Waiting
Procesando inicio de sesión ...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Engineering

التقنيات الجراحية لموضع القسطرة واستئصال 5/6 في نماذج مورين للغسيل الكلوي البريتوني

Published: July 19, 2018 doi: 10.3791/56746

Summary

يوضح هذا المقال طريقة للموضع الجراحية في الفئران القسطرة داخل تعلق على منفذ وصول التي يتم وضعها في الجزء الخلفي من الحيوان. وعلاوة على ذلك، وهذا ما يفسر الإجراء المتعلق استئصال 5/6 ليشابه الدولة يوريمي المرضى PD.

Abstract

الديلزه الصفاقيه (PD) هو علاج الاستبدال كلوي متسقة على الإدارة والانتعاش اللاحق للسائل الملين في التجويف الصفاقى لاستنزاف المياه والسامة من الأيض وظيفيا كفاية الكلي غير قادرة على القضاء عليها. ولسوء الحظ، أن هذا الإجراء تتدهور الصفاق. يؤدي تلف الأنسجة بداية التهاب للشفاء من الإصابة. إذا استمرت الإصابة ويصبح التهاب مزمن، فإنه قد يؤدي إلى التليف، وأمر شائع في العديد من الأمراض. PD والتهاب مزمن وتليف، جنبا إلى جنب مع عمليات محددة أخرى تتصل بهذه البلدان، تؤدي إلى تدهور القدرات ultrafiltration، مما يعني الفشل ووقف اللاحقة لهذا الأسلوب. العمل مع العينات البشرية يوفر معلومات حول هذا التدهور ولكنه يعرض القيود التقنية والأخلاقية للحصول على خزعات. نماذج حيوانية ضرورية لدراسة هذا التدهور نظراً إلى أنها في التغلب على أوجه القصور هذه.

وضع نموذج ضخ ماوس مزمنة في عام 2008، الذي يستفيد من مجموعة واسعة من الفئران المعدلة وراثيا، فتح إمكانية دراسة الآليات التي ينطوي عليها. ويستخدم هذا النموذج مخصص جهاز مصمم للفئران، تتألف من قسطرة المرفقة إلى منفذ وصول التي تم وضعها تحت الجلد في الجزء الخلفي من الحيوان. ويتجنب هذا الإجراء المستمر ثقب الصفاق خلال التجارب الطويلة الأجل والحد من العدوى والتهاب بسبب حقن. وبفضل هذا النموذج، وقد تتميز البريتوني الأضرار الناجمة عن التعرض المزمن للسوائل PD والتضمين. هذا الأسلوب يسمح ضخ كميات كبيرة من السوائل ويمكن استخدامها لدراسة الأمراض الأخرى ضروري فيها التطعيم من عقاقير أو مواد أخرى على مدى فترات طويلة من الزمن.

يوضح هذا المقال طريقة لوضع القسطرة الجراحية في الفئران. وعلاوة على ذلك، وهذا ما يفسر الإجراء المتعلق استئصال 5/6 لتقليد دولة موجودة في المرضى PD الكلوي.

Introduction

وظائف الكلي وأمراض الكلي

الكلي هي الأجهزة الأساسية المعنية بالتوازن وتنقية الدم وإنتاج الهرمونات. وهناك مختلف الظروف التي تؤدي إلى الفشل الكلوي وإلى بداية اللاحقة من أورميا، التي قد تم تعريفها بأنها مجموعة الأعراض الجهازية بسبب تراكم الفضلات في الدم الاحتفاظ بسبب اضطرابات وظيفة الكلي1. وعلاوة على ذلك، نظراً لإمكانية التماثل الساكن يتأثر أيضا عندما يكون هناك فشل كلوي، ارتفاع ضغط الدم بسبب الحمل الزائد لوحدة التخزين قد تحدث، هو أمر خطير كما أنه يمكن أن يؤدي إلى فشل القلب1. عندما تكون القدرة الوظيفية للكلى أقل من 10% إلى 15%، المريض يجب أن يخضع لأحد الخيارات العلاجية التالية: غسيل الكلي والغسيل الكلوي البريتوني (PD) أو زرع الكلي.

PD هو خيار مثيرة لاهتمام الذي يسمح للمرضى مواصلة العلاج من الراحة من منازلهم أو عمليا في أي مكان، وبالتالي تجنب الحاجة إلى مستشفى كثرة الزيارات والإقامة. تقنية PD يزيل جزيئات سامة صغيرة والمياه الزائدة الناتجة عن الجسم2 عن طريق تقطير السوائل ناضح (الغسيل الكلوي البريتوني السوائل، قوات الدفاع الشعبي) في التجويف الصفاقى. ينشئ هذا تقطير ناضح التدرج اللازمة لتبادل الذوائب والمياه بين الشعرية البريتوني وقوات الدفاع الشعبي، عملية تعرف باسم أولترافيلتريشن (الجبهة المتحدة).

