Enzyme-linked Immunospot Assay (ELISPOT): Quantificazione di Th-1 risposte cellulari immunitarie contro antigeni microbici
Summary
L'identificazione di bersagli microbici di immunità adattativa nelle malattie idiopatica può essere realizzato tramite l'uso delle analisi enzima-collegata immunospot.
Abstract
Immunità adattiva è una componente importante della clearance dei patogeni intracellulari. La capacità di rilevare e quantificare queste risposte negli esseri umani è un importante strumento diagnostico. L'analisi enzima-collegata immunospot (ELISPOT) sta guadagnando popolarità per la sua capacità di identificare le risposte immunitarie cellulari contro gli antigeni microbici, comprese le popolazioni immunodepressi, come quelli con infezione da HIV, trapianto e uso di steroidi. Questo test ha la capacità di quantificare le risposte immunitarie contro specifici antigeni microbici, così come distinguere se queste risposte sono Th1 e Th2 nel carattere. ELISPOT non si limita al sito di infiammazione. E 'versatile nella sua capacità di valutare per le risposte immunitarie all'interno del sangue periferico, così come i luoghi di coinvolgimento attivo, come lavaggio broncoalveolare, liquido cerebro-spinale, e ascite. Rilevazione delle risposte immunitarie contro una antigeni singoli o multipli è possibile, così come epitopi specifici all'interno di proteine microbiche. Questo saggio facilita la rilevazione di risposte immunitarie nel corso del tempo, così come distinzioni antigeni riconosciuti dalle cellule T ospite. Doppio ELISPOT colori sono disponibili per il rilevamento di espressione simultanea di due citochine. Recenti applicazioni di questa tecnica sono la diagnosi di tubercolosi extrapolmonare, nonché la ricerca del contributo di antigeni infettive alle malattie autoimmuni.
Protocol
Discussion
Il saggio ELISPOT è emerso come uno dei saggi più importanti e ampiamente utilizzati per monitorare le risposte immunitarie negli umani e una varietà di altre specie. Con il saggio ELISPOT, frequenze di cellule immunitarie può essere misurata a livello di singola cellula senza espansione o la manipolazione di popolazioni di cellule. Saggio ELISPOT è stato ampiamente applicato per indagare antigene risposta immunitaria specifica in varie malattie tra cui infezioni, tumori, allergie e malattie autoimmuni. L'appli…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Sostenuto in parte da Vanderbilt CTSA sovvenzione 1 UL1 RR024975 dal Centro nazionale per le risorse di ricerca, National Institutes of Health. Questo lavoro è stato finanziato dal NIH R01 HL 83839; R01 AI 65744.
Materials
A. Preparation of Media
B. Preparation of Tris Buffer
- Add 800 ml of ddH2O to 1 L beaker.
- Measure 12 grams of Tris and add to the beaker.
- Add 0.12 grams of magnesium chloride hexahydrate (MgCl2:6H2O) into the beaker.
- Stir with magnetic stirring rod on automatic stirring plate.
- Once dissolved, pH the solution to 9.5.
- Add 200 mL of ddH2O to the beaker, bringing it up to 1000mL.
- Filter the solution with a 0.22 μm filter.
C. Materials necessary for ELISPOT analysis:
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