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PCR変異生成、クローニング、発現、高速タンパク質精製プロトコルおよびトリプトファン合成酵素の野生型および変異型の結晶化
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PCR Mutagenesis, Cloning, Expression, Fast Protein Purification Protocols and Crystallization of the Wild Type and Mutant Forms of Tryptophan Synthase
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PCR変異生成、クローニング、発現、高速タンパク質精製プロトコルおよびトリプトファン合成酵素の野生型および変異型の結晶化

日本語

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09:31 min

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September 26, 2020

DOI:

10.3791/61839-v

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10.3791/61839-v

•

09:31 min
September 26, 2020

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1Department of Chemistry,University of California-Riverside, 2Department of Biochemistry,University of California-Riverside

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本稿では 、サルモネラ・チフィムリウム・ トリプトファン合成酵素の発現と精製のための一連の連続的な方法を提示し、このプロトコルは、1日でタンパク質複合体を精製するための急速なシステムをコンプする。対象となる方法は、部位特異的変異誘発、 大腸菌におけるタンパク質発現、アフィニティークロマトグラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィー、および結晶化である。

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PCR MutagenesisCloningExpressionProtein PurificationTryptophan SynthaseSalmonella TyphimuriumAmmonium Sulfate FractionationSize Exclusion ChromatographySDS-PAGEProtein ConcentrationCrystallization

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Hilario, E., Fan, L., Mueller, L. J., Dunn, M. F. PCR Mutagenesis, Cloning, Expression, Fast Protein Purification Protocols and Crystallization of the Wild Type and Mutant Forms of Tryptophan Synthase. J. Vis. Exp. (163), e61839, doi:10.3791/61839 (2020).

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