البريتوني الضرر الناجم عن الغسيل الكلوي البريتوني

التجويف الصفاقى مغطى بغشاء (م) تتألف من أحادي الطبقة الخلايا mesothelial يستريح في مصفوفة، الذي يضم أيضا بعض الأوعية الدموية والليفية والضامة والسكان خلية أخرى. ولسوء الحظ، الغشاء البريتوني دائماً يعاني بعض التعديلات أثناء العلاج PD، مثل المبرمج وفقدان الخلايا mesothelial، وانتقال mesenchymal mesothelial (MMT) والخلايا البطانية (نهاية-MT)، تجنيد الخلايا التحريضية و فيبروسيتيس، التعديلات والأوعية الدموية، والأوعية، ليمفانجيوجينيسيس و/أو التليف3،4،5،،من67،،من89. هذه التعديلات المسؤولة عن تطوير الجبهة المتحدة القدرة فشل10، الذي يحول دون استمرار العلاج، التي تتطلب أن المريض يجب أن يحصل علاج بديل البقاء على قيد الحياة (غسيل الكلي أو زرع الكلي) . ولذلك، من الضروري لهؤلاء المرضى، إلى تأخير أو التحكم في تنمية هذه التعديلات البريتوني.

كان قد تردد أن أورميا وحدها قد يسبب التهاب11، ولكن أهم العوامل المحلية بيوينكومباتيبيليتي PDF. معظم ملفات Pdf استخدام الجلوكوز كعامل ناضح، مما يسبب التهاباً. سبب PDF مرات التخزين والتعقيم، يعاني الجلوكوز عملية تدهور، وظهور منتجات جديدة من رد الفعل هذا، توليد المزيد من التهاب،12،MMT والمبرمج13. وعلاوة على ذلك، هناك أيضا إمكانية للأضرار الميكانيكية بسبب طريقة تقطير. كل هذه العوامل، يتصرفون بشكل مستمر، يمكن أن تولد دولة تحريضية المستمرة والمتكررة، مما يؤدي إلى التهاب مزمن، مما يقود إلى تدهور الأغشية، وقاطع، فشل الجبهة المتحدة. كيف يمكن تخفيض أو تجنب هذا الضرر لا يزال مدعاة للدراسة.

تحليل وضع الآفات: من العينات البشرية لنماذج حيوانية

العمل مع خزعات البشرية عاملاً مقيداً بسبب صعوبة الحصول على عينات الأنسجة. يمكن الحصول على هذه العينات فقط من الجراحات إجراؤها بسبب عطل القسطرة أو الزرع، عادة بعد سنوات من العلاج PD. هذا النهج مفيداً لتحليل التغيرات المرضية التي عانت من غشاء البريتوني مكشوف لقوات الدفاع الشعبي، ولكن لا يكفي لدراسة تطور العملية. إمكانية أخرى لتحليل الخلايا التي استنزفت من مياه الغسيل الكلوي، ولكن هذا لا يزال فشل في تقديم سيناريو كاملة. دمج كلا التقنيات الممكن فقط مع نماذج حيوانية. هيكل البريتوني مماثلة بين الثدييات، وذلك هناك نماذج مع مختلف أنواع الحيوانات. وهناك عدد قليل من الدراسات التي تقوم على الأغنام (روديلا et al. 14 وباريل et al. 15) وارنب نماذج17 16،؛ ومع ذلك، أصغر الحيوانات الأفضل كما أنها أسهل للبيت والحفاظ على، وأيضا أكثر اقتصادا. ويتيح استخدام الفئران18،19،،من2021،22،،من2324 أقصر وقت معاملة اللازمة لمراقبة التعديلات morpho الوظيفية. قد مثلت نموذجا مفيداً للغاية لاستكشاف قضايا مختلفة مثل تأثير الأدوية المضادة تليفية مثلاً BMP-7 (العظام morphogenic البروتين-7)25 و RAS (نظام إنزيم الرينين-انجيوتنسين) استهداف26،27 , 28.

ومع ذلك، برز نموذج مورين كنموذج مثالي مع العديد من الفوائد على الآخرين. الميزة الأكثر إثارة للاهتمام تعديل إمكانية استخدام جينياً الفئران لدراسة أساس الضرر البريتوني الجزيئية والخلوية. وفي الواقع، كثيرا ما تستخدم الفئران للتحليل للعديد من الأمراض، كما أن هناك العديد من سلالات مختلفة مع مختلف الخلفيات الوراثية المعروفة. وتشمل المزايا الأخرى انخفاض المساحة المطلوبة للإسكان، وانخفاض تكلفة التجارب (بسبب حجم أصغر الحيوانات) وتوافر المواد الكاشفة وسهولة التعامل مع كمية متزايدة من المعلومات المتاحة في سلالات مختلفة من الفئران نظراً لأنها كانت الحيوانات الأكثر استخداماً في البحوث.

نموذج يستند إلى الفئران تستخدم جهاز مزروع النموذج الأكثر المنشأة حديثا ل PD29،30، وقد ثبت أن تحاكي البريتوني تدهور لحقت بالمرضى PD بسبب التعرض لملفات Pdf. وقد تعاونت هذا النموذج لفهم العمليات المرضية المتورطين31،،من3233. وعلاوة على ذلك، قد استخدمت للتحقق من صحة مختلف العلاجات الممكنة للتخفيف من حدة هذا التدهور استخدام المغيرون محصنة والعقاقير المضادة للالتهابات وأخرى مضادة تليفية والعوامل المضادة-الأوعية، مثل مثبطات كوكس-2 (السيكلواوكسيجيناز-2) 34، يضع فهمته-γ (بيروكسيسومي ادعاءا المنشط مستقبلات-γ)35، تاموكسيفين36، باريكالسيتول (فيتامين (د) مستقبلات منشط الذي ينظم رد فعل المناعة)37و38 من ربمسن ونيبيفولول 39.

