Summary
В настоящем протоколе описан способ периваскулярной доставки лекарственных препаратов и агентов, модифицирующих экспрессию генов, внутриутробно развивающемуся плоду. Важно отметить, что влияние лекарств/агентов на кровоток можно измерить по мере прогрессирования беременности.
Abstract
Способность организма поддерживать постоянный приток крови к мозгу в ответ на внезапные скачки системного артериального давления (АД) известна как церебральная ауторегуляция (CAR), которая происходит в сонной артерии. В отличие от доношенных новорожденных, недоношенные новорожденные не способны снижать мозговой кровоток (КБК) в ответ на повышение системного АД. У недоношенных новорожденных это подвергает хрупкие сосуды головного мозга высокому перфузионному давлению, что приводит к их разрыву и повреждению мозга. Исследования ex vivo с использованием проволочной миографии продемонстрировали, что сонные артерии недоношенного плода сужаются в ответ на активацию адренергических альфа1-рецепторов. Эта реакция притупляется у недоношенного плода. Таким образом, для изучения роли альфа1-АР in vivo представлен инновационный подход к определению влияния лекарственных препаратов на сегмент сонной артерии in vivo у овцевидного плода в период развития гестации. Представленные данные свидетельствуют об одновременном измерении внутриутробного кровотока плода и артериального давления. Периваскулярная система доставки может быть использована для проведения длительного исследования в течение нескольких дней. Дополнительные применения этого метода могут включать системы доставки вируса для изменения экспрессии генов в сегменте сонной артерии. Эти методы могут быть применены к другим кровеносным сосудам в растущем организме внутриутробно , а также во взрослом организме.
Introduction
Рождение вызывает стресс у плода, и происходит значительное повышение уровня катехоламина, основного гормона стресса 1,2. Это повышает системное АД, и если это давление передается в хрупкие капилляры головного мозга через сонные артерии, это может привести к их разрыву 3,4,5. Скачки системного АД не достигают головного мозга из-за сужения сонных артерий у доношенного плода. Однако этот механизм не развит у недоношенного плода, и это ответственно за значительно более высокую вероятность поражения головного мозга у недоношенных плодов 4,5.
В настоящее время не существует подходящего метода для изучения созревания путей, участвующих в регуляции сонного кровотока у развивающихся плодов. Эти исследования сонного кровотока и вазочувствительности имеют решающее значение как с фундаментальной научной, так и с клинической точки зрения. В настоящее время для определения молекулярных путей, участвующих в регуляции сократимости артерий, стандартный метод предполагает посмертную изоляцию артериальных сегментов. Затем проводятся эксперименты с использованием проволочной миографии для определения вазосократимости различных фармакологических молекул, определяющих регуляторные пути, участвующие в артериальной сократимости 6,7. Следует отметить, что результаты ex vivo не способны полностью воспроизвести среду in vivo из-за регуляции кровотока вверх и вниз по течению от сонной артерии. Таким образом, целью настоящего исследования была разработка методики, позволяющей определять влияние вазочувствительных химических веществ или агентов на кровоток в артерии in vivo.
Методология периваскулярной доставки, описанная в данной статье, обеспечивает подход in vivo для изучения влияния фармакологических или генетических манипуляций сигнальных путей на различные артериальные сегменты. С помощью этого метода можно манипулировать артериальным давлением плода и сонным кровотоком. Кроме того, демонстрируются эксперименты с зародышами овец для изучения эффектов сигнальных молекул в развивающемся плоде. Будем надеяться, что представленная подробная методология приведет к новым исследованиям в области изучения кровотока, особенно в отношении физиологии и патологии плода.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Для настоящего исследования было получено разрешение на проведение экспериментов на животных от Комитета по уходу за животными и их использованию Университета Аризоны. Для настоящего исследования были использованы беременные овцы породы Колумбия-Рамбуйе в возрасте от 2 до 4 лет. Животные были получены из овцеводческого подразделения Университета Аризоны.
1. Содержание животных
- Добывайте животных с любого овечьего ранчо.
- Транспортировать овец в лабораторию на 105 день ± 5 дней до 137 дней ± 5 дней гестационного возраста (dGA). Содержать овец при температуре 22 °C ± 1 °C при влажности окружающей среды. Обеспечьте гранулы люцерны (см. Таблицу материалов), соли и воду вволю.
