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Coleta rotineira de conjuntos de dados crio-EM de alta resolução usando microscópio eletrônico de transmissão de 200 KV
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JoVE Journal Biochemistry
Routine Collection of High-Resolution cryo-EM Datasets Using 200 KV Transmission Electron Microscope

Coleta rotineira de conjuntos de dados crio-EM de alta resolução usando microscópio eletrônico de transmissão de 200 KV

DOI:
10.3791/63519-v

•

09:49 min

•

March 16, 2022

•

, , , , , , , , ,
1Materials and Structural Analysis Division,Thermo Fisher Scientific, 2Max Planck Institute of Biochemistry, Molecular Structural Biology, 3Materials and Structural Analysis Division,Thermo Fisher Scientific

Chapters

  • 00:04Introduction
  • 01:27Grid Loading, Mapping, and Selection of Best Cryo-EM Grids for Data Collection
  • 02:36Setting up a Data Collection Session in the Single Particle Analysis Software
  • 05:44Final Microscope Alignments Before Starting Data Collection
  • 07:15Results: Gallery of Grids, Cryo-EM Reconstruction of Apo-Ferritin, and Effect of Energy Filtering on Cryo-EM Images
  • 08:56Conclusion

Summary

Automatic Translation

Automatic Translation

Mapas crio-EM de alta resolução de macromoléculas também podem ser alcançados usando microscópios TEM de 200 kV. Este protocolo mostra as melhores práticas para definir alinhamentos ópticos precisos, esquemas de aquisição de dados e seleção de áreas de imagem que são essenciais para a coleta bem-sucedida de conjuntos de dados de alta resolução usando um TEM de 200 kV.

Tags

Cryo-EM200 KV TEMHigh-resolutionProtein StructureProtein ComplexesMolecular MechanismsStructure-based Drug DesignApoferritinProteasomeAuto GridsLiquid NitrogenAutomated Data CollectionAtlasEPU

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