تطوير النموذج الماوس مع قسطرة مزروع

الهدف من هذا النموذج يشابه، قدر الإمكان، هذه التقنية المستخدمة في البشرية PD المرضى، مما يسمح بإجراء العلاجات الموسعة لشعبة المشتريات في الحيوانات الصغيرة. وحتى الآن، تم اختبار ثلاث تقنيات لتقطير السوائل غسيل الكلي في الصفاق في الفئران. أول واحد، ثقب المكفوفين من الجبهة جدار البطن، مثير للجدل بسبب مخاطر متعددة قد تتعرض لها، مثل الأضرار البريتوني، والنزيف، وثقب المنجز عمياء، الحشوي. الأسلوب الثاني هو ما يسمى "الدائمة النظام المفتوح"، الذي تم وضع جهاز لحقن السوائل خارج الجسم. هذا الإجراء الأكثر مماثلة للتي يؤديها في البشر. ومع ذلك، لا تسمح بتطوير التجارب الطويلة الأجل، كما أنها قد تزيد من فرص الإصابة ب، وعموما يتطلب استخدام التخدير لغرس قوات الدفاع الشعبي، التي قد تتداخل مع النتائج. الأسلوب الثالث هو "نظام مغلق". مع هذا النهج، يقع كامل الجهاز المستخدم لتقطير السوائل داخل جسم الحيوان. يتم حقن السائل بإبرة عن طريق منفذ وصول، التي توضع تحت الجلد. هذا الإجراء يقلل من خطر العدوى البريتوني والنزيف، فضلا عن الحاجة للتخدير.

لدراسة تأثير تبولن في شعبة البرامج، كان أيضا نموذجا مورين الأخيرة المقرر40 استناداً إلى نموذج PDF التسريب بالقسطرة. يجمع هذا النموذج في تقنية رواية القيام استئصال في الفئران، مما يقلل من وظيفة الكلي. وقد وضعت في هذه المادة، تعديل البروتوكول تستخدمهم فيرانتيلي et al. في عام 201540 . يسمح هذا البروتوكول الجديد يقلل من طول الجرح أثناء جراحة زرع القسطرة أثناء استئصال، وتيسير الوصول إلى الكلي.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

عليها جميع الأساليب الموصوفة هنا برعاية الحيوان المؤسسية واستخدام اللجنة البيولوجيا الجزيئية مركز سيفيرو أوتشوا (مدريد، إسبانيا).

ملاحظة: استخدمت C57BL/6J الفئران الإناث الذين تتراوح أعمارهم بين 12 و 14 أسبوعا ووزنها حوالي 20 غ في بداية الدراسة. جميع الحيوانات تم إيواء تحت الظروف القياسية والغذاء والمياه libitum الإعلانية. تم فحص الظروف الصحية يوميا. ينبغي أن تكون المواد المطلوبة، مثل القفازات، ثني، القسطرة، خياطة، والإبر، وعقيمة.

1-وضع القسطرة

ملاحظة: إذا لم يتم إزالة الكليتين، تظل الوظيفية تماما، حيث أنها لا تعتبر أثر أورميا، مما يسمح بدراسة التعرض لقوات الدفاع الشعبي في عزلة. ويتكون الجراحة على إدخال فقط المتطرفة البعيدة من القسطرة في التجويف الصفاقى ووضع المنفذ الحصول على الجزء الخلفي الحيوان، وتوفير إمكانية الوصول إليها. الإجراء لوضع القسطرة كما يلي:

