ゲノム修飾のスクリーニング:ショウジョウバエにおけるCRISPR生成変異体の同定方法
Published: April 30, 2023
Abstract
出典: Du, L., 他 . ゲノム編集によるショ ウジョウバエ における組織特異的なバイナリ転写システムを生成するための効率的な戦略. J. ヴィス・エクス (2018).
このビデオでは、CRISPR-Cas9を使用してゲノムを改変したトランスジェニックショウジョウバエを同定するスクリーニング方法について説明します。CRISPR-Cas9は、科学者が生物のゲノムを操作する方法に革命を起こした強力なゲノム編集ツールです。プロトコル例では、TRANSActivationシーケンスの挿入が分岐のない(bnl)遺伝子の最初のエキソンに取って代わるCRISPR生成変異体を同定する方法を見て、bnl-LexAというbnl遺伝子特異的ドライバラインを作成する。
Protocol
このプロトコルは、ゲノム編集、J.Vis. Exp.(2018)によるショウジョウバエにおける組織特異的バイナリ転写システムを生成するための効率的な戦略であるDu et al.からの抜粋である。 1. 飛ぶ遺伝学とスクリーニング(図1および図2) 注入された胚が成人に発達すると、各単一のG0 ハエを横切ってバランサハに飛ぶ。標的となるアリールを含む?…
Representative Results
図1:CRISPR/Cas9媒介ゲノム編集のワークフローの概要を示し、バイナリ転写システムを生成する。 各ステップに必要なおおよその所要時間が示されます。 この図の大きなバージョンを表示するには、ここをクリックしてください。 <p class="jove_conten…
Materials
| Tris-HCl | Sigma Aldrich | T3253 | Molecular Biology |
| EDTA | Sigma Aldrich | E1161 | Molecular Biology |
| NaCl | Sigma Aldrich | S7653 | Molecular Biology |
| UltraPure DNase/RNase-Free Water | ThermoFisher Scientific | 10977-023 | Molecular Biology |
| Primers | IDT-DNA | PCR | |
| Proteinase K | ThermoFisher Scientific | 25530049 | Molecular Biology |
| 2x PCR PreMix, with dye (red) | Sydlab | MB067-EQ2R | Molecular Biology |
| MKRS/TB6B | Kornberg lab | Fly line | |
| CO2 station | Genesee Scientific | 59-122WCU | fly pushing |
| Stereo microscope | Olympus | SZ-61 | fly pushing |
| Microtube homogenizing pestles | Fisher-Scientific | 03-421-217 | genomic DNA isolation |
Cite This Article
Screening for Genomic Modifications: A Method to Identify CRISPR-Generated Mutants in Drosophila. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20110, doi: (2023).