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Uma técnica de oclusão da artéria cerebral média para induzir A depressão pós-AVC em ratos

Published: May 22, 2019
doi:
10.3791/58875
, , , , , , , , ,
1Department of Anesthesiology and Critical Care, Soroka University Medical Center, Faculty of Health Sciences,Ben-Gurion University of the Negev, 2Department of Neurosurgery, Soroka University Medical Center, Faculty of Health Sciences,Ben-Gurion University of the Negev, 3Department of Biophysics and Biochemistry, Faculty of Biology, Ecology, and Medicine,Oles Honchar Dnipro National University

Summary

Aqui nós apresentamos um protocolo para induzir a depressão do borne-curso nos ratos obstruindo a artéria cerebral média através da artéria carotídea interna. Utilizamos o teste de nadada forçada de Porsolt e o teste de preferência de sacarose para confirmar e avaliar o humor depressivo induzido.

Abstract

A depressão pós-AVC (PSD) é a mais recorrente de todas as complicações psiquiátricas resultantes de um AVC isquêmico. Uma maior maioria (cerca de 60%) de todos os pacientes com AVC isquêmico sofrem de PSD, um distúrbio considerado um precursor isquêmico relacionado ao AVC para aumento da morte e degradação na saúde. A fisiopatologia do PSD ainda é obscura. Para estudar o mecanismo de desenvolvimento e ocorrência de PSD ainda mais, e para descobrir uma terapia, tentamos desenvolver um novo protocolo que requer a oclusão da artéria cerebral média (MCA) através da artéria carótida interna (ICA) em ratos. Este protocolo descreve um modelo de PSD induzido em ratos através da oclusão da artéria cerebral média (MCAO). Também utilizado no experimento estão o teste de nadada forçada de Porsolt e o teste de preferência de sacarose para confirmar e avaliar o humor depressivo dos ratos investigação. Em vez de inserir o cateter através da artéria carótida externa (ECA), conforme estipulado para o procedimento original, esta técnica de MCAO tem o monofilamento passando diretamente pela AIC. Esta técnica de MCAO foi desenvolvida alguns anos há e conduz a uma redução na mortalidade e na variabilidade. É geralmente aceito que os critérios utilizados são preferidos na seleção de modelos biológicos. Os dados obtidos com este protocolo mostram que este modelo de MCAO poderia ser uma forma de induzir PSD em ratos e poderia potencialmente levar à compreensão da fisiopatologia e do desenvolvimento futuro de novas drogas e outros agentes neuroprotetores.

Introduction

O AVC é o quarto na lista de doenças perpetradores da morte nos Estados Unidos1,2,3, enquanto provoca a maioria das deficiências em adultos nos países desenvolvidos4; Isto faz o curso um candidato principal entre as edições de saúde as mais significativas do mundo. A normalidade no acidente vascular cerebral-os pacientes sobreviventes é rara, com cerca de 15%-40% das vítimas de sobrevivência que sofrem de incapacidade permanente, 20% exigindo cuidados institucionais 3 meses após o início do AVC5, e cerca de um terço dos sobreviventes 6-mês precisando de outros para ajudá-los a viver através de cada dia6. O curso declaradamente esclarece também os gastos nacionais crescentes da saúde7. As estimativas da associação americana do coração têm custos do curso-relacionados nos Estados Unidos em mais de $50000000000 em 20108.

Não só o AVC causa danos a longo prazo dos indivíduos, mas alguns sobreviventes tendem a sofrer distúrbios emocionais e comportamentais, como demência, fadiga, ansiedade, depressão, delirium e agressão9,10,11 ,12,13,14. A sequela psicológica mais recorrente após um AVC é a depressão pós-AVC (PSD), diagnosticada em cerca de 40%-50% das sobrevivências15,16,17. A depressão induzida por AVC resulta em aumento da morbidade e mortalidade18,19,20,21,22. A fisiopatologia do PSD não é conhecida completamente, mas aparentemente é causada por múltiplos fatores e está ligada à incapacidade, comprometimento cognitivo e local da lesão23.