  1. ضع الماوس في دائرة للاستقراء وتوفير التخدير باستخدام إيسوفلوراني 4% والأكسجين بمعدل تدفق 0.4 لتر في الدقيقة حتى فقدان الاستقامة العاكسة.
    1. الحفاظ على الحيوان مع إيسوفلوراني 2% في الأكسجين 100% مع تدفق 0.3 لتر في الدقيقة عن طريق أنبوب نوسيكوني متصل بجهاز التخدير. تأكيد أنيسثيتيزيشن السليم بتقييم لهجة العضلات واستجابة للتحفيز.
    2. تحقق من معدل وعمق التنفس أثناء كل عملية. استخدام مرهم البيطرية في العيون لمنع جفاف بينما تحت التخدير. فمن الأفضل إذا كانت الإجراءات التي تتم في تدفق مجلس الوزراء لضمان الحفاظ على ظروف معقمة أثناء العمليات الجراحية.
  2. يحلق في الجناح الأيسر والجزء الخلفي من الحيوانات من أجل إجراء عملية جراحية، وبعد حقن السوائل في ميناء الوصول بمنطقة نظيفة. ضع الحيوان في وضع أفقي يستريح في الجناح الأيسر في الجدول الجراحية، مع نظام حرارية التأكد من أن درجة الحرارة لا تنخفض.
  3. تطهير المنطقة بمحلول غلوكونات الكلورهيكسيدين 1%. جعل قطع صغيرة (0.5 سم) مع مقص حادة في الجلد على الجناح الأيمن من الجسم، وفصل بعناية بمساعدة المقص من طبقة العضلات المجاورة، حيث أنه يتم فصل منطقة بأكملها من الجزء الخلفي الحيوان جيدا لوقت لاحق تكون قادرة على إدخال ميناء الوصول بسهولة. يرجى الرجوع إلى الرقم 1 لمعرفة المواد المطلوبة لمتابعة الإجراء.
  4. إجراء شق صغير حوالي 1 مم في القطر من خلال طبقة العضلات وإدراج غيض من القسطرة والبلاستيك الدائري الأول. البريتوني الضرر الحد الأدنى.
  5. خياطة الجدار البريتوني محكم حول القسطرة، مع خياطة الجروح غير امتصاص 5.0 أو 6.0. حلقة بلاستيكية واحدة ثم يقع داخل التجويف الصفاقى، والآخر بين العضلات والجلد. مما هو ثابت القسطرة لمنع السائل من التسرب إلى الفضاء تحت الجلد.
  6. إدراج ميناء الوصول إلى الفضاء تحت الجلد نحو الذيل الماوس، دون تأمين تكنولوجيا المعلومات لوضع إصلاح للجلد، كما أنه يمكن حكة والحيوانات قد الصفر وبت بشرتهم.
  7. إغلاق الجرح للجلد بخياطة الجروح غير امتصاص 5.0 أو 6.0. إزالة التخدير استنشاق وتسمح للحيوان أن يسترد وعيه. لا تترك الماوس غير المراقب حتى قد وعيه كافية للحفاظ على ريكومبينسي القصية. عندما تسترد بالكامل، يمكن إرجاع الماوس لشركة الحيوانات الأخرى.
    ملاحظة: يمكن أن تبدأ التجارب بعد 4 إلى 7 أيام للتعافي بعد العملية الجراحية.
  8. توفير التسكين بتذويب 3 مل آيبوبروفين (20 ملغ/مل) في 250 مل مياه الشرب لليوم لعملية جراحية.
  9. وخلال فترة ما بعد العمليات الجراحية، التحقق من الحالة الصحية للحيوان يوميا، التحقق من أن هناك لا توجد مناطق محمر على الجلد أو الشعر خشن أو الجروح.
  10. حقن السوائل بالضغط الحيوان (بدون أنيسثيتيزينج أنه) من ذيله والاستيلاء على ميناء الوصول مع يد واحدة، والإبرة مع الآخر. تطهير المنطقة بمحلول غلوكونات الكلورهيكسيدين 1% قبل الحقن. أنها مثيرة للاهتمام لاستخدام الإبر الخاصة (الإبر هوبر)، التي هي مشطوب من أجل الجزء بدلاً من بيرس حاجز سيليكون ميناء الوصول (الشكل 1A). حقن اثنين في اليوم الواحد خلال 40 يوما ما يكفي لمراعاة التعديلات البريتوني (الشكل 3).
  11. عند الانتهاء من هذه التجربة، euthanize الماوس بالخنق بغاز ثاني أكسيد الكربون أو التفكك عنق الرحم.

2-القيام استئصال 5/6 ووضع القسطرة

ملاحظة: أفضل تشبه الحالة في المرضى PD من الممكن القيام استئصال 5/6، يسمح فقط وظيفة الكلي متبقية. وفي هذه الحالة، ينبغي أخذ عينات المصل لتحليل اليوريا المستويات عن طريق استخراج 250 ميكروليتر من الدم عن طريق الوريد الوجه ثقب، يوم واحد على الأقل قبل بدء العمليات الجراحية، في منتصف الطريق للعلاج وعند التضحية بالحيوانات. فمن الأفضل إذا كانت الإجراءات التي تتم في تدفق مجلس الوزراء لضمان الحفاظ على ظروف معقمة أثناء العمليات الجراحية.

  1. تخدير الفئران باستخدام إيسوفلوراني كما هو الحال في "الخطوة 1، 1".
  2. تزويد التسكين 0.1 مغ/كغ البوبرينورفين، حقن تحت الجلد في الرقبة من الحيوان وتذويب 3 مل آيبوبروفين (20 ملغ/مل) في 250 مل مياه الشرب في اليوم السابق واليوم لعملية جراحية.
  3. يحلق الخطوط الفرعية والجزء الخلفي من الحيوانات لإجراء العمليات الجراحية وبعد حقن السوائل في ميناء الوصول بمنطقة نظيفة.
  4. تنفيذ شق حوالي 0.5 سم في الجلد، وفي الجانب الأيسر، قريبة من أضلاعه، الوصول المباشر لاستئصال كليته اليسرى.
  5. فتح شق صغير في عضلة اتخاذ الكلي اليسرى خارج الصفاق، إزالة الكبسولة والغدة الكظرية. لإزالة الكبسولة من الضروري عقد الكلي أفضل خارج التجويف الصفاقى.
  6. حرق وقطع من النقيض إلى النقيض الكلي مع كوتيريزير (انظر الشكل 1 للمواد اللازمة).
  7. يعيد الكلي في التجويف الصفاقى وخياطة الجروح في العضلات والجلد بخياطة 5.0 أو 6.0 غير قابلة للذوبان.
  8. في اليوم التالي، تماما إزالة الكلي اليمنى وإدخال القسطرة باستخدام شق نفسه فيما يتعلق بإزالة الكلي. ومرة أخرى، تخدير الماوس مع isoflurane وتحت الجلد حقن 0.1 مغ/كغ البوبرينورفين قبل إجراء العمليات الجراحية. كما تذوب 3 مل آيبوبروفين (20 ملغ/مل) في 250 مل مياه الشرب في اليوم السابق واليوم لعملية جراحية.
  9. إجراء شق في الجلد من حوالي 0.5 سم، ومع مساعدة المقص، فصل الجلد في الجزء الخلفي من الحيوان من العضلات لفتح الفضاء حيث سيقام ميناء الوصول.
  10. إجراء خفض في العضلات (عن 0.3-0.4 سم) بإخراج الكلي اليمنى من التجويف الصفاقى.
  11. إزالة الكبسولة والغدة الكظرية الوصول بشكل أفضل إلى الكلي. سد الوريد الكلوي والشريان والحالب مع خياطة 5.0 أو 6.0 غير الامتصاص وإزالة الكلي تماما.
  12. خياطة الجرح في العضلات البريتوني، إدخال نهاية القسطرة حيث يجب أن تظل العضلات بين اثنين من حلقات بلاستيكية، وكما هو موضح من قبل (الخطوة 1، 5).
  13. إدخال منفذ الوصول إلى الفضاء تحت الجلد وخياطة الجلد كما هو موضح في الخطوات 1.6 و 1.7.
    ملاحظة: ينبغي أن بقية الفئران لمدة 10 أيام على الأقل من هذه العمليات الجراحية لضمان أن تلتئم الجراح في العضلات البريتوني تماما، ولن يكون هناك لا تسرب في الفضاء تحت الجلد أثناء الحقن السائل. حقن السوائل كما في الخطوة 1، 10.
  14. عند الانتهاء من هذه التجربة، euthanize الحيوانات بالخنق بغاز ثاني أكسيد الكربون أو التفكك عنق الرحم.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

