rectal probe Phymep 4090502 http://www.phymep.com/produit/dc-temperature-controller/
Temperature controller- heating pad Phymep 4090205 http://www.phymep.com/produit/dc-temperature-controller/

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Citer Cet Article
Fernandez, L. M. J., Lecci, S., Cardis, R., Vantomme, G., Béard, E., Lüthi, A. Quantifying Infra-slow Dynamics of Spectral Power and Heart Rate in Sleeping Mice. J. Vis. Exp. (126), e55863, doi:10.3791/55863 (2017).

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