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より厳格な特異性を有する制限エンドヌクレアーゼのインビトロ指向進化
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In Vitro Directed Evolution of a Restriction Endonuclease with More Stringent Specificity
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より厳格な特異性を有する制限エンドヌクレアーゼのインビトロ指向進化

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March 25, 2020

DOI:

10.3791/60807-v

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10.3791/60807-v

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March 25, 2020

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1International Institute of Molecular and Cell Biology, Warsaw (IIMCB)

Summary

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新しい配列特異性を有する制限エンドヌクレアーゼは、部分的に縮退配列を認識する酵素から開発することができる。ここでは、NlaIV酵素の配列特異性を変更するために使用した詳細なプロトコルを提供します。プロトコルの主な成分は、転写/翻訳反応のインビトロ区画化と新しい配列特異性を有するバリアントの選択である。

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In Vitro Directed EvolutionRestriction EndonucleaseSequence SpecificityIn Vitro CompartmentalizationDirected EvolutionSubsaturation MutagenesisOligonucleotide SynthesisOil Surfactant MixtureLibrary Preparation

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Skowronek, K. J., Bochtler, M. In Vitro Directed Evolution of a Restriction Endonuclease with More Stringent Specificity. J. Vis. Exp. (157), e60807, doi:10.3791/60807 (2020).

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