ويبين الشكل 1 جميع المواد المطلوبة لاتباع الإجراءات الموضحة في قسم البروتوكول. على سبيل المثال، الفئران المقدمة أو عدم استئصال (8 الحيوانات في كل مجموعة) (الشكل 2) تعرضت خلال 40 يوما (اثنين الحقن يوميا، الانتظار ساعتين على الأقل بين على حد سواء) لخليط من اثنين من ملفات Pdf مختلفة، يشيع استخدامها في الممارسة السريرية: اكسترانيل (على أساس إيكوديكسترين PDF) ودينيل (المستندة إلى الجلوكوز PDF). تم stablished مجموعة مع المحلول الملحي كعنصر تحكم (n = 6).

وتم الحصول على أنسجة الفئران البريتوني الجدارية من منطقة أبعد من القسطرة. تم تحليل عينات من أجل مقارنة سماكة الغشاء، فضلا عن وجود الخلية والحفاظ على طبقة mesothelial (الشكل 3). وفي هذا الصدد، سمك ووجود خلية هي زيادة أثناء الغسيل الكلوي، وتفاقم في المجموعة نيفريكتوميزيد. إظهار الخلايا mesothelial أيضا مورفولوجيا غيرت حيث تعاني النقابات بين الخلايا أثناء PD.

وتم الحصول على عينات مصلية من الفئران نيفريكتوميزيد لتحليل مستويات اليوريا باستخراج 250-400 ميليلتر من الدم عن طريق ثقب الوريد الوجه، في نقاط زمنية مختلفة ثلاث: يوم واحد قبل العمليات الجراحية، الأوسط للعلاج ونقطة النهاية. في حالة لا من الفئران نيفريكتوميزيد، فقط تم الحصول على عينات المصل في نقطة نهاية (الشكل 4). وأجريت القياسات باستخدام نظام متكامل كيمياء (انظر الجدول للمواد). وتبين النتائج أن استئصال 5/6 التي يتسبب فيها دولة يوريمي، وزيادة مستويات النتروجين أورييك خلال فترة التجربة مقارنة مع الحالة الأولية. وعلاوة على ذلك، عند الكليتين تعمل بكامل طاقتها، تبقى مستويات النيتروجين إريك مشابهة للدولة القاعدية، وحتى في الفئران المعرضة إلى قوات الدفاع الشعبي (الشكل 4).

Figure 1
الشكل 1 . المواد المطلوبة للعمليات الجراحية نيفريكتوميس وزرع القسطرة. (A) القسطرة وابرة (ب) 6.0 غير الامتصاص خياطة، ملاقط نقطة حادة الفولاذ المقاوم للصدأ، قفل المشبك الملقط (الاحتفاظ بالإبرة) وحادة مسحات المقص، كاوتيريزير، والقطن. وينبغي تعقيم المواد قبل العمليات الجراحية. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

Figure 2
الشكل 2 . صور لربط الكلي اليمنى وإزالة الكلية اليسرى النقيضين بحرق مع كوتيريزير. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

Figure 3
الشكل 3 . تلوين ماسون 's Trichrome. صور الممثل (400 X) الأغشية الصفاقيه الفئران يتعرضون لملفات Pdf + استئصال 5/6 وملفات Pdf (دون استئصال) والمحلول الملحي (بدون استئصال). تظهر أسهم زيادة سيلولاريتي وفقدان تكامل طبقة mesothelial. إظهار خطوط سوداء سمك الغشاء البريتوني، حيث تلطيخ الأزرق تتطابق مع المصفوفة خارج الخلية. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

Figure 4
الشكل 4 . مصل مستويات النيتروجين إريك (mg/dL) الفئران المعرضة إلى حلول قوات الدفاع الشعبي، وقدم أو عدم إجراء استئصال، والفئران تعامل مع المحلول الملحي وحدة. وتمثل البيانات كالمتوسط والانحراف المعياري. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

البيانات المنشورة أول تحليل التعديلات PD باستخدام تقنية "إغلاق نظام" أجريت في 200929 . نظام إغلاق هذا يعني أن الجهاز أكمله يقع داخل الجسم ويتم حقن السائل بإبرة عن طريق منفذ وصول. المشكلة التقنية الأكثر أهمية في المدى الطويل نماذج حيوانية لضخ السوائل عن طريق قسطرة هو حدوث إعاقة. الخيارات المتاحة هي لأداء أومينتيكتومي أو إضافة الهيبارين إلى ملفات Pdf لتقليل الالتصاقات البريتوني. ومع ذلك، الثرب يعمل كجهاز الدفاع والهيبارين، وبصرف النظر عن آثارها التخثر، ينظم عمليات مثل نشاط الخلايا التحريضية، تولد الأوعية، وتوليف للمصفوفة خارج الخلية، وتكاثر الخلايا. تم تحسين تصميم الجهاز الأصلي ونشرت في عام 2009 في وقت لاحق للتغلب على هذه المشاكل في تقليل حجم ميناء الوصول وضبط قطر القسطرة لتسهيل خروج السائل.