2. Подготовка материала
- Сконструировать периваскулярную катетерную систему.
- Присоедините один конец 4-футовой трубки Tygon к 2-сантиметровой трубке коллекторного насоса (MPT) (см. Таблицу материалов). Прикрепите другой конец 2-сантиметрового MPT к еще одной 4-футовой трубке Tygon.
- Сделайте небольшую щель в МФТ, чтобы жидкость/агенты могли выйти в периваскулярное пространство.
- Стерилизуйте датчики потока (см. Таблицу материалов), катетеры и маленькую отвертку методом газовой стерилизации.
3. Предоперационная подготовка животных
- Получите разрешение на проведение экспериментов на животных от Комитета по уходу за животными и их использованию.
- Перед операцией содержать овец на корме nil per os (NPO) в течение 24 ч и NPO в воде в течение 16 ч. В день операции оберните лицо овцематки подушечкой, чтобы защитить глаза. Побрейте левую сторону шеи, чтобы обнажить яремную вену, и очистите кожу с помощью повидон-йода и 70% этанола.
- Поместите внутривенный (ВВ) катетер в яремную вену овцы и закрепите его на коже с помощью водонепроницаемой ленты и раневых зажимов (см. Таблицу материалов).
- Обезболивайте овец внутривенным введением диазепама (0,15 мг/кг) и кетамина гидрохлорида (16 мг/кг). Вводят внутримышечную инъекцию суспензии прокаина пенициллина G (25 000 в/кг) и внутривенно кетопрофена (2,2 мг/кг) (см. таблицу материалов).
- Побрейте место разреза овцы и прилегающие области (живот, бока и пах) ножницами #10. Чтобы убедиться, что шерсть полностью удалена, побрейте участок лезвием #40. Вымойте выбритый участок бактерицидным очищающим средством (см. Таблицу материалов) и водой. Высушите одноразовой салфеткой.
- Подтвердите глубину анестезии (определяемую и поддерживаемую реакцией на защемление кожи, рефлекс роговицы и оценку тонуса челюсти), а затем интубируйте овцу эндотрахеальной трубкой с внутренним диаметром 6,5-7,5 мм (см. Таблицу материалов) и закрепите трубку на месте. Поместите овцу на подъемный стол в положении лежа на боку и переложите на хирургический стол с V-образным верхом в положении лежа на спине.
- Закрепите конечности овцематки на хирургическом столе с помощью хирургических креплений. Переведите овцу в положение Тренделенбурга, чтобы уменьшить давление на плодно-плацентарный отдел.
- Прикрепите датчик пульсоксиметра (см. Таблицу материалов) к языку/уху овцы, чтобы постоянно контролировать насыщение оксигемоглобином и частоту сердечных сокращений. Поместите термометр под язык овцы, чтобы контролировать температуру.
- Подключите эндотрахеальную трубку к дыхательному контуру наркозного аппарата и начните искусственную вентиляцию легких, контролируя истекший уровеньСО2.
- Поддерживайте анестезию, регулируя дозу изофлурана в пределах 2,5%-4% на протяжении всей операции. Убедитесь, что животное находится под адекватным наркозом, зажав ухо. Ввести сбалансированный полиионный (физиологический раствор 0,9% по массе) со скоростью 5 мл/кг/ч с помощью яремного катетера, установленного на этапе 3.2.1.
- Выполните стерильный скраб. Опрыскать область живота и бока раствором повидона (10% раствор йода). Потрите область марлей, пропитанной йодом, начиная от места разреза и двигаясь наружу, следя за тем, чтобы не возвращаться к центру после скрабирования наружу.
- Затем опрыскайте участок этанолом (70% этанола с массой тела) и потрите марлей, пропитанной этанолом, аналогично скрабированию повидоном. Повторите весь процесс три раза. Опрыскайте участок раствором повидона.
- Подогрейте физраствор в стерильной емкости и доведите его до 37 °C. Держите его рядом с операционным столом. Соедините прижигание (см. Таблицу материалов).
