सेरेब्रल रक्त के थक्कों के कोशिका घटकों का विश्लेषण करने के लिए एक व्यापक दृष्टिकोण
Summary
यह अध्ययन थक्के के घुलने, सेल धुंधला होने और नियमित रक्त परीक्षा के माध्यम से मस्तिष्क रक्त के थक्कों के सेल घटक विश्लेषण के लिए एक तेज और प्रभावी विधि का वर्णन करता है।
Abstract
सेरेब्रल थ्रोम्बोसिस, सेरेब्रल धमनी या नस में रक्त का थक्का, मस्तिष्क रोधगलन का सबसे आम प्रकार है। सेरेब्रल रक्त के थक्कों के कोशिका घटकों का अध्ययन निदान, उपचार और रोग का निदान के लिए महत्वपूर्ण है। हालांकि, थक्कों के सेल घटकों का अध्ययन करने के लिए वर्तमान दृष्टिकोण मुख्य रूप से सीटू धुंधला होने पर आधारित हैं, जो सेल घटकों के व्यापक अध्ययन के लिए अनुपयुक्त है क्योंकि कोशिकाओं को थक्कों में कसकर लपेटा जाता है। पिछले अध्ययनों ने सिपुन्कुलस न्यूडस से एक फाइब्रिनोलिटिक एंजाइम (एसएफई) को सफलतापूर्वक अलग किया है, जो सेल घटकों को जारी करते हुए सीधे क्रॉस-लिंक्ड फाइब्रिन को नीचा दिखा सकता है। इस अध्ययन ने सेरेब्रल थ्रोम्बस के सेल घटकों का अध्ययन करने के लिए एसएफई पर आधारित एक व्यापक विधि स्थापित की। इस प्रोटोकॉल में थक्का घुलना, सेल रिलीजिंग, सेल धुंधला होना और नियमित रक्त परीक्षा शामिल है। इस पद्धति के अनुसार, सेल घटकों का मात्रात्मक और गुणात्मक रूप से अध्ययन किया जा सकता है। इस विधि का उपयोग करने वाले प्रयोगों के प्रतिनिधि परिणाम दिखाए गए हैं।
Introduction
सेरेब्रोवास्कुलर रोग तीन प्रमुख बीमारियों में से एक है जो मानव स्वास्थ्य को खतरे में डाल सकता है, जिनमें से इस्केमिक सेरेब्रोवास्कुलर रोग 80% से अधिक है। सेरेब्रल थ्रोम्बोसिस और सेरेब्रल वेन थ्रोम्बोसिस आज सबसे अधिक चिंतित इस्केमिक सेरेब्रोवास्कुलर रोग हैं, जो मुख्य रूप से सेरेब्रल रक्त के थक्कों 1,2 के कारण होते हैं। यदि उपचार ठीक से नहीं किया जाता है, तो इसमें उच्च विकलांगता और मृत्यु दर और डिस्चार्जके बाद उच्च पुनरावृत्ति दर होगी।
हाल ही में, अध्ययनों की बढ़ती संख्या से पता चला है कि सेरेब्रल रक्त के थक्कों के कोशिका घटक सेरेब्रल थ्रोम्बोसिस 4,5,6 के निदान, उपचार और पूर्वानुमान के साथ कसकर सहसंबद्ध हैं। इसलिए, थ्रोम्बस संरचना, विशेष रूप से सेल घटकों पर डेटा की उपलब्धता, नैदानिक निदान और उपचार के लिए महत्वपूर्ण है। दुर्भाग्य से, वर्तमान में उपलब्ध विधियां रक्त के थक्के घटक का मात्रात्मक और गुणात्मक रूप से व्यापक रूप से विश्लेषण नहीं कर सकती हैं। उदाहरण के लिए, मार्टियस स्कारलेट ब्लू आधारित इन-सीटू धुंधला केवल थक्के7 के कुछ स्लाइस के लाल / सफेद रक्त कोशिकाओं का अध्ययन कर सकता है। इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री (आईएचसी) आधारित इन-सीटू धुंधला केवल उनके एंटीबॉडी8 का उपयोग करके थक्के के कुछ स्लाइस के सीमित रक्त घटकों का अध्ययन कर सकता है। सूक्ष्म छवि-आधारित विधियां केवल थक्के9 की विशिष्ट संरचना से संबंधित हैं। इसके अलावा, वे सभी विधियां श्रमसाध्य और समय लेने वालीहैं। आज तक, सेरेब्रल थ्रोम्बी सेल घटकों का मात्रात्मक और गुणात्मक अध्ययन करने की प्रक्रियाओं की सूचना नहीं दी गई है। यह व्यापक रूप से स्वीकार किया जाता है कि क्रॉस-लिंक्ड फाइब्रिन रक्त कोशिकाओं को थक्कोंमें कसकर लपेटता है। नतीजतन, सेल घटकों के सटीक विश्लेषण के लिए क्रॉस-लिंक्ड फाइब्रिन का विशिष्ट क्षरण और बरकरार कोशिकाओं की रिहाई महत्वपूर्ण है।