نماذج حيوانية ضرورية لتحليل تطور العديد من الأمراض، فضلا عن فعالية الإجراءات المتخذة بشأن سبل المشاركة في الأمراض الجدوى وإمكانات. نموذج الماوس ضخ السائل البريتوني قد تكون مفيدة لدراسة طائفة واسعة من الأمراض، وكذلك لوضع المخدرات العلاجات. هذا النموذج يوفر أداة ممتازة لتقطير طويلة الأجل من المخدرات؛ ولذلك، نحن نتوقع أنها قد تساعد في تحسين نوعية الحياة للمرضى الذين يعانون من أمراض مختلفة.

وهناك مسألتان ينبغي أن تؤخذ في الاعتبار لهذه التجارب. الأول هو حقيقة أن السائل التي تديرها في البطن ولكن لم تتم إزالة مثل مرضى PD. أولاً وقبل كل شيء، من المهم أن نلاحظ أن هذه النماذج PD-التعرض، حيث أن الهدف دراسة آثار السائل عبر الصفاق، لا لإزالة المياه ونواتج الأيض. على الرغم من ذلك، لأن الدراسات PD في الفئران ليست هناك حاجة لإزالة السوائل في كل مرة، نظراً لأنه لا يمكن القضاء بالبول. وفي الواقع، أننا لاحظنا أن الفئران نيفريكتوميزيد 5/6 لا تصبح متوذمه لأن الكسر الكلي الذي ما زال لا يزال وظيفية والوقت نترك بين الحقن اليومي بما فيه الكفاية للتبول وحدة التخزين المدارة. وعلاوة على ذلك، يشمل استخراج السائل أنيسثيتيزينج الحيوان كل يوم وفتح التجويف الصفاقى لاستنزاف، مع الأضرار اللاحقة الأنسجة. يمكن أن يكون هناك خيار آخر لاستخراج السوائل عن طريق القسطرة، ولكن أنها ستنهار لأن ذلك سوف تمتص الأجهزة. خيار ثالث قد نشرت مؤخرا41، إلا أنها ليست مناسبة لعلاج طويل.

والمسألة الثانية هي أن سكني القسطرة قد يسبب رد فعل هيئة خارجية التي يمكن أن تتداخل مع نتائج،من4243. ولذلك، درست هذا التأثير في الغشاء البريتوني للفئران المعرضة لوجود القسطرة فقط. أظهرت النتائج أن هناك سماكة الصفاق وتراكم الخلايا الجديدة في موقع الإدراج. ومع ذلك، رد الفعل هذا يقلل تدريجيا في المناطق التي بعيدة عن نقطة الإدراج القسطرة. الغشاء البريتوني على جانب الصفاق مقابل القسطرة بنفس المظهر الغشاء بالسذاجة التحكم الماوس (البيانات لا تظهر). ولهذا السبب، من المهم تحليل الجانب الأيسر من الجدار البريتوني عندما تبحث عن التعديلات الشكلية وتجنب أيضا لينيا ألبا.

استخدام القسطرة نائحين يتجنب الحاجة إلى ثقوب المتكررة في الصفاق طوال فترة العلاج، مما يقلل من خطر العدوى، وهيموبيريتونيوم وإمكانية إلحاق الأذى بجهاز. وعلاوة على ذلك، هذا الأسلوب أكثر يشبه الإجراء تقطير PDF في المرضى البشرية. عندما يتم حقن السوائل، والحيوان يظل مستيقظا تماما. يتم تنظيف منطقة مختارة من الجلد ويحتفظ فقط بالوصول إلى المنفذ. ولذلك من الضروري عقد الحيوان، والتي قد تسبب من ضغوط لا داعي لها، ويغني عن الحاجة إلى التخدير، التي قد تتداخل مع النتائج.

أولاً نشر البروتوكول نيفريكتوميس فيرانتيلي et يجيدون تم تعديل40 في عام 2015 للحد من منطقة الجرح للجراحة والاستفادة من شق اللازمة لاستخراج الكلي الصحيح لإدخال القسطرة.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

Acknowledgments

يشكر المؤلفون فيرانتيلي هاء وزاي لياباس لدعمها في إعداد البروتوكول استئصال 5/6، ر. سانشيز-دياز وف. مارتين للمساعدة مع تقييمات أورييك النيتروجين، وهيفيا هاء وواو نونيز للمساعدة على رعاية الفئران. هذا العمل كان يدعمها المنح SAF2016-80648R من "الوزارة دي الاقتصاد y كومبيتيتيفيداد"/الإقليمية فوندو Europeo de Desarrollo (مينيكو/FEDER) مانويل لوبيز-كابريرا وبي 15/00598 من سانيتارياس فوندو للبحوث (الجبهة الإسلامية للإنقاذ)-FEDER الأموال، إلى ابيﻻردو أغيليرا.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Minute Mouse Port 4French with retention beads and cross holes Access technologies MMP-4S-061108A
Posi-Grip Huber point needles 25 ga. X 1/2´´  Access technologies PG25-500
High Temperature Cautery Kit Bovie 18010-00
Forane abbVie 880393.4 HO
non absorbable suture 6/0 Laboratorio Agaró 6121
Scissors  Fine Science Tools 14079-10
forceps Fine Science Tools 11002-12
clamp Fine Science Tools 13002-10
Buprenorphine 0,3 mg/ml pharmaceutical product
cotton swabs pharmaceutical product
Dalsy (Ibuprofen) 20mg/mL oral suspension AbbVie S.R.L.  pharmaceutical product

