줄기 세포 기반 유전자 치료 종양 모델로 BLT 인간화 마우스를 사용하여
Summary
인간화 마우스를 사용하여 종양 특정 T 세포의 생성 및 특성이 여기에 설명되어 있습니다. 인간 thymic 조직 및 유전자 변형 인간의 조혈 줄기 세포는 면역 저하 된 쥐에 이식되어 있습니다. 안티 종양 면역 반응의 생체 시험에서 허용하는 엔지니어링 인간의 면역 시스템의 reconstitution에이 발생합니다.
Abstract
같은 마우스와 같은 작은 동물 모델은 광범위하게 인간의 질병을 연구하고 새로운 치료 개입을 개발하는 데 사용되었습니다. 정보의 풍부한이 연구에서 얻은에도 불구하고, 마우스 면역뿐만 아니라 인간 면역 결핍 바이러스 (HIV) 감염과 같은 바이러스 성 질병의 종 특이성의 독특한 특성은 인간화 마우스 모델의 개발되었다. 이전 모델은 C. B 17 SCID / SCID 마우스와 칭했다 인간의 태아 thymus와 태아 간 이식의 사용을 포함 네 / 리브 (SCID-후) 1, 2 또는 인간의 말초 혈액 백혈구의 입양 전송 (SCID-huPBL ) 3. 두 모델은 주로 HIV 감염의 연구에 활용되었다.
이러한 모델 모두의 주요 한계 중 하나는 그들에게 HIV 질환을 연구 할 수있는 더 많은 생리 학적 관련성이 높은 모델을 할 수있는 주변의 인간 면역 세포의 안정적 reconstitution의 부족이었다. 이를 위해, BLT 흠anized 마우스 모델은 개발되었습니다. BLT는 골수 / 간 / thymus을 의미합니다. 이 모델에서 6~8주 오래된 NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl / SzJ (NSG) 면역 저하 마우스는 두 번째 인간의 조혈 줄기 세포 이식 네 뒤에 할 만 SCID-후 마우스 모델에서와 같이 네 / 리브 이식을받을 수 있습니다. 이 시스템의 장점은 주변에있는 인간의 면역 체계의 전체 reconstitution입니다. 이 모델은 HIV 감염 및 지연 5-8을 연구하는 데 사용되었습니다.
우리는 유 전적으로 hHSC 7, 9 autologous transduced의 주입 다음 네 / 리브 임플란트를 구성하는 인간의 조혈 줄기 세포 (hHSC)을 수정 사용되는이 모델의 수정 된 버전을 생성합니다. 이 방법은 유전자 변형 lineages의 세대에 결과를 표시합니다. 더 중요한 것은, 우리는 흑색 증 특정 T 세포 수용체를 표현하는 기능 세포 독성 T 세포 (CTL)을 생성의 가능성을 검토하는이 시스템을 적응. 이 모델을 사용하여 우리는 종양 회귀 (9) 결정하기 위해 라이브 양전자 방출 단층 촬영 (PET) 영상을 활용하여 우리의 유전자 변형 CTL의 기능을 평가 할 수있었습니다.
이 프로토콜의 목적은 이러한 유전자 변형 쥐를 생성하고 실시간으로 PET 영상을 사용하여 생체 효능에 평가의 과정을 설명하는 것입니다. 우리가 인간의 조직 및 lentiviral 벡터를 사용 있기 때문에 참고로, 우리의 부대 시설로는 특별한주의 (BSL2 +)와 바이오 레벨 2 (BSL2)에 대한 CDC NIH 지침을 따릅니다. 또한, NSG 쥐가 심각하므로 면역 저하되며, 자신의 주택 및 유지 보수가 가장 높은 건강 수준 (을 준수해야합니다 http://jaxmice.jax.org/research/immunology/005557-housing.html ).
Protocol
Representative Results
Discussion
생체 PET 영상에서와 커플 링 수정 BLT 인간화 마우스 모델은 만성 인간의 질병을 연구하는 강력한 도구입니다. 이 시스템은 BLT 마우스 모델과 HIV 연구에 대한 제한된 범위 이외의 발전을 걸립니다. 또한, 그들은 임상 설정에 도달하기 전에 우리가 다양한 유전자 치료 프로토콜뿐만 아니라 진단 기법을 검토 할 수있는 좋은 시스템입니다. 마우스 대 영장류을 사용하는 저렴한 비용과 ?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
우리는 기술 지원을 위해 앨빈 웰치와 래리 팡 감사드립니다. CIRM 새로운 교수 상 RN2 – 00902-1,이 작품은 국립 보건원 (NIH) 수상 P50 CA086306, 재생 의료에 대한 캘리포니아 연구소 (CIRM) 보조금 RC1 – 00149-1 및 RS1 – 00203-1에 의해 부분적으로 추진하는 사업 , 병진 의학의 칼 테크 – UCLA 공동 센터, AIDS 연구 UCLA 센터 (CFAR) NIH / NIAID AI028697, UCLA 에이즈 연구소, CIRM 도구와 기술 상 RT1-01126, 그리고 UC의 Multicampus 연구 프로그램과 캘리포니아에서 전략 바이러스 약물 디스커버리 센터 (번호 MRPI-143226).
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
| PBS | Invitrogen | 10010049 | |
| RPMI 1640 | A1049101 | ||
| Iscove’s | 12440061 | ||
| Fetal Calf Serum | 16000085 | ||
| Collagenase type IV | Sigma Aldrich | C5138 | |
| Hyaluronidase | H3506 | ||
| DNAse I | Roche Diagnostics | 10104159001 | |
| Piptazo (Zosyn) | Pfizer | Piperacillin/tazobactam combination | |
| Ficoll (Ficoll-Paque Plus) | Ge Healthcare Life Sciences | 17-1440-02 | |
| MACS Buffer | Miltenyi Biotech | See comments | MACS buffer: PBS supplemented with 0.5% fetal bovine serum and 2 mM citrate dextrose formula-A |
| CD34 Microbead Kit | 130-046-702 | ||
| LS Columns | 130-042-401 | ||
| Retronectin | Takara | T100A | |
| Matrigel | BD Biosciences | 354263 | |
| Isofluorane | Baxter | http://www.baxter.com/healthcare_professionals/products/forane.html | |
| Carprofen (Rimadyl) | Pfizer Animal Health | https://www.rimadyl.com/default.aspx |
References
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