Visualisatie van larvale Segmentale zenuwen in 3 Rd Instar Drosophila Larvale Voorbereidingen
Summary
Drosophila melanogaster larven zorgen voor een ideaal modelsysteem om de mechanismen van het axonaal transport te onderzoeken binnen de larvale segmentale zenuwen. Met behulp van deze procedure, kan 3 e instar larven dragen verschillende mutaties worden vergeleken met wild-type larven.
Abstract
Drosophila melanogaster is in opkomst als een krachtige modelsysteem voor het bestuderen van de ontwikkeling en functie van het zenuwstelsel, met name vanwege de gunstige genetica en volledig gesequenced genoom. Bovendien, het larvale zenuwstelsel is een ideaal modelsysteem om de mechanismen van axonaal transport studie als het larvale segmentale zenuwen bevatten bundels van axonen met hun cellichamen gelegen in de hersenen en hun zenuwuiteinden eindigen langs de lengte van het lichaam. Hier beschrijven we de procedure voor de visualisatie van synaptische vesicles eiwitten in larvale segmentale zenuwen. Indien correct gedaan, alle componenten van het zenuwstelsel, samen met de omliggende weefsels, zoals spieren en NMJs, blijven intact, onbeschadigd, en klaar om te worden gevisualiseerd. 3 e instar larven voeren verschillende mutaties worden ontleed, vaste, geïncubeerd met synaptische blaasje antilichamen, gevisualiseerd en vergeleken met wild type larven. Deze procedure kan worden aangepast voor verschillende synaptic of neuronale antilichamen en veranderingen in de verdeling van een verscheidenheid van eiwitten kunnen gemakkelijk worden waargenomen binnen de larvale segmentale zenuwen.
Protocol
Discussion
De Drosophila larvale segmentale zenuwen zijn een krachtig systeem om mechanismen in axonaal transport te bestuderen. Als de 3 e instar larven dissectie correct wordt uitgevoerd, kan alle componenten van het CZS, PNS, en de bijbehorende weefsel, zoals de spieren en NMJs, worden onderzocht binnen een enkele larve. We hebben aangepast dit protocol bij het ene gepubliceerd door Hurd en Saxton (1996). Dit protocol kan ook worden aangepast aan andere neuronale antistoffen te testen, maar optimalisatie van…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
SG wordt ondersteund door middelen van de State University van New York in Buffalo en van John R. Oishei Foundation.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Dumont #5 Forceps | Fine Science Tools, Inc. | 11252-20 | ||
| Minutien Pins, Stainless Steel | Fine Science Tools, Inc. | 26002-10 | ||
| Mcpherson-Vannas Straight Blade 8cm Scissors | Fisher Scientific | 50822236 | ||
| Vectashield, Mounting Medium | Vector Laboratories, Inc. | H-1000 | ||
| Sylgard 184 Silicone elastomer | Dow Corning Corporation | 4026148 | ||
| formaldehyde, 16% | Electron Microscopy Sciences | 15710 | ||
| dCSP3 | Developmental Studies Hybridoma Bank | |||
| Alexa Fluor 568 Goat Anti-Mouse IgG | Invitrogen | A-11004 |
References
- Gunawardena, S., Goldstein, L. Disruption of Axonal Transport and Neuronal Viability by Amyoid Precursor Protein Mutations in Drosophila. Neuron. 32 (2), 389-401 (2001).
- Gunawardena, S., Her, L. S., Brusch, R. G., Laymon, R. A., Niesman, I. R., Gordesky-Gold, B., Sintasath, L., Bonini, N. M., Goldstein, L. S. Disruption of axonal transport by loss of huntingtin or expression of pathogenic polyQ proteins in Drosophila. Neuron. 40 (1), 1-2 (2003).
- Hurd, D. D., Saxton, W. M. Kinesin mutations cause motor neuron disease phenotypes by disrupting fast axonal transport in Drosophila. 遗传学. 144 (3), 1075-1085 (1996).
- Zinsmaier, K. E., Eberle, K. K., Buchner, E., Walter, N., Benzer, S. Paralysis and early death in cysteine string protein mutants of Drosophila. Science. 263, 977-980 (1994).
