Индия чернила инфляции: окрашивание метод визуализации опухолевых узелков

1. Проверка метастазов легких Использование Индии чернила Инфляция опухолевых легких

ПРИМЕЧАНИЕ: Для проверки люциферазы живые результаты визуализации опухоли, выполнить Индии чернила инфляции опухолевых легких мыши для количественной оценки опухолевых узелков. Клетки 4T1 также метастазируют в другие органы иткани (рисунок 1)и, следовательно, гистологическое исследование этих органов для проверки метастазов опухоли должно быть выполнено в случае необходимости. Этот протокол использовать метастазы легких в качестве примера.

1. Храните мышей в существующей домашней клетке для эвтаназии. Когда их размещают вместе с другими животными, переместим этих мышей, не усыпанных в другую клетку.
2. Снимите верхнюю часть фильтра клетки и замените верхнюю часть фильтра CO2. Включите сжатый газовый баллон CO2 (100%) подключен к верхней части фильтра CO2. Установите скорость потока на уровне 2 л/мин и держите CO2 на, по крайней мере 10 мин. Если мыши все еще дышат в конце 10 минут, оставьте СО2 на по крайней мере 1 мин после мышей прекратить дыхание. Выключите управление цилиндрами CO2 и измеритель потока. Подождите еще 3 минуты и удалите верхнюю часть фильтра.
3. Поместите принесенную в жертву мышь на спину на полистироловую доску. Прикрепите ноги, чтобы обеспечить беспрепятственный доступ к трахее. Спрей мышей с 70% этанола.
4. Используя ножницы, вырезать вдоль средней линии середины живота мыши через грудную клетку и вверх к слюнных желез. Наблюдайте за трахеей. Используйте типсы для удаления тканей, окружающих трахею, чтобы разоблачить трахею.
5. Нить наконечник пипетки под трахеей. Держа кончик одной рукой, аккуратно поднимите трахею вверх и подальше от тела.
6. Поверните платформу, удерживав мышь на 180 градусов. Используйте 1/2 CC 27 G 1/2 туберкулин шприц для инъекций индийской чернил (10% индийских чернил и 0,1% гидроксида аммония) в легкие через трахею. Полностью надуть легкие чернилами, пока не ощущается сильное сопротивление.
7. Используйте ножницы, чтобы сократить трахеи. Используйте типсы, чтобы держать мышь и вставить еще один набор типсов под легкие и вытащить легочные доли из мыши. Промыть легкие кратко в стакане, содержащем воду.
8. В химическом дымовом капюшоне перенесите легкие в стеклянный сцинтилляционный флакон, содержащий 3 мл раствора Фекете (50% этанола, 6% формальдегида и 3% ледниковой уксусной кислоты). Крышка флакона, чтобы предотвратить раствор от испарения.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Ткани могут храниться в растворе Фекете бесконечно.
9. Через несколько минут, наблюдать опухолевые узелки, как белые точки на черных легких (Рисунок 1). Белая опухолевая узелка видна глазами. Перенесите легкие в блюдо в дымовой капюшон и подсчитайте количество белых пятен. Каждое белое пятно представляет собой одну метастатическую опухолевую узелку.

Рисунок 1. Визуализация узелков опухоли легких Индией чернила инфляции. Легкое опухоленосной мыши было надуто чернилами Индии и закреплено в растворе Фекете. Белые точки - это метастазы легких.