पिछले कार्यों ने सिपुन्कुलस न्यूडस (एसएफई) से एक फाइब्रिनोलिटिक एंजाइम को अलग किया, जो फाइब्रिन को विशेष रूप से और जल्दी से12 कम कर सकता है। इसमें, एसएफई की अनूठी गतिविधि के आधार पर सेरेब्रल थ्रोम्बी के सेल घटकों का विश्लेषण करने के लिए एक विधि प्रस्तावित की गई थी। इस प्रोटोकॉल ने पहले थक्कों के फाइब्रिन को नीचा दिखाने के लिए एसएफई का उपयोग किया और फिर राइट के स्टेनिंग और नियमित रक्त परीक्षा13,14 द्वारा सेल घटकों का विश्लेषण किया। इस विधि के अनुसार, सेरेब्रल थ्रोम्बी के कोशिका घटकों का मात्रात्मक और गुणात्मक अध्ययन किया जा सकता है। यह सरल और प्रभावी प्रोटोकॉल अन्य रक्त के थक्कों के सेल घटक विश्लेषण के लिए लागू किया जा सकता है।
Protocol
Representative Results
Discussion
एसएफई एक फाइब्रिनोलिटिक एजेंट है जो फाइब्रिन को सीधे और प्रभावी ढंग से12,16 कम कर सकता है। यहां, एसएफई को सेरेब्रल रक्त के थक्कों के क्रॉस-लिंक्ड फाइब्रिन को नीचा दिखाने, थक्कों के भ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस शोध को ज़ियामेन सिटी के विज्ञान और प्रौद्योगिकी ब्यूरो (3502Z20227197), और फ़ुज़ियान प्रांत के विज्ञान और प्रौद्योगिकी ब्यूरो (संख्या 2019J01070, No.2021Y0027) द्वारा वित्त पोषित किया गया था।
Materials
| Agglutination Reaction Plate | ROTEST | RTB-4003 | |
| Auto Hematology Analyzer | SYSMEX | XNB2 | |
| Automatic Vertical Pressure Steam Sterilizer | SANYO | MLS-3750 | |
| Centrifuge Tube (1.5 mL) | Biosharp | BS-15-M | |
| Clean bench | AIRTECH | BLB-1600 | |
| Constant Temperature Incubator | JINGHONG | JHS-400 | |
| Culture Dish (100 mm) | NEST | 704001 | |
| DHG Series Heating and Drying Oven | SENXIN | DGG-9140AD | |
| Electronic Analytical Balance | DENVER | TP-213 | |
| Filter Membrane (0.22 µm) | Millex GP | SLGP033NK | |
| Micro Refrigerated Centrifuge | Cence | H1650-W | |
| Microscope Slides | CITOGLAS | 01-30253-50 | |
| Milli-Q Reference | Millipore | Z00QSV0CN | |
| Normal Saline | CISEN | H37022337 | |
| Optical Microscope | Nikon | ECLIPSE E100 | |
| Parafilm | Bemis | PM-996 | |
| Phosphate-Buffered Saline | Beyotime | C0221A | |
| Pipette Tip (1 mL ) | Axygene | T-1000XT-C | |
| Pipette Tip (200 µL) | Axygene | T-200XT-C | |
| Pipettor (1 mL) | Thermo Fisher Scientific | ZY18723 | |
| Pipettor (200 µL) | Thermo Fisher Scientific | ZY20280 | |
| Scalpel | MARTOR | 23111 | |
| Small-sized Vortex Oscillator | Kylin-Bell | VORTEX KB3 | |
| Tweezer | Hystic | HKQS-180 | |
| Wright Staining Solution | Beyotime | C0135-500ml |
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