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Meyer, T. W., Hostetter, T. H. Uremia. New England Journal of Medicine. 357 (13), 1316-1325 (2007).
  2. Pyper, R. A. Peritoneal Dialysis. Ulster Medical Journal. 17 (2), 179-187 (1948).
  3. Chaimovitz, C. Peritoneal dialysis. Kidney International. 45 (4), 1226-1240 (1994).
  4. Aguilera, A., Yanez-Mo, M., Selgas, R., Sanchez-Madrid, F., Lopez-Cabrera, M. Epithelial to mesenchymal transition as a triggering factor of peritoneal membrane fibrosis and angiogenesis in peritoneal dialysis patients. Current Opinion in Investigational Drugs. 6 (3), 262-268 (2005).
  5. González-Mateo, G. T., et al. Pharmacological modulation of peritoneal injury induced by dialysis fluids: is it an option. Nephrology Dialysis Transplantation. , (2011).
  6. Mateijsen, M. A., et al. Vascular and interstitial changes in the peritoneum of CAPD patients with peritoneal sclerosis. Peritoneal Dialysis International. 19 (6), 517-525 (1999).
  7. Williams, J. D., et al. Morphologic changes in the peritoneal membrane of patients with renal disease. Journal of the American Society of Nephrology. 13 (2), 470-479 (2002).
  8. Dobbie, J. W. Pathogenesis of peritoneal fibrosing syndromes (sclerosing peritonitis) in peritoneal dialysis. Peritoneal Dialysis International. 12 (1), 14-27 (1992).
  9. Loureiro, J., et al. Blocking TGF-beta1 protects the peritoneal membrane from dialysate-induced damage. Journal of the American Society of Nephrology. 22 (9), 1682-1695 (2011).
  10. Aroeira, L., et al. Epithelial to mesenchymal transition and peritoneal membrane failure in peritoneal dialysis patients: pathologic significance and potential therapeutic interventions. Journal of the American Society of Nephrology. 18 (7), 2004-2013 (2007).
  11. Zhang, J., et al. Regulatory T cells/T-helper cell 17 functional imbalance in uraemic patients on maintenance haemodialysis: A pivotal link between microinflammation and adverse cardiovascular events. Nephrology. 15 (1), 33-41 (2010).
  12. Welten, A. G., et al. Single exposure of mesothelial cells to glucose degradation products (GDPs) yields early advanced glycation end-products (AGEs) and a proinflammatory response. Peritoneal Dialysis International. 23 (3), 213-221 (2003).
  13. De Vriese, A. S., Tilton, R. G., Mortier, S., Lameire, N. H. Myofibroblast transdifferentiation of mesothelial cells is mediated by RAGE and contributes to peritoneal fibrosis in uraemia. Nephrology Dialysis Transplantation. 21 (9), 2549-2555 (2006).
  14. Rodela, H., Yuan, Z., Hay, J., Oreopoulos, D., Johnston, M. Reduced lymphatic drainage of dialysate from the peritoneal cavity during acute peritonitis in sheep. Peritoneal Dialysis International. 16 (2), 163-171 (1996).
  15. Barrell, G. K., McFarlane, R. G., Slow, S., Vasudevamurthy, M. K., McGregor, D. O. CAPD in sheep following bilateral nephrectomy. Peritoneal Dialysis International. 26 (5), (2006).
  16. Schambye, H. T., et al. Bicarbonate- versus lactate-based CAPD fluids: a biocompatibility study in rabbits. Peritoneal Dialysis International. 12 (3), 281-286 (1992).
  17. Garosi, G., Gaggiotti, E., Monaci, G., Brardi, S., Di Paolo, N. Biocompatibility of a peritoneal dialysis solution with amino acids: histological evaluation in the rabbit. Peritoneal Dialysis International. 18 (6), 610-619 (1998).
  18. Elema, J. D., Hardonk, M. J., Koudstaal, J., Arends, A. Acute enzyme histochemical changes in the zona glomerulosa of the rat adrenal cortex. I. The effect of peritoneal dialysis with a glucose 5 percent solution. Acta endocrinologica (Oslo). 59 (3), 508-518 (1968).
  19. Liard, J. Influence of sodium withdrawal by a diuretic agent or peritoneal dialysis on arterial pressure in one-kidney Goldblatt hypertension in the rat. Pflügers Archives. 344, 109-118 (1973).
  20. Beelen, R. H., Hekking, L. H., Zareie, M., vanden Born, J. Rat models in peritoneal dilysis. Nephrology Dialysis Transplantation. 16 (3), 672-674 (2001).
  21. Sun, Y., et al. Treatment of established peritoneal fibrosis by gene transfer of Smad7 in a rat model of PD. American Journal of Nephrology. 30 (1), 84-94 (2009).
  22. Schilte, M. N., et al. Peritoneal dialysis fluid bioincompatibility and new vessel formation promote leukocyte-endothelium interactions in a chronic rat model for peritoneal dialysis. Microcirculation. 17 (4), 271-280 (2010).
  23. Peng, Y. M., et al. A new non-uremic rat model of long-term peritoneal dialysis. Physiological Research. 60 (1), 157-164 (2011).