- Попросите членов хирургической бригады одеться в шапочки, маски и бахилы, вымыть руки (хирургический скраб) и надеть стерилизованные хирургические халаты и перчатки. С этого момента необходимо соблюдать строгую стерильную хирургическую практику.
- Простерилизованную область живота овцы накройте стерильными полотенцами.
4. Хирургическое вмешательство
- Экстериоризация плода
- После обеспечения достаточной глубины анестезии выполните стандартный лапаротомический разрез длиной 10 см с помощью скальпеля (лезвие #20) по белой линии от пупка до черепной части вымени. Остановите кровотечение, сделав разрез с прижиганием (настройки мощности: 50 разрезов и 25 коагуляции).
- Сделайте небольшой разрез по средней линии стенки тела под разрезом кожи и вскройте брюшную полость ножницами Метценбаума (см. Таблицу материалов).
- Экстериоризируйте матку, содержащую плод, через брюшную стенку, подложив под нее стерильные хирургические полотенца (между брюшной полостью матери и маткой). Пальпируют матку для определения положения плода и семядолей. С помощью прижигания сделайте разрез ~10 см через стенку матки с большим изгибом над тыльной стороной головы, избегая видимых кровеносных сосудов и плацентомов.
- Используйте четыре зажима Бэбкока (см. Таблицу материалов), чтобы зафиксировать матку и плацентарные оболочки, и потяните зажимы Бэбкока за четыре противоположных угла, чтобы сделать головку плода видимой. Через этот разрез экстериоризируйте черепную половину плода и накройте голову плода стерильной безлатексной перчаткой, наполненной теплым стерильным физиологическим раствором (37 °C), чтобы предотвратить начало дыхания.
- После обеспечения достаточной глубины анестезии выполните стандартный лапаротомический разрез длиной 10 см с помощью скальпеля (лезвие #20) по белой линии от пупка до черепной части вымени. Остановите кровотечение, сделав разрез с прижиганием (настройки мощности: 50 разрезов и 25 коагуляции).
- Инструментарий периваскулярного катетера сонной артерии
- При извлечении головки плода из матки попросите ассистента осторожно держать щипцы Бэбкока в вертикальном положении, чтобы свести к минимуму потерю околоплодных вод. При обнаженной шейке плода выполняют косой разрез кожи 3-3,5 см вдоль передней границы грудино-ключично-сосцевидной мышцы (СКМ) с одной стороны шеи в средней области и отделяют фасцию москитными щипцами.
- Разделяют платизму, и выполняют рассечение по медиальной границе СКМ мышцы от ее сухожилия сверху до уровня подъязычной мышцы снизу. Втягивание СКМ обнажит каротидный листок, который поверхностно содержит тонкостенную внутреннюю яремную вену, а под ней будет находиться сонная артерия в виде толстостенного сосуда.
- Втяните кожу с помощью зажимов Бэбкока и выполните тупое рассечение, чтобы освободить сонную артерию от окружающих тканей и сонной артерии.
- Извлеките из стерильной упаковки датчик расхода диаметром 3 мм (см. Таблицу материалов), отвинтите опорную пластину зонда и сдвиньте ее, чтобы обнажить L-образный кронштейн. Осторожно приподнимите сонную артерию и осторожно зацепите скобу под сосудом, избегая контакта с сосудом.
- С помощью щипцов закройте кронштейн датчика потока, осторожно сдвинув опорную пластину в закрытое положение. Закрепите кронштейн датчика расхода, затянув опорный винт датчика расхода. Чтобы облегчить этот процесс, осторожно возьмитесь щипцами за концы датчика потока, чтобы стабилизировать датчик потока во время затяжки винта.
- Предварительно промойте периваскулярный катетер и поместите его в непосредственной близости от сонной артерии проксимальнее датчика потока. Убедитесь, что открытый разрез периваскулярного катетера находится в непосредственной близости от сонной артерии.
- С помощью шелкового нерассасывающегося шва 3-0 закрепите проксимальный и дистальный концы периваскулярной системы и проточный зонд к близлежащей интерстициальной ткани. Закройте место разреза непрерывным швом, закройте кожу плода шелковым нерассасывающимся швом 3-0 и закрепите катетеры на коже, обернув шов вокруг катетера три раза. Снимите перчатку и поместите головку плода обратно в матку.
