זיהוי מטרות מיקרוביאלי של חסינות אדפטיבית במחלות אידיופטית ניתן להשיג על ידי שימוש assay האנזים צמוד immunospot.
Abstract
חסינות מסתגלת היא מרכיב חשוב אישור של פתוגנים תאיים. היכולת לזהות ולכמת התגובות הללו בבני אדם הוא כלי אבחוני חשוב. Assay enzyme-linked immunospot (ELISPOT) הוא צובר פופולריות ביכולתה לזהות התגובה החיסונית התאית נגד אנטיגנים של חיידקים, כולל אוכלוסיות immunosuppressed כגון אלה עם HIV, השתלה, ואת השימוש בסטרואידים. Assay זה יש את היכולת לכמת את התגובה החיסונית נגד אנטיגנים ספציפיים של חיידקים, כמו גם להבחין אם התגובות האלה Th1 או Th2 אופי. ELISPOT אינה מוגבלת לאתר של דלקת. זה צדדי ביכולתה להעריך את התגובה החיסונית בתוך דם היקפיים, כמו גם אתרים של מעורבות פעילה כגון שטיפה ברונכואלוואולרית, נוזל השדרה מוחין, מיימת. זיהוי של המערכת החיסונית כנגד אנטיגנים בודדות או מרובות אפשרי, כמו גם epitopes חלבונים ספציפיים בתוך חיידקים. Assay זה מאפשר זיהוי של המערכת החיסונית לאורך זמן, כמו גם הבחנות מוכר על ידי אנטיגנים לתאי T הפונדקאי. Dual ELISPOT מבחני צבע זמינים עבור גילוי של ביטוי סימולטני של שני ציטוקינים. יישומים אחרונים של טכניקה זו כוללים אבחנה של שחפת extrapulmonary, כמו גם חקירה של התרומה של אנטיגנים זיהומיות למחלות אוטואימוניות.
Protocol
בשביל הפרוטוקול הבא, אנו משתמשים בתאי דם היקפיים mononuclear (PBMC) כמו התאים של עניין. עם זאת, פרוטוקול זה ניתן להשתמש עם סוגי תאים אחרים. בצע את assay במנדף רקמות התרבות באמצעות טכניקה סטרילית. יום 1: הכנת צלחת תאים <ol style=";text-align:right…
Discussion
Assay ELISPOT התפתחה כאחד מבחני החשוב ביותר בשימוש נרחב כדי לפקח על המערכת החיסונית בבני אדם וכן מגוון של מינים אחרים. עם assay ELISPOT, תדרים תא החיסון ניתן למדוד ברמת תא בודד ללא הרחבה או מניפולציה של אוכלוסיות תאים. Assay ELISPOT הוחל נרחב לחקור ספציפית אנטיגן התגובה החיסונית במחלות…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
נתמך בחלקו על ידי מענק ונדרבילט CTSA 1 UL1 RR024975 של המרכז הלאומי למשאבי מחקר, המכונים הלאומיים לבריאות. עבודה זו מומנה על ידי NIH R01 HL 83839; R01 AI 65744.
Materials
A. Preparation of Media
B. Preparation of Tris Buffer
Add 800 ml of ddH2O to 1 L beaker.
Measure 12 grams of Tris and add to the beaker.
Add 0.12 grams of magnesium chloride hexahydrate (MgCl2:6H2O) into the beaker.
Stir with magnetic stirring rod on automatic stirring plate.
Once dissolved, pH the solution to 9.5.
Add 200 mL of ddH2O to the beaker, bringing it up to 1000mL.
Dosanjh, D. P., Hinks, T. S., Innes, J. A., Deeks, J. J., Pasvol, G., Hackforth, S., Varia, H., Millington, K. A., Gunatheesan, R., Guyot-Revol, V., Lalvani, A. Improved diagnostic evaluation of suspected tuberculosis.Ann Intern Med. 148, 325-336 (2008).
Chambers, I. R., Cone, T. R., Oswald-Richter, K., Drake, W. P. Enzyme-linked Immunospot Assay (ELISPOT): Quantification of Th-1 Cellular Immune Responses Against Microbial Antigens. J. Vis. Exp. (45), e2221, doi:10.3791/2221 (2010).