Summary

ויזואליזציה של עצבים המגזרי הזחל ב 3 Rd Instar תסיסנית הכנות הזחל

Published: September 29, 2010
doi:

Summary

הזחלים תסיסנית melanogaster לספק מערכת מודל אידיאלי לחקור את המנגנונים של תחבורה axonal בתוך העצבים סגמנטלי הזחל. באמצעות הליך זה, 3 rd הזחלים instar נושאת מוטציות שונות ניתן להשוות את הזחלים סוג בר.

Abstract

תסיסנית melanogaster מתגלה כמערכת מודל עוצמה לחקר התפתחות ותפקוד של מערכת העצבים, במיוחד בגלל הגנטיקה נוח רצף הגנום שלו באופן מלא. בנוסף, מערכת העצבים הזחל היא מערכת מודל אידיאלי לחקור מנגנונים של תחבורה axonal כמו העצבים סגמנטלי הזחל מכילות צרורות של אקסונים עם גופי התא שלהם ממוקם בתוך המוח ומסופי העצב שלהם סיום לאורכו של הגוף. כאן אנו מתארים את הליך להדמיה של חלבונים בתוך שלפוחית ​​סינפטית עצבים סגמנטלי הזחל. אם נעשה בצורה נכונה, כל המרכיבים של מערכת העצבים, יחד עם רקמות הקשורים כגון השרירים NMJs, נותרו על כנן, ללא פגע, ומוכן להיות דמיינו. 3 rd הזחלים instar נושאת מוטציות שונות גזור, קבוע, מודגרות עם נוגדנים שלפוחית ​​סינפטית, דמיינו ולעומת הזחלים סוג בר. הליך זה יכול להיות מותאמים עבור מספר נוגדנים סינפטי או עצבי ושינויים שונים והפצה של מגוון של חלבונים ניתן לצפות בקלות בתוך העצבים סגמנטלי הזחל.

Protocol

1. הכנה של ריאגנטים הכן 1x הצפת Dissection באמצעות 128 mM NaCl, 4mm CaCl 2, 4 מ"מ MgCl 2, 2 mM KCl, HEPES 5mm ו סוכרוז 36mM. הפתרון PH ל 7.2 ולסנן לעקר. הכן את מקבע באמצעות דילול של פורמלדהיד 01:01 16% ו הצפת Dissection 1x. </l…

Discussion

הזחל עצבים תסיסנית סגמנטלי מהווים מערכת רבת עוצמה כדי לחקור מנגנונים בתחבורה axonal. אם 3 rd לנתיחה instar הזחל מבוצעת כראוי, כל הרכיבים של CNS, PNS, ורקמות הקשורים, כגון השרירים NMJs, ניתן לבדוק בתוך זחל אחד. אנחנו צריכים להתאים את הפרוטוקול מאחד שפרסם Hurd ו סקסטון (1996). פ?…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

SG נתמכת על ידי קרנות מאוניברסיטת המדינה של ניו יורק ב באפלו ומ ג'ון ר Oishei קרן.

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
Dumont #5 Forceps   Fine Science Tools, Inc. 11252-20  
Minutien Pins, Stainless Steel   Fine Science Tools, Inc. 26002-10  
Mcpherson-Vannas Straight Blade 8cm Scissors   Fisher Scientific 50822236  
Vectashield, Mounting Medium   Vector Laboratories, Inc. H-1000  
Sylgard 184 Silicone elastomer   Dow Corning Corporation 4026148  
formaldehyde, 16%   Electron Microscopy Sciences 15710  
dCSP3   Developmental Studies Hybridoma Bank    
Alexa Fluor 568 Goat Anti-Mouse IgG   Invitrogen A-11004  

References

  1. Gunawardena, S., Goldstein, L. Disruption of Axonal Transport and Neuronal Viability by Amyoid Precursor Protein Mutations in Drosophila. Neuron. 32 (2), 389-401 (2001).
  2. Gunawardena, S., Her, L. S., Brusch, R. G., Laymon, R. A., Niesman, I. R., Gordesky-Gold, B., Sintasath, L., Bonini, N. M., Goldstein, L. S. Disruption of axonal transport by loss of huntingtin or expression of pathogenic polyQ proteins in Drosophila. Neuron. 40 (1), 1-2 (2003).
  3. Hurd, D. D., Saxton, W. M. Kinesin mutations cause motor neuron disease phenotypes by disrupting fast axonal transport in Drosophila. 遗传学. 144 (3), 1075-1085 (1996).
  4. Zinsmaier, K. E., Eberle, K. K., Buchner, E., Walter, N., Benzer, S. Paralysis and early death in cysteine string protein mutants of Drosophila. Science. 263, 977-980 (1994).

Play Video

Cite This Article
Fye, S., Dolma, K., Jung Kang, M., Gunawardena, S. Visualization of Larval Segmental Nerves in 3rd Instar Drosophila Larval Preparations. J. Vis. Exp. (43), e2128, doi:10.3791/2128 (2010).

View Video