- При извлечении головки плода из матки попросите ассистента осторожно держать щипцы Бэбкока в вертикальном положении, чтобы свести к минимуму потерю околоплодных вод. При обнаженной шейке плода выполняют косой разрез кожи 3-3,5 см вдоль передней границы грудино-ключично-сосцевидной мышцы (СКМ) с одной стороны шеи в средней области и отделяют фасцию москитными щипцами.
- Катетеризация конечностей плода
- Экстериоризируйте заднюю ножку плода. Возьмитесь за ногу и поверните ее в сторону, чтобы визуализировать внутреннюю часть бедра. Очистите участок стерильной марлей, сделайте разрез 2 см и обнажите бедренную артерию. Поместите и закрепите датчик потока, выполнив процедуру, аналогичную той, что выполняется с сонной артерией, а затем закройте разрез.
- Сделайте разрез длиной 2 см вдоль медиальной поверхности большеберцовой кости ~0,5 см дистальнее колена. Обнажают заднюю большеберцовую артерию (толстостенную) и подкожную вену (тонкостенную). Введите поливиниловые катетеры (наружный диаметр: 1,4 мм и внутренний диаметр: 0,9 мм) в заднюю большеберцовую артерию и подкожную вену, используя стандартную технику разреза, как описано ниже:
- Освободите интересующий сосуд тупым рассечением. Перевязать дистальную часть сосуда шелковым швом 3-0 (без иглы) квадратным узлом с тремя бросками. Предварительно наложите вторую безшелковистую завязку на проксимальной стороне сосуда (под сосудом), но оставьте лигатуру незавязанной. Ножницами Кастровьехо (см. Таблицу материалов) сделайте небольшой поперечный надрез в сосуде на 2 мм проксимальнее дистальной лигатуры. Длина разреза должна составлять ~25% от диаметра сосуда.
- Ограничьте кровоток сосуда, осторожно потянув за проксимальный незавязанный шов. Наполните катетер стерильным гепаринизированным физиологическим раствором. Введите скошенный конец катетера и продвинуте наконечник на 20 см в сосуд плода.
- Удерживайте катетер на месте щипцами, пока ассистент завязывает проксимальный шелковый шов, чтобы зафиксировать сосуд на катетере; Полностью обвяжите сосуд вокруг введенного катетера с помощью квадратных узлов в 2 мм от места введения тремя бросками. Привяжите дистальную лигатуру проксимально к проксимальной связке, фиксирующей сосуд к катетеру.
- Закройте разрез кожи с помощью шелкового нерассасывающегося шва 3-0 с использованием непрерывного шовного рисунка. Убедитесь, что швы завязаны вокруг катетеров, чтобы избежать ограничения кровотока при растяжении. Поместите предварительно промытый катетер в матку и закрепите его на плоде с помощью нерассасывающегося шелкового шва 3-0.
5. Укладка плода обратно и закрытие раны
- Верните плод в матку. Сшивают плодные оболочки с помощью 3-0 нерассасывающихся шелковых швов с непрерывным фиксирующим рисунком (по Цушингу). Закройте мышечный слой матки с помощью нерассасывающегося шелкового шва 3-0.
- Введите хирургический стержень из нержавеющей стали 18 подкожно вдоль брюшной стенки до парареберной области. Дайте проксимальному концу стержня выйти из парареберного участка, выполнив разрез в 1 см.
- Прикрепите катетеры к дистальному концу хирургического стержня и попросите ассистента подать катетеры и продуть кабель зонда через место парареберного выхода, полностью протолкнув стержень через парареберное отверстие.
- Закрепите все катетеры и кабели проточного зонда в месте парареберного разреза. Наложите водонепроницаемый скотч и пришите катетеры к коже овцы. Пришить пластиковый сетчатый мешочек к внешней стороне овцематки поверх катетеров и зонда для хранения катетеров.
- Используя монофиламентный синтетический рассасывающийся шовный материал 1-0, закрепите белую линию непрерывным рисунком. Закрепите слой кожи хирургическими скобами.
- Прекратите общую анестезию и экстубируйте овцу, как только гортанные рефлексы вернутся к нормальному исходному уровню. Не оставляйте животное без присмотра до тех пор, пока оно не придет в полное сознание. Переместите овцу в метаболическую тележку, как только она станет стабильной после общей анестезии. Верните животное в комнату послеоперационного эксперимента после полного восстановления после наркоза.
