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より厳格な特異性を有する制限エンドヌクレアーゼのインビトロ指向進化
JoVE Journal
Genetics
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JoVE Journal Genetics
In Vitro Directed Evolution of a Restriction Endonuclease with More Stringent Specificity
DOI:

09:16 min

March 25, 2020

,

Chapters

  • 00:05Introduction
  • 00:49Split-and-Mix Synthesis of Mutagenic Primers
  • 02:34Performing Compartmentalized In Vitro Transcription-translation Reaction
  • 05:07Continued Processing of Libraries and Selection
  • 07:20Results: Examples of Screening of NlaIV Variants for Sequence Specificity Alteration
  • 08:16Conclusion

Summary

Automatic Translation

新しい配列特異性を有する制限エンドヌクレアーゼは、部分的に縮退配列を認識する酵素から開発することができる。ここでは、NlaIV酵素の配列特異性を変更するために使用した詳細なプロトコルを提供します。プロトコルの主な成分は、転写/翻訳反応のインビトロ区画化と新しい配列特異性を有するバリアントの選択である。

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