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Einführung von Punktmutationen in humane pluripotente Stammzellen durch nahtlose Genom-Editierung
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Introducing Point Mutations into Human Pluripotent Stem Cells Using Seamless Genome Editing
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Einführung von Punktmutationen in humane pluripotente Stammzellen durch nahtlose Genom-Editierung

Deutsch

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09:03 min

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May 10, 2020

DOI:

10.3791/61152-v

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10.3791/61152-v

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May 10, 2020

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1MRC Centre for Regenerative Medicine,University of Edinburgh

Summary

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Hier beschreiben wir eine detaillierte Methode zur nahtlosen Genbearbeitung in humanen pluripotenten Stammzellen unter Verwendung eines piggyBac-basierten Donorplasmids und der Cas9-Nickase-Mutante. Zwei Punktmutationen wurden in Exon 8 des Hepatozyten-Kernfaktor-4-alpha-Locus (HNF4α) in humanen embryonalen Stammzellen (hES-Zellen) eingeführt.

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Human Pluripotent Stem CellsGenome EditingCRISPR-Cas9Seamless Genome EditingTargeted Gene InsertionLaminin 521MTeSR1 MediumCell DissociationNucleofectionSingle Guide RNATargeting Vector

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Wang, Y., Smith, A. J. H., Hay, D. C. Introducing Point Mutations into Human Pluripotent Stem Cells Using Seamless Genome Editing. J. Vis. Exp. (159), e61152, doi:10.3791/61152 (2020).

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