- Вводят послеоперационные анальгетики внутривенно (10 мг/кг/сут фенилбутазон) в течение 3 дней. Ежедневно промывать сосудистые катетеры гепаринизированным физиологическим раствором (100 ЕД/мл гепарина в 0,9% растворе NaCl).
6. Послеоперационные эксперименты in vivo
- Ежедневно промывайте катетеры гепаринизированным физиологическим раствором (75 ЕД/мл). Подождите 72 часа, прежде чем делать какие-либо измерения. Чтобы измерить кровоток, подключите датчики потока, введенные в плод с модулем периваскулярного потока, к PowerLab и подключенному компьютеру.
ПРИМЕЧАНИЕ: Запись может быть сделана в программном обеспечении PowerLab (см. Таблицу материалов) для измерения кровотока в сонной и бедренной артериях. Проводите базовое измерение в течение 30 минут. - Прикрепите артериальный и амниотический катетеры к мостовидному усилителю, подключенному к аналого-цифровому преобразователю (см. таблицу материалов). Внутривенно ввести плоду болюс объемом 1 мл 10 мкМ фенилэфрина и измерять сонный и бедренный кровоток в течение 15 минут. Затем подождите 30 минут или пока кровоток не вернется к исходному уровню.
- Влить 1 мл 10 мкМ фенилэфрина в периваскулярный катетер и измерять кровоток в течение 15 минут. Смойте фенилэфрин, введя 5 мл теплого физиологического раствора через периваскулярный катетер. Затем подождите 30 минут или пока кровоток не вернется к исходному уровню.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Для изучения локализованных манипуляций с кровотоком in vivo в периваскулярное пространство сонной артерии с помощью экстериоризованного инфузионного катетера вводили 1 мл фенилэфрина (10 мкМ), агонистаα 1-AR, чтобы определить влияние на местный сонный кровоток и влияние на системное артериальное давление. На рисунке 1А показано значительное снижение сонного кровотока без какого-либо влияния на системное артериальное давление у овец с близкого срока беременности. На рисунке 1В показаны те же данные для недоношенного плода. Введение 1 мл ПТО внутривенно увеличивало системный кровоток, не влияя на сонный кровоток у овец в недоношенном плоде (рис. 1C). На рисунке 1D показаны те же данные для недоношенного плода. Напротив, введение ПТО через периваскулярный катетер не оказывало никакого эффекта у недоношенных овец; однако внутривенное введение вызывало значительное увеличение как сонного кровотока, так и системного АД. Этот эксперимент демонстрирует полностью функциональную периваскулярную гильзу, которая может регулировать кровоток в сонной артерии внутриутробно , не влияя на системное АД. Результаты показывают, что недоношенные плоды не реагируют на фенилэфрин-опосредованную регуляцию сонного кровотока; тем не менее, у плода, находящегося в сроке беременности, ответ является зрелым (рис. 1E). Важно отметить, что внутривенное введение ПТО увеличивало сонный кровоток только у недоношенных плодов, без существенного эффекта у недоношенных плодов (рис. 1G). Однако внутривенное введение ПТО повышало системное артериальное давление как у недоношенных, так и у недоношенных плодов (рис. 1H). Результаты также показывают, что периваскулярная инстилляция фенилэфрина не оказывала влияния на системное артериальное давление (рис. 1F).
