一种简单有效的方法，通过流式细胞仪检测核转录因子激活人体中性粒细胞

中性粒细胞是最丰富的外周血中的白细胞^1。在炎症和感染过程中嗜中性粒细胞是出现在受影响的部位，在那里他们作为防御²的第一行的第一个细胞。中性粒细胞具有几种抗菌^机制的吞噬能力，生产的活性氧的溶解酶脱颗粒，释放和生产，促炎细胞因子^4,5。中性粒细胞是短命的细胞得到迅速激活，通过从不同的细胞表面受体的信号。虽然中性粒细胞被认为是终末细胞，由于其短暂的一生，因为它们发生细胞凋亡，除非激活在炎症过程，它现在很清楚，他们也可以修改他们的表型改变特定基因的转录水平。生产的细胞因子⁵和抑制凋亡^7,8两个important活化依赖的细胞功能调节在嗜中性粒细胞中的转录水平。核因子κB（NF-κB）参与细胞因子的生产^4，在调节细胞的存活和凋亡^9-11在各种细胞类型中的转录控制。

导致核因子激活的信号通路研究报告基因检测或电泳迁移率分析（EMSA）。但是，由于中性粒细胞是短命的细胞，在这些细胞中的转录调控的响应研究不能进行与报告基因检测中，因为不存在有效的中性粒细胞转染技术。 EMSA分析已被用于在嗜中性粒细胞，探讨核因子活化^12,13，然而，这种方法是复杂和昂贵的，因为它涉及使用放射性物质。核转染是另一种技术，已被用于成功。LLY转染单核细胞^14。因此，至少在理论上，核因子的活化可以在中性粒细胞通过转染检测（尽管效率低）。然而，该技术将更加昂贵，耗时的和可能不太定量。在细胞核中，也可用于免疫染色的细胞的显微分析检测核因素。事实上，我们已检测NF-κB的易位到细胞核中这种方式^15。不幸的是，这种技术也是耗时，量变少，和受观察员的偏置。

在这里，我们提出了一个简单而有效的方法，它允许在孤立和immunolabeled的核的流式细胞仪检测和定量的核因子。我们描述技术从人外周血中分离出中性粒细胞，刺激这些细胞通过整合或Fc受体的抗受体抗体，隔离和immunolabel核，并通过流式细胞仪分析核（FIGURE 1）。该方法已成功地用于检测NF-κB和Elk-1的^16个核因子中性粒细胞的细胞核。了该方法的灵敏度允许在细胞核中的核因子水平的小的变化的检测。此方法也可用于从其他类型的细胞的核转录因子分析的水平。