Alimentazione FITC-Dextran: Un metodo per quantificare la permeabilità intestinale in C. elegans
Published: April 30, 2023
Abstract
Fonte: Le, T. A. N., et al. Misurare gli effetti di batteri e sostanze chimiche sulla permeabilità intestinale di Caenorhabditis elegans. J. Vis. Exp. (2019).
Questo video introduce un metodo per visualizzare e misurare l’integrità del lume intestinale C. elegans alimentando vermi Dextran con etichetta FITC. Il protocollo di esempio mostra il saggio fatto con vermi trattati con 3,3′-diindolilmetano (DIM) e alimentati da agenti patogeni.
Protocol
Questo protocollo è un estratto da Le et al, Measuring the Effects of Bacteria and Chemicals on the Intestinal Permeability of Caenorhabditis elegans, J. Vis. Exp. (2019). Preparazione di piastre NGM per la prova degli effetti di una sostanza chimica (DIM) sulla…
Representative Results
Figura 1: L’effetto del DIM sulla permeabilità intestinale di C. elegans alimentati con P. aeruginosa. Immagini in microscopia di vermi di (A) E. coli OP50 senza alimentazione FITC-dextran, (B) E. coli con alimentazione FITC-dextran, (C) P. aer…
Materials
| 3,3’-diindolylmethane | Sigma | D9568 | |
| 90×15 mm Petri dishes | SPL Life Sciences, South Korea | 10090 | |
| Bactor Agar | Beckton Dickinson | REF. 214010 | |
| Formaldehyde solution | Sigma | F1635 | |
| Caenorhabditis elegans N2 | Caenorhabditis Genetics Center (CGC) | Wild type | |
| Cholesterol | Sigma | C3045 | |
| Costa Assay Plate, 96 Well Black With Clear Flat Bottom Non-treated, No Lid Polystyrene | Corning Incorporated | REF. 3631 | |
| Dimethyl sulfoxide | Sigma | D2650 | |
| Escherichia coli OP50 | Caenorhabditis Genetics Center (CGC) | ||
| Fluorescein isothiocyanate – dextran | Sigma | FD10S | |
| Harmony software | PerkinElmer | verson 3.5 | |
| Magnesium sulfate heptahydrate | Fisher Bioreagents | BP2213-1 | |
| Fluoromount aqueous mounting medium | Sigma | F4680 | |
| Operetta CLS High-Content Analysis System | PerkinElmer | HH16000000 | |
| Peptone | Merck | EMD 1.07213.1000 | |
| Pseudomonas aeruginosa PA01 | Korean Collection for Type Culture | KCTC NO. 1637 | |
| Sodium Chloride | Fisher Bioreagents | BP358-1 | |
| Stereo Microscope | Nikon, Japan | SMZ800N |
Citer Cet Article
FITC-Dextran Feeding: A Method to Quantify Intestinal Permeability in C. elegans. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20167, doi: (2023).