Рисунок 1: Манипуляции с кровотоком in vivo. Примерный след системного артериального давления и исходных измерений кровотока сонной артерии и изменений после введения фенилэфрина (ПЭ) через периваскулярный катетер от (А) внутриутробного недоношенного плода и (Б) внутриутробного недоношенного плода. Примерный след системного артериального давления и базового кровотока сонной артерии и изменений после внутривенного введения фенилэфрина (PHE) внутриутробному недоношенному плоду и (D) недоношенному плоду in utero и недоношенному плоду in utero (D). Показаны изменения (E) процента сонного кровотока и (F) системного артериального давления через периваскулярную катетерную систему доставки у доношенных и недоношенных овец. Показаны изменения в процентном соотношении (G) сонной артерии и (H) системного артериального давления при системном введении для короткодоношенных и недоношенных овец. Столбцы погрешности показывают стандартную ошибку среднего значения. N = 4 в каждой группе. *P < 0,05 по t-критерию Стьюдента. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы увидеть увеличенную версию этого рисунка.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
В настоящее время не существует метода изучения сократимости и дилатации сосудов in vivo в ответ на лекарственные соединения и манипуляции с генами. В качестве стандарта в этой области кровоток in vivo измеряется с помощью допплеровских датчиков, микросфер и радиоактивных молекул, таких как тритированная вода. Тем не менее, чтобы манипулировать функциями рецепторов или последующей сигнализацией, животных приносят в жертву, а эксперименты проводятся in vitro в ваннах с органами после выделения артериальных сегментов. Современные методы позволяют проводить манипуляции с артериальными сегментами in vivo путем введения химических веществ или векторов для модификации экспрессии генов. Кроме того, этот метод оказывает минимальное влияние на системный кровоток из-за локальной доставки препаратов.
Современные эксперименты показывают, что введение фенилэфрина приводит к сужению сонной артерии со снижением кровотока. Данное исследование проливает свет на роль альфа-адренорецепторов в регуляции кровотока сонной артерии к головному мозгу. Этот метод может быть использован для изучения влияния различных фармакологических соединений на кровоток в режиме реального времени у живых плодов. Периваскулярный катетер также может быть использован для внедрения лентивируса в периваскулярное пространство, которое поглощается сосудистой сетью, что приводит к нокдауну или гиперэкспрессии желаемого сигнального белка или рецептора.
На протяжении десятилетий ванны для органов и тканей давали полезные данные о сократительной способности сосудов 6,8,9. Однако эти исследования являются ex vivo, что вызывает вопросы относительно воспроизводимости in vivo и означает, что непрерывные измерения не могут быть выполнены. Чтобы преодолеть это ограничение, этот инновационный подход исследует кровоток сонной артерии in vivo. Дополнительным шагом вперед в этой методологии будет внедрение генетической модуляции с использованием подходов к доставке вируса, что позволит генетически изменять артериальные сегменты для повышения и понижения экспрессии генов путем доставки шРНК или CRISPR/Cas9.
Критическим этапом протокола является размещение периваскулярного катетера параллельно сосуду в непосредственной близости. Чтобы это сработало, нужно знать диаметр целевой артерии. Кроме того, важно разработать правильный рукав. Рукав можно расположить рядом с модулируемой артерией, а не окружать ее. Это также обеспечит локальную доставку химикатов и таргетных агентов.
Ограничением метода является то, что он регулирует только сегмент артерии, и результаты, касающиеся органа или ткани кровотока, должны быть интерпретированы с осторожностью. Для достижения желаемого эффекта может потребоваться изменить длину рукава и количество химикатов. Метод имеет широкое применение в модуляции регуляции генов у живых плодов. Это может быть адаптировано для модуляции функции и экспрессии гена в части любой ткани. Кроме того, метод может быть применен для модуляции экспрессии генов во взрослом организме.
Несмотря на то, что существуют и другие методы измерения кровотока in vivo , такие как использование трансзвуковых датчиков потока10, лазерной допплерографии11 и микросфер12, ни один из этих методов не позволяет исследовать местное влияние препаратов на кровоток в артериальном сегменте в отличие от системных эффектов вмешательства. Таким образом, данный метод уникален, так как позволяет измерять и модулировать местный кровоток без каких-либо системных эффектов.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Авторы не раскрывают информацию.
Acknowledgments
Для этих исследований были использованы внутренние средства Университета Аризоны.