  24. Stavenuiter, A. W., Farhat, K., Schilte, M. N., Ter Wee, P. M., Beelen, R. H. Bioincompatible impact of different peritoneal dialysis fluid components and therapeutic interventions as tested in a rat peritoneal dialysis model. International Journal of Nephrology. 2011, 742196 (2011).
  25. Loureiro, J., et al. BMP-7 blocks mesenchymal conversion of mesothelial cells and prevents peritoneal damage induced by dialysis fluid exposure. Nephrology Dialysis Transplantation. 25 (4), 1098-1108 (2010).
  26. Duman, S., et al. Does enalapril prevent peritoneal fibrosis induced by hypertonic (3.86%) peritoneal dialysis solution? Peritoneal Dialysis International. 21 (2), 219-224 (2001).
  27. Duman, S., et al. Intraperitoneal enalapril ameliorates morphologic changes induced by hypertonic peritoneal dialysis solutions in rat peritoneum. Advances in Peritoneal Dialysis. 20, 31-36 (2004).
  28. Duman, S., Sen, S., Duman, C., Oreopoulos, D. G. Effect of valsartan versus lisinopril on peritoneal sclerosis in rats. International Journal of Artificial Organs. 28 (2), 156-163 (2005).
  29. González-Mateo, G. T., et al. Chronic exposure of mouse peritoneum to peritoneal dialysis fluid: structural and functional alterations of the peritoneal membrane. Peritoneal Dialysis International. 29 (2), 227-230 (2009).
  30. González-Mateo, G. T., et al. Modelos animales de diálisis peritoneal: relevancia, dificultades y futuro. Nefrología. Supl. 6, 17-22 (2008).
  31. Rodrigues-Diez, R., et al. IL-17A is a novel player in dialysis-induced peritoneal damage. Kidney International. 86 (2), 303-315 (2014).
  32. Gonzalez-Mateo, G. T., et al. Pharmacological modulation of peritoneal injury induced by dialysis fluids: is it an option. Nephrology Dialysis Transplantation. 27 (2), 478-481 (2012).
  33. Liappas, G., et al. Immune-Regulatory Molecule CD69 Controls Peritoneal Fibrosis. Journal of the American Society of Nephrology. 27 (12), 3561-3576 (2016).
  34. Aroeira, L. S., et al. Cyclooxygenase-2 Mediates Dialysate-Induced Alterations of the Peritoneal Membrane. Journal of the American Society of Nephrology. 20 (3), 582-592 (2009).
  35. Sandoval, P., et al. PPAR-[gamma] agonist rosiglitazone protects peritoneal membrane from dialysis fluid-induced damage. Laboratory Investigation. 90 (10), 1517-1532 (2010).
  36. Loureiro, J., et al. Tamoxifen ameliorates peritoneal membrane damage by blocking mesothelial to mesenchymal transition in peritoneal dialysis. PLoS One. 8 (4), e61165 (2013).
  37. Gonzalez-Mateo, G. T., et al. Paricalcitol reduces peritoneal fibrosis in mice through the activation of regulatory T cells and reduction in IL-17 production. PLoS One. 9 (10), e108477 (2014).
  38. Gonzalez-Mateo, G. T., et al. Rapamycin Protects from Type-I Peritoneal Membrane Failure Inhibiting the Angiogenesis, Lymphangiogenesis, and Endo-MT. BioMed Research International. 2015, 989560 (2015).
  39. Liappas, G., et al. Nebivolol, a beta1-adrenergic blocker, protects from peritoneal membrane damage induced during peritoneal dialysis. Oncotarget. 7 (21), 30133-30146 (2016).
  40. Ferrantelli, E., et al. A Novel Mouse Model of Peritoneal Dialysis: Combination of Uraemia and Long-Term Exposure to PD Fluid. Biomed Research International. 2015, 106902 (2015).
  41. Altmann, C., et al. Early peritoneal dialysis reduces lung inflammation in mice with ischemic acute kidney injury. Kidney International. 92 (2), 365-376 (2017).
  42. Peters, T., et al. Mouse model of foreign body reaction that alters the submesothelium and transperitoneal transport. American Journal of Physiology-Renal Physiology. 300 (1), F283-F289 (2011).
  43. Flessner, M. F., et al. Peritoneal changes after exposure to sterile solutions by catheter. Journal of the American Society of Nephrology. 18 (8), 2294-2302 (2007).

Tags

الهندسة، العدد 137، ضخ طويلة الأجل، نموذج مورين، الديلزه الصفاقيه، التهاب، واستئصال، القسطرة داخل
التقنيات الجراحية لموضع القسطرة واستئصال 5/6 في نماذج مورين للغسيل الكلوي البريتوني
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

González-Mateo, G. T.,More

González-Mateo, G. T., Pascual-Antón, L., Sandoval, P., Aguilera Peralta, A., López-Cabrera, M. Surgical Techniques for Catheter Placement and 5/6 Nephrectomy in Murine Models of Peritoneal Dialysis. J. Vis. Exp. (137), e56746, doi:10.3791/56746 (2018).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter