Screening per le modifiche genomiche: un metodo per identificare i mutanti generati da CRISPR in Drosophila
Published: April 30, 2023
Abstract
Fonte: Du, L., et al. J. Vis. Exp. (2018).
Questo video descrive un metodo di screening per identificare le mosche transgeniche Drosophila, il cui genoma è stato modificato utilizzando CRISPR-Cas9. CRISPR-Cas9 è un potente strumento di editing del genoma che ha rivoluzionato il modo in cui gli scienziati possono manipolare il genoma di un organismo. Nel protocollo di esempio, vedremo come identificare i mutanti generati da CRISPR, in cui un inserimento di una sequenza di transattivazione sostituisce il primo esone del gene branchless (bnl), creando così una linea di driver specifica del gene bnl, bnl-LexA.
Protocol
Questo protocollo è un estratto da Du et al., An Efficient Strategy for Generating Tissue-specific Binary Transcription Systems in Drosophila by Genome Editing, J. Vis. Exp. 1. Genetica delle voli e screening (figura 1 e figura 2) Quando gli embrioni iniettati si sviluppano in adulti, attraversa ogni singolo G0 vola alle mosche del bilanciatore. Selezionare un bilanciatore adatto per il cromosoma contenente l’allele di destinazione. An…
Representative Results
Figura 1: Panoramica del flusso di lavoro per l’editing del genoma mediato da CRISPR/Cas9 per generare un sistema di trascrizione binario. Viene indicata la durata approssimativa del tempo richiesta per ogni passaggio. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura. <img alt="Figu…
Materials
| Tris-HCl | Sigma Aldrich | T3253 | Molecular Biology |
| EDTA | Sigma Aldrich | E1161 | Molecular Biology |
| NaCl | Sigma Aldrich | S7653 | Molecular Biology |
| UltraPure DNase/RNase-Free Water | ThermoFisher Scientific | 10977-023 | Molecular Biology |
| Primers | IDT-DNA | PCR | |
| Proteinase K | ThermoFisher Scientific | 25530049 | Molecular Biology |
| 2x PCR PreMix, with dye (red) | Sydlab | MB067-EQ2R | Molecular Biology |
| MKRS/TB6B | Kornberg lab | Fly line | |
| CO2 station | Genesee Scientific | 59-122WCU | fly pushing |
| Stereo microscope | Olympus | SZ-61 | fly pushing |
| Microtube homogenizing pestles | Fisher-Scientific | 03-421-217 | genomic DNA isolation |
Cite This Article
Screening for Genomic Modifications: A Method to Identify CRISPR-Generated Mutants in Drosophila. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20110, doi: (2023).