Materials
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Aaron Bovie Electrosurgical Cautery | Henry Schein, Inc | 5905974 | |
Aaron Bovie Electrosurgical Generator | Henry Schein, Inc | 1229913 | |
Alfalfa Pellets | Sacate Pellet Mills, Inc. Maricopa AZ | 100-80 | |
Analog to Digital Converter | ADI Instruments | Powerlab | |
Babcock forceps | Roboz Surgicals | RS8020 | |
Bridge Amplifier | ADI Instruments | Bridge Amplifier | |
Castroviejo scissors | Roboz Surgicals | RS5650SC | |
Diazepam | Henry Schein, Inc | 1278188 | |
Endotracheal Tube | Henry Schein, Inc | 7020408 | |
Flow Probes | Transonic Systems Inc. | MC2PSS-JS-WC100-CRS10-GC, MC3PSS-LS-WC100-CRS10-GC | |
Heparin | Henry Schein, Inc | 1162406 | |
Isoflurane | Henry Schein, Inc | 1182097 | |
Ketamine | Henry Schein, Inc | 1273383 | |
Ketoprofen | Zoetis Inc., Kalamazoo, MI | Ketofen | |
Manifold Pump Tubing | Fisher Scientific | 14-190-508 | |
Metzenbaum scissors | Roboz Surgicals | RS6010 | |
Narkomed 4 Anesthesia Machine | North American Dräger | Narkomed 4 | |
Normal Saline | Fisher Scientific | Z1376 | |
penicillin G procaine suspension | Henry Schein, Inc | 7455874 | |
phenylbutazone | VetOne Boise, ID | 510226 | |
Phenylephrine | Sigma Aldrich Inc. | P1240000 | |
Pivodine Scrub | VetOne | 510094 | Germicidal cleanser |
PowerLab | ADInstruments | Data acquisition hardware device | |
Pulse Oximeter | Amazon Inc. | UT100V | |
Tygon Tubing | Fisher Scientific | ND-100-80 | |
V-Top Surgical Table | VetLine Veterinary Classic Surgery | TSP-4010 | |
Wound Clips | Fisher Scientific | 10-001-024 |
References
- Lagercrantz, H., Slotkin, T. A.
The "stress" of being born. Scientific American. 254 (4), 100-107 (1986). - Ronca, A. E., Abel, R. A., Ronan, P. J., Renner, K. J., Alberts, J. R. Effects of labor contractions on catecholamine release and breathing frequency in newborn rats. Behavioral Neuroscience. 120 (6), 1308-1314 (2006).
- Czynski, A., et al. Cerebral autoregulation is minimally influenced by the superior cervical ganglion in two- week-old lambs, and absent in preterm lambs immediately following delivery. PLoS One. 8 (12), e82326 (2013).
- Ballabh, P. Pathogenesis and prevention of intraventricular hemorrhage. Clinics in Perinatology. 41 (1), 47-67 (2014).
- Ballabh, P. Intraventricular hemorrhage in premature infants: Mechanism of disease. Pediatric Research. 67 (1), 1-8 (2010).
- Goyal, R., Goyal, D., Chu, N., Van Wickle, J., Longo, L. Cerebral artery alpha-1 AR subtypes: High altitude long-term acclimatization responses. PLoS One. 9 (11), e112784 (2014).
- Goyal, R., Mittal, A., Chu, N., Zhang, L., Longo, L. D. alpha(1)-Adrenergic receptor subtype function in fetal and adult cerebral arteries. American Journal of Physiology - Heart and Circulatory Physiology. 298 (1), H1797-H1806 (2010).
- Goyal, D., Goyal, R. Developmental maturation and alpha-1 adrenergic receptors-mediated gene expression changes in ovine middle cerebral arteries. Scientific Reports. 8 (1), 1772 (2018).
- Goyal, R., et al. Maturation and the role of PKC-mediated contractility in ovine cerebral arteries. American Journal of Physiology - Heart and Circulatory Physiology. 297 (6), H2242-H2252 (2009).
- Gratton, R., Carmichael, L., Homan, J., Richardson, B. Carotid arterial blood flow in the ovine fetus as a continuous measure of cerebral blood flow. Journal of the Society for Gynecologic Investigation. 3 (2), 60-65 (1996).
- Bishai, J. M., Blood, A. B., Hunter, C. J., Longo, L. D., Power, G. G. Fetal lamb cerebral blood flow (CBF) and oxygen tensions during hypoxia: a comparison of laser Doppler and microsphere measurements of CBF. Journal of Physiology. 546, 869-878 (2003).
- Ashwal, S., Dale, P. S., Longo, L. D. Regional cerebral blood flow: studies in the fetal lamb during hypoxia, hypercapnia, acidosis, and hypotension). Pediatric Research. 18 (12), 1309-1316 (1984).