O modelo do rato da isquemia cerebral focal, criado por mcao, é o modelo animal o mais difundido do curso24,25,26,27. Ao demonstrar a indução de PSD em ratos por oclusar a MCA através da ICA, empregam-se técnicas que minimizam a mortalidade e a variabilidade no modelo de MCAO28.

O objetivo principal deste protocolo é delinear os passos para induzir PSD em ratos, oclusando o MCA através da AIC, um modelo modificado de MCAO, que reduz a mortalidade e o desfecho da variabilidade28. Os objetivos específicos incluem a realização de exames neurológicos e histológicos (determinando o escore de severidade neurológica [NSS], o volume da zona de infarto e o edema cerebral) para verificar a eficácia do MCAO e usar testes comportamentais para examinar a influência deste procedimento de MCAO no desenvolvimento de desordens emocionais, principalmente PSD.

Protocol

O Comitê de cuidado animal da Universidade de Ben-Gurion do Negev, Israel aprovou todos os procedimentos do tratamento e de teste usados neste protocolo. 1. preparação de ratos para o procedimento experimental Nota: Selecione ratos machos adultos Sprague-Dawley pesando 300-350 g. Abrigar os ratos, quatro por gaiola, em um Biotério a 22 ° c e 40% de umidade, com um ciclo de luz invertida de 12 h/escuro (luzes fora em 8:00 a.m.) e acess…

Representative Results

Os achados histológicos (tabela 1) revelaram um volume de infarto estatisticamente significante como percentual do cérebro total (p < 0, 1) pós-mcao quando comparados aos animais do grupo Sham-controle. Também foi relatado um edema cerebral estatisticamente significante quando a avaliação do grupo experimental (p < 0, 3) foi colocada lado a lado com a do grupo Sham-controle. Os escores do…

Discussion

Uma das maneiras pelas quais a técnica de MCAO aqui apresentada pode ser considerada mais segura do que o modelo original de MCAO é ilustrada pelo fato de que o TCE e seus ramos, incluindo a artéria occipital, o terminal lingual e a artéria maxilar, não estão comprometidos ao oclusar o MCA através do ICA. O offset original do modelo de mcao do ECA (e de suas filiais), desdissecando distalmente e coagulando os46, causa a mastigação danificada, devido a um acordo à fonte vascular aos músc…

Offenlegungen

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Agradecemos ao professor Olena Severynovska do departamento de Fisiologia, faculdade de biologia, ecologia e medicina, Oles Honchar Dnipro University, Dnipro, Ucrânia por seu apoio e contribuições úteis para nossas discussões. Os dados obtidos fazem parte da tese de doutorado da RK.

Materials

Absorbent pad – – –
Black lusterless perspex box – – (120 cm × 60 cm × 60 cm), divided into a 25% central zone and the surrounding border zone
Bottles Techniplast ACBT0262SU 150 ml bottles filled with 100 ml of water and 100 ml 1%(w/v) sucrose solution
Electric Shock Heat System Ultasonic Inc. – –
Horizon-XL Mennen Medical Ltd
Imaging System Kodak – For imaging and quantification
Monofilament – – –
Paper towels Pharmacy – Dry towels used for keeping rats dry after immersing them in water
Pexiglass cylinder – – a 100 cm tall and 40 cm in diameter cylinder used for carrying out the forced swim test
Purina Chow Purina 5001 Rodent laboratory chow given to rats, mice and hamster is a life-cycle nutrition that has been used in biomedical researc for over 5 decades. Provided to rats ad libitum in this experiment
Rat Cages Techniplast 2000P Conventional housing for rodents. Was used for housing rats throughout the experiment
Scanner  Canon CanoScan 4200F –
Video Camera ETHO-VISION (Noldus) – Digital video camera for high definition recording of rat behavior under open field test
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Referenzen

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Kuts, R., Melamed, I., Shiyntum, H. N., Frank, D., Grinshpun, J., Zlotnik, A., Brotfain, E., Dubilet, M., Natanel, D., Boyko, M. A Middle Cerebral Artery Occlusion Technique for Inducing Post-stroke Depression in Rats. J. Vis. Exp. (147), e58875, doi:10.3791